miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖

目的 探索 miR-30b-5p 在结直肠癌中的作用及机制.方法 收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量 PCR检测 miR-30b-5p表达.将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29 细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入 HCT-116 细胞中;CCK-8 试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体( LDLR)的表达,Western blot检测 LDLR 蛋白表达;在转入 miR-30b-5p inhibitors 的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖.结果 与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢.结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖.     

miR-27b-3p通过靶向SSRP1调控骨肉瘤细胞的生长

目的：探究miR-27b-3p对骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法：(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析miR-27b-3p在骨肉瘤细胞系中的表达；(2)CCK-8实验、集落形成实验及流式细胞术检测miR-27b-3p以及SSRP1对骨肉瘤细胞生长的影响；(3)使用在线数据库预测miR-27b-3p的靶基因并进行筛选，使用双荧光素报告酶实验测定miR-27b-3p与结构特异性识别蛋白1(structure-specific recognition protein-1,SSRP1)的关系；(4)干扰效率以及过表达效率使用Western blot实验验证。结果：(1)miR-27b-3p在骨肉瘤细胞和临床样本中低表达，过表达miR-27b-3p会抑制骨肉瘤细胞的生长；(2)生物信息学分析和双荧光素报告酶实验证实SSRP1为miR-27b-3p的靶基因，SSRP1表达受miR-27b-3p的直接调控；(3)干扰SSRP1的表达会抑制骨肉瘤细胞的增殖，促进凋亡；(4)过表达SSRP1会部分逆转miR-27b-3p对骨肉瘤细胞生长的抑制效...     

外周血miR-92b-5p与miR-148b-3p在2型糖尿病进展至糖尿病肾病中的表达及交互作用

目的 探究2型糖尿病(type 2 diabetes, T2DM)进展至糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)过程中血清微小RNA(microRNA,miR)-92b-5p、miR-148b-3p水平变化和作用。方法 选取我院T2DM患者400例开展前瞻性研究，其中200例非DN患者作为T2DM组，200例DN患者作为DN组。比较两组临床资料、血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平，并比较DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平，分析DN组血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平与临床分期的相关性，并分析T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p与miR-148b-3p的交互作用，及血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的价值。结果 DN组血肌酐(serum creatinine, SCr)、血清miR-148b-3p水平高于T2DM组，估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)及血清miR-92b-5p水平低于T2D...     

miR-30b-5p在乳腺癌中的表达及靶基因预测与生物信息学分析

目的 为深入研究miR-30b-5p在乳腺癌形成和发展中的作用提供理论依据.方法 原位杂交法(ISH)检测乳腺癌与癌旁组织中miR-30b-5p的表达.探针荧光定量PCR比较乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况.软件预测miR-30b-5p的靶基因,进行KEGG及GO富集分析.结果 ISH显示乳腺癌组织中miR-30b-5p表达明显下调,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.01);miR-30b-5p的表达水平与 TNM 分期及远处转移等有关(P< 0.01),而与年龄和淋巴结转移无关(P>0.05).比较MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-415,MDA-MB-453,和 MDA-MB-468这5株乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况,发现较正常乳腺组织呈不同程度的低表达,并且以侵袭性最强的MDA-MB-231细胞的表达最低(P<0.01).在乳腺癌中,KEGG分析显示miR-30b-5p的靶基因参与了Pathways in cancer、P53 signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,GO分析显示miR-30b-5p具有细胞代谢调控、基因表达调控、RNA代谢调控等生物功能.结论 miR-30b-5p在乳腺癌中表达明显下调,可能通过参与Pathways in cancer、P53 signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,对乳腺癌细胞的代谢、基因表达等功能具有重要影响.     

lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌组织的表达变化

目的 分析lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌(BC)组织的表达变化。方法 选取2017年1月6日至2020年1月6日本院收治的90例膀胱癌病患为研究样本，病患接受手术治疗疾病，留取膀胱癌组织、癌旁组织。应用荧光实时定量PCR法对于以上组织内的lncRNA MALAT1、miR-146b-5p进行测定，分析以上物质在BC组织内的表达变化。结果 癌旁组织和BC内miR-146b-5p、lncRNA MALATI相对表达量对比具有统计学意义(P<0.05);BC淋巴结转移和miR-146b-5p、lncRNA MALATI表达存在相关性；BC组织内的miR-146b-5p、lncRNA MALAT1表达情况呈负相关(P<0.05)。结论 膀胱癌组织内的miR-146b-5p表达降低，lncRNA MALAT1表达上升。以上两者负相关。这种情况的出现和病患淋巴结转移有关联性，日后其可能成为诊治膀胱癌疾病的重要标记物。     

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.     

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-15b-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-15b-5p在胃癌中的表达变化,探索其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测35例胃癌组织及其对应的癌旁正常胃组织中miR-15b-5p的表达;构建miR-15b-5p过表达载体及合成miR-15b-5p抑制剂,并转染胃癌细胞系AGS;应用MTT法检测胃癌细胞增殖能力变化;采用流式细胞术分析miR-15b-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果:miR-15b-5p在胃癌组织中的表达显著下调(P<0.01);转染miR-15b-5p过表达载体抑制了胃癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期,并诱导了细胞凋亡;转染miR-15b-5p抑制剂促进了胃癌细胞的增殖,使细胞进入S和G_2/M期,并抑制细胞凋亡。结论:miR-15b-5p在胃癌中下调,抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

转化生长因子β调控miR-200b-200a-429启动子活性

目的 探讨转化生长因子β（TGF-β）对miR-200b-200a-429簇表达的影响,对其调控机制作初步研究。 方法 使用RT-PCR方法检测TGF-β对人肾小管上皮细胞HK-2 miR-200a、miR-200b和miR-429表达的影响。PCR方法扩增出miR-200b-200a-429簇启动子序列,构建miR-200b-200a-429启动子荧光素酶报告基因表达载体,转染至HK-2细胞,检测其荧光素酶活性。观察TGF-β对miR-200b-200a-429转录的表达调控。 结果 实时定量PCR检测结果显示TGF-β作用细胞24 h后下调了miR-200a、miR-200b和miR-429的表达。成功构建miR-200b-200a-429启动子荧光素酶表达载体,测序正确,然后利用双荧光素酶报告基因系统证实构建的报告基因载体启动子具有活性,发现TGF-β可以抑制miR-200b-200a-429启动子活性（P<0.05）。 结论 TGF-β可以调控miR-200b-200a-429启动子的活性。     

慢性心力衰竭患者血浆miRNA表达谱分析

目的：对慢性心力衰竭(CHF)患者的血浆miRNA进行二代测序,探讨CHF患者血浆中miRNA的表达差异。方法收集2013年7月至2015年6月间在北京大学深圳医院治疗的40例CHF患者和10例健康对照个体,应用第二代高通量测序技术对其血浆miRNA进行测序,寻找差异表达的miRNA。另收集同期CHF患者和健康对照个体各96例,用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应对差异表达的miRNA进行验证。结果与健康对照者相比,高通量测序显示在CHF患者的血浆中miR-184、miR-651-5p、miR-130b-5p、miR-203a-3p、miR-548e-3p和miR-106a-5p的表达水平存在显著上调,miR-31-5p和miR-5091的表达水平存在下调,逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆miRNA的表达差异与高通量测序的结果相符。结论 CHF患者的血浆miRNA与健康个体的表达谱存在差异,差异表达的miR-184、miR-651-5p、miR-130b-5p、miR-203a-3p、miR-548e-3p、miR-106a-5p、miR-31-5p和miR-5091或许与CHF的发生有关。     

冠心病患者心外膜脂肪组织和血浆中脂联素相关miR-371b-5p表达及其对脂肪细胞因子分泌的影响

目的：探讨冠心病（CAD）患者心外膜脂肪组织（EAT）和血浆中脂联素（APN,又称ADIPOQ）相关差异表达miR-371b-5p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4（KLF4）、白细胞介素6（IL-6）和单核细胞因子趋化蛋白1（MCP-1）分泌的影响,阐明miR-371b-5p在CAD中的作用机制。方法：收集CAD （CAD组,n=34）和非CAD （non-CAD组,n=16）患者的EAT和血液标本,采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测2组患者EAT和血浆中miR-371b-5p的表达水平。将诱导成功的3T3-L1前体脂肪细胞分为空白对照组（不做任何处理）、miR-371b-5p过表达组（转染miR-371b-5p模拟物）和miR-371b-5p抑制剂组（转染miR-371b-5p抑制剂）。qRT-PCR法检测转染24 h后各组3T3-L1前脂肪细胞中APN、KLF4、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平,并对miR-371b-5p进行生物信息学分析。结果：与non-CAD组比较,CAD组患者EAT和血浆中miR-371b-5p表达水平均升高（P<0.01）。与空白对照组比较,miR-371b-5p过表达组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4 mRNA表达水平降低（P=0.043,P=0.045）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平升高（P=0.037,P=0.041）;miR-371b-5p抑制剂组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4mRNA表达水平升高（P=0.025,P=0.027）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平降低（P=0.039,P=0.041）。miR-371b-5p预测靶基因富集于多个生物学功能及过程,KEGG通路主要富集于脂肪细胞因子等信号通路;蛋白互作,miR-371b-5p预测靶基因APN、瘦素（LEP）和AKT1编码蛋白位于互作网络中核心位置。结论：CAD患者EAT中过表达miR-371b-5p转染成熟的3T3-L1脂肪细胞后可使细胞的抗炎因子表达水平降低,炎性因子表达水平升高,miR-371b-5p有望成为CAD治疗的新靶点。     

miR-216b-5p对喉癌TU686细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的 探讨miR-216b-5p对喉鳞状细胞癌（LSCC）TU686细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,分析其在喉癌细胞中的靶基因及其可能的作用机制。 方法 TU686细胞分为对照组和miR-216b-5p组,对照组细胞通过慢病毒感染无义序列,miR-216b-5p组细胞通过慢病毒感染过表达miR-216b-5p。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组细胞中miR-216b-5p表达水平,克隆形成实验检测2组细胞克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测2组细胞凋亡率。通过TargetScan网站预测miR-216b-5p的潜在靶基因,采用RT-qPCR法检测靶基因mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p与靶基因间的靶向关系。 结果 慢病毒感染后,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中miR-216b-5p表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,miR-216b-5p组细胞克隆形成率和划痕愈合率明显降低（P<0.01）,侵袭细胞数明显减少（P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。TargetScan网站预测,自噬相关基因5（ATG5）为miR-216b-5p潜在的靶基因,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中ATG5 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实ATG5与miR-216b-5p之间存在靶向关系。 结论 miR-216b-5p通过抑制喉癌细胞的增殖、迁移、侵袭和诱导细胞凋亡进而发挥抑癌作用,其机制可能与靶向调节ATG5的表达水平有关。     

稳定过表达/下调表达miR-125b-5p Jurkat T细胞株的建立及验证

目的 构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。 方法 扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测下游靶基因UVRAG表达情况。采用单因素方差分析,2组之间比较应用LSD检验,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 hsa-miR-125b-5p慢病毒过表达载体及对照转染Jurkat T细胞后均有绿色荧光表达,hsa-miR-125b-5p慢病毒干扰载体及对照转染Jurkat T细胞后均有红色荧光表达;RT-qPCR显示和对照组比较慢病毒过表达载体组miR-125b-5p表达水平明显增高(P<0.01),慢病毒干扰载体组miR-125b-5p表达水平明显降低(P<0.01),差异均有统计学意义。Western blotting显示和对照组比较,慢病毒过表达载体组下游靶基因UVRAG表达明显降低(P<0.001),慢病毒干扰载体组下游靶基因UVRAG表达明显升高(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论 成功建立了稳定过表达/下调表达hsa-miR-125b-5p的Jurkat T细胞株。      

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

血清外泌体miR-20b-5p miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用

目的 探究血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用价值。方法 选取2015年12月至2018年12月河南科技大学第一附属医院胸外科收治的124例非小细胞肺腺癌患者为观察组，另选取120例同期于本院接受体检的健康体检者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链法(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-20b-5p、miR-107表达水平，受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-20b-5p、miR-107水平检测对非小细胞肺腺癌的早期诊断价值，Kaplan-Meier生存分析研究miR-20b-5p、miR-107水平与患者预后的关系。结果 观察组的血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，血清外泌体miR-20b-5p、miR-107检测诊断非小细胞肺腺癌的AUC值分别为0.766、0.821,最佳截断值分别为1.81、1.27。观察组患者中，117例完成随访，7例失访。随访3年后，64例患者死亡，53例患者存活。根据患者的生存状态绘制ROC曲线，确定miR-20b-5p、mi...     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨 miR-125b-5p 调控 RAB3D 在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过 qRT-PCR 检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达明显下调（P<0.05）。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p 表达量升高,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中 RAB3D 的蛋白表达量下降（P<0.05）;miR-125b-5p 表达量降低,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P<0.05）,而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断（P<0.05）。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

miRNA-146b-3p在早期非小细胞肺癌中的诊断价值

目的探讨miR-146b-3p在早期非小细胞肺癌、良性肺结节与健康人群外周循环血中的表达差异及诊断价值。方法通过RT-PCR测定118例早期非小细胞肺癌、42例良性肺结节与48例健康人群外周循环血中的6种miRNAs（miR-15b-5p、miR-17-5p、miR-19a-3p、miR-20a-5p、miR-92a-3p、miR-146b-3p）的相对表达量,并进行统计学分析评价其在早期的诊断价值。结果相较于良性肺结节患者与健康人群,miR-146b-3p在非小细胞肺癌患者外周循环血中呈显著过表达。用ROC曲线来评价miR-146b-3p的诊断价值,在肺癌与良性结节组中： miR-146b-3p的曲线下面积为0.77,当取临界值0.01时,灵敏度为75%,特异性为71%;在肺癌与健康人组中： miR-146b-3p的曲线下面积为0.93,当取临界值0.72时,灵敏度为89%,特异性为84%。Logistic回归模型表明： 在肺癌与良性结节组中,年龄与miR-146b-3p为独立危险因素,其ROC曲线下面积为0.81,当取临界值0.85时,灵敏度为65%,特异性为89%;在肺癌与良性结节组中,miR-19a-3p与miR-146b-3p为独立危险因素,其ROC曲线下面积为0.98,当取临界值0.90时,灵敏度为94%,特异性为95%。结论miR-146b-3p对早期非小细胞肺癌、良性肺结节与健康人群有一定鉴别意义,可作为临床一种新的血液标志物。