血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

 【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser（RGDS）对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷（ADP;终浓度5μmol/L,下同）诱导血小板聚集的最大聚集率（rPA,max）、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度（50、100、200、400、800μmol/L）的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为（3.5±0.6）%;ADP激动的血小板CD62p表达率为（65.6±13.8）%,两组比较有显著性差异（P〈0.01）;50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时（200、400、800μmol/L）,其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度〈200μmol／L时，对ADP诱导的血小板释放反应无影响；RGDS浓度≥200μmol/L时，可抑制ADP诱导的血小板释放反应；与RGDS显著的抗聚集效应相比，其对血小板释放反应的影响比较小：RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。     

血小板GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对GPIIb/IIIa活化的影响

目的：探讨GPⅡb/Ⅲa 拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对ADP诱导的血小板GPⅡb/Ⅲa活化的影响。方法GP II b／11I a特异性抗体PAC-1标记活化GP II b／11I a,流式细胞仪检测静息及 ADP（5μmol/L）诱导的血小板PAC-1表达率。结果静息状态下的血小板PAC-1表达率为（0.80±0.85）％;在ADP（5μmol/L）激动下,PAC-1表达率为（77.27±9.47）%;RGDS以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率,IC50值为206μmol/L;Nifedipine能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率,IC50值为178μmol/L;RGDS联合Nifedipine对PAC-1表达的联合抑制率为（60.15±16.35）％,二者的交互效应差异有统计学意义（P〈0.05）。结论GPIIb/IIIa受体拮抗剂RGDS和Ca2＋拮抗剂Nifedipine均抑制ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化,其抑制作用呈浓度依赖性,随拮抗剂浓度增加抑制作用增强;两者对血小板GPIIb/IIIa活化的抑制存在协同作用。     

6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物对血小板聚集的抑制作用

目的观察不同浓度的6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物对二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集的抑制作用。方法将不同浓度的6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物分别加入人富含血小板血浆(PRP)中,用多功能血小板聚集仪测定 ADP 诱导的血小板聚集作用。结果该哒嗪酮类化合物对 ADP 诱导血小板聚集有剂量依赖性抑制作用,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为1.04μmol/L 和2.80μmol/L。结论新的6-(4-取代苯基)哒嗪酮类化合物具有较强的抑制 ADP 诱导的血小板聚集作用。     

黄连素的抗血小板作用

黄连素(BR)是临床治疗肠道细菌感染的常用药物。1987年我们发现它还有抗血小板作用。现简要报道初步结果如下:以家兔血小板为实验材料,使用发光血小板聚集仪,制备富含血小板血浆及贫含血小板血浆。血小板激活剂有ADP、钙离子载体A23187、花生四烯酸(AA)及胶原。它们在试验系统中的最终浓度依次分别为6.6、3.1μmol/L,1.43mmol/L及6.9mh/L。在本实验条件下BR对血小板变形反应的抑制作用为胶原>A23187>AA>ADP;对血小板聚集反应的抑制作用和对血小板释放ATP的抑制作用均为胶原     

微流控芯片技术和流式细胞术检测替格瑞洛抗血小板疗效

目的 应用微流控芯片技术和流式细胞术体外分析剪切力作用下替格瑞洛的抗血小板疗效。方法 采用微流控芯片技术检测300/s、1500/s剪切率条件下替格瑞洛对血小板聚集行为的影响,以血小板聚集体表面覆盖率为量化指标,计算替格瑞洛半抑制率;运用光学比浊法验证替格瑞洛抑制ADP诱导的血小板聚集效应;应用微流控芯片构建体外狭窄血管模型,探究高剪切率作用下血小板反应性,并采用流式细胞术分析替格瑞洛对高剪切诱导活化的血小板膜表面纤维蛋白原受体(PAC-1)和P-选择素(CD62P)表达的影响。结果 在300/s、1500/s剪切率流动条件下,替格瑞洛呈浓度依赖性抑制血小板聚集,300/s较1500/s抑制程度更明显(P均<0.001),当浓度≥4μmol/L时几乎完全抑制血小板聚集;替格瑞洛抑制ADP诱导的血小板聚集效应与流动条件下的结果相似,亦呈浓度依赖性抑制血小板聚集;替格瑞洛能够抑制PAC-1和CD62P的表达。结论 应用微流控芯片技术分析血小板聚集和流式细胞术检测血小板活化,与仅用ADP诱导的基于聚集的分析相比,可确定不同患者对替格瑞洛反应的差异性。     

新哒嗪酮类化合物抑制血小板聚集的研究

目的 观察不同浓度的6-(4-取代苯甲酰氨基苯基)哒嗪酮类化合物对二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集的抑制作用.方法 将不同浓度的6-(4-取代苯甲酰氨基苯基)哒嗪酮类化合物分别加入人富含血小板血浆(PRP)中,用多功能血小板聚集仪测定ADP诱导的血小板聚集作用.结果 该新哒嗪酮类化合物对ADP诱导血小板聚集有剂量依赖性抑制作用,其半数抑制浓度IC50(μmol/L)分别为1.04、2.80、3.01、7.32.结论 6-(4-取代苯甲酰氨基苯基)哒嗪酮类化合物具有较强的抑制ADP诱导的血小板聚集作用.     

苯并芘对血小板聚集和P-选择素表达的影响

目的:通过比较苯并芘对ADP、胶原和凝血酶三种刺激剂诱导血小板聚集和P-选择素表达的影响,探讨苯并芘对血小板活化的作用。方法:抽取健康志愿者静脉血液20 ml,采用聚集仪检测血小板在苯并芘和不同刺激剂下的聚集率,并用流式细胞仪检测血小板表面P-选择素的表达情况。结果:10μmol/L、1μmol/L和0.1μmol/L苯并芘均不能引起血小板聚集,经10μmol/L苯并芘孵育血小板后,在胶原和凝血酶的刺激下也不能增强血小板的聚集。但是,经苯并芘孵育后的血小板在ADP的刺激下聚集率达到(80±10)%,与未经苯并芘孵育的血小板相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测P-选择素的表达结果显示苯并芘孵育后的血小板能在ADP诱导下P-选择素表达增强(P<0.01),而凝血酶则不能引起该改变。结论:苯并芘刺激ADP诱导的血小板聚集和P-选择素表达增强很大程度上是通过ADP介导的信号通路。     

普伐他汀和CRP对ADP诱导的血小板凝血酶受体 PAR-1表达的调节

目的：探讨普伐他汀对二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板PAR‐1表达的影响及机制。方法体外分离富血小板血浆,分别给予C反应蛋白（CRP）、普伐他汀干预和ADP刺激进行体外研究。试验分组分别为：对照组,单纯ADP组,低浓度普代他汀＋ADP组,高浓度普伐他汀组＋ADP组,CRP组,普伐他汀＋CRP联合组。采用流式细技术检测PAR‐1和LOX‐1平均荧光强度（M FI）。采用酶联免疫试验检测TXB2和F1＋2水平。结果5μmol／L ADP刺激能促使血小板PAR‐1表达增加35％。50μg／mL CRP显著降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达（P＜0．01）。1μmol／L、10μmol／L普伐他汀均显著降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达（P＜0．01）。联合应用CRP和普伐他汀更能降低ADP诱导的血小板PAR‐1表达,较单独使用CRP或普伐他汀降低更显著（P＜0．05）。单纯ADP刺激后TXB2较基础时明显增高（P＜0．01）,50μg／mL CRP、10μmol／L普伐他汀干预后ADP刺激的TXB2分别下降为（112．68±24．48）pg／mL、（146．48±46．54）pg／mL ,与单纯ADP刺激比较,差异均有统计学意义（P＜0．01）。50μg／mL CRP显著增加ADP诱导的F1＋2水平（P＜0．01）,10μmol／L普伐他汀对ADP诱导F1＋2的生成无明显影响。普伐他汀呈浓度依赖性的方式降低ADP诱导的血小板LOX‐1表达（1μmol／L和10μmol／L普伐他汀处理后M FI分别为：1．80±0．19和1．62±0．16）,与单纯ADP刺激后LOX‐1表达（MFI：3．16±0．23）比较,差异有统计学意义（P＜0．01）。50μg／mL CRP对ADP刺激的血小板LOX‐1表达无明显影响。结论 PAR‐1在ADP诱导的血小板活化中起重要作用,普伐他汀和CRP通过不同机制明显降低ADP诱导的血小板PAR‐1的表达,提示在炎症状态下他汀仍能起着重要的抗血栓作用。     

紫杉醇在体外对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集的影响

目的 研究紫杉醇在体外对二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板聚集的影响。方法 血小板混悬液中加入不同浓度〔0（对照组）、0.01 ng/mL、0.1 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1 000 ng/mL〕的紫杉醇,在最佳ADP终浓度和最佳孵育时间条件下,分别测定血小板聚集率。结果 在ADP终浓度为10 μmol/L、孵育时间为10 min条件下,随着紫杉醇浓度的增高,其促进ADP诱导的血小板聚集的作用也随之增加,不同浓度紫杉醇间血小板聚集率的比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 紫杉醇能在体外增强ADP诱导的血小板聚集,且诱导作用呈浓度依赖性。     

毛葡萄叶水提物抑制血小板聚集的初步研究

目的探讨毛葡萄叶水提物（Gx）对血小板聚集的影响。方法分离健康人的血小板,与不同生药浓度的Gx于37℃孵育10 min后,检测胶原（collagen）和凝血酶（thrombin）诱导的人血小板聚集的变化。小鼠腹腔注射Gx后,分离小鼠血小板,检测二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板聚集的变化。结果 Gx对2μg/ml collagen诱导的血小板聚集有显著抑制作用（P〈0.05）,且呈现Gx的剂量依赖性（P〈0.05）;只有0.01 mg/ml的Gx对0.1 U/mlthrombin诱导的血小板聚集有抑制作用,且不呈现Gx的剂量依赖性。同时,Gx可抑制ADP诱导的腹腔注射Gx的小鼠血小板聚集,且呈现ADP剂量依赖性。结论 Gx具有明显抗血小板聚集作用,为开发抗血栓药物提供了实验依据。