人红白血病多药耐药细胞裸鼠移植瘤模型建立的初步研究

目的：建立耐药特性稳定的裸鼠移植瘤动物模型,为进行体内肿瘤耐药机制研究和逆转药物的筛选提供实验模型。方法：体外培养白血病细胞系k562／A02及k562细胞,建立裸鼠的皮下肿瘤,K562／A02耐药细胞接种于裸鼠右背侧皮下,而亲本l〈562细胞接种裸鼠左背侧皮下,接种细胞数分别为1×10。、5×10。、1×10。、5×10’细肜只,观察肿瘤成瘤情况及生长特性,并比较体内耐药模型与体外细胞株耐药倍数的变化,同时利用免疫组织化学染色对裸鼠K562／A02移植瘤多药耐药蛋白Pgp进行鉴定。结果：1）K562裸鼠移植瘤的成瘤率为78．13％,K562／A02裸鼠移植瘤的成瘤率为81．25％。大约于第5—10天成瘤,两种肿瘤生长速度无明显差别;2）裸鼠K562／A02移植瘤肿瘤细胞和体外培养原代细胞对阿霉素的IC50分别为169．38ug／ml和181．69ug／ml,而K562移植瘤和体外k562细胞的IC50分别为3．47ug／ml和3．61ug／ml,耐药倍数无明显差异;3）K562／A02裸鼠移植瘤肿瘤细胞Pgp表达稳定。结论：以K562／A02细胞建立的裸鼠移植瘤模型,仍保持近似体外的耐药活性,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型。     

人膀胱癌细胞系BC-6的建立及其生物学特性

目的:建立人膀胱癌细胞系BC-6,为膀胱癌的基础研究提供实验模型.方法:18例膀胱癌标本采用组织块直接培养法、8例采用细胞悬液培养法行原代培养;其中12例同时行裸鼠皮下移植,在皮下生长后,连续裸鼠体内传代3次,再行体外培养.结果:组织块直接培养和细胞悬液培养均未成功.12例裸鼠皮下接种肿瘤有3例生长,l例裸鼠意外死亡,l例裸鼠体内传代F2代肿瘤消失.1例肿瘤裸鼠皮下接种后生长较快,裸鼠体内传代3次后,取部分肿瘤组织体外培养得到膀胱癌细胞系BC-6,其形态结构,分化程度与原发瘤保持一致,染色体形态仍为人类核型,众数维持在66～72之间,占82%,细胞周期分析G1期0.58,G2期0.08,S1期0.35,细胞群体培增时间为44h.结论:通过裸鼠体内移植瘤建立的膀胱癌细胞系BC-6,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代1 a以上,传代92代.细胞形态不变,生长周期恒定,己经成为一个稳定的细胞系.     

人胃癌裸鼠移植前后组织形态学及免疫组织化学的对比研究

人胃癌移植裸鼠体内后呈进行性生长,连续传6代,历时1年,移植成功率为77％(10/13),未发现转移。移植瘤在组织形态学及分泌CEA等生物学特性方面,基本保持人原发肿瘤的特点。人胃癌裸鼠移植瘤的建立为深入研究人胃癌的生物学特性及实验治疗提供了实验模型。     

人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察

目的 建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型.方法 采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块,建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个.观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率,常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况.电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2(COX-2).结果 胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100%(16/16),淋巴结广泛转移率为87.5%(14/16),肝转移发生率为75.0%(12/16),腹腔积液形成率为12.5%(2/16).结论 原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点,具有人胃癌的生物学活性.     

人肺鳞癌细胞系CHLH-1建立

目的:建立人肺鳞癌细胞系,探讨其生物学特性.方法:取人肺鳞癌新鲜手术标本,经组织块体外培养并克隆建系,命名为CHLH-1.采用光镜、电镜、染色体核型分析及异种移植瘤实验对细胞系生物学特性进行观察.结果:原位肿瘤、细胞系及移植瘤标本经光镜、电镜证实该细胞系具有鳞状上皮性恶性细胞特征,并观察了其体外生长曲线、倍增时间和分裂指数;染色体核型分析众数为60～68,为亚三倍体;裸鼠皮下异种移植形成移植瘤.结论:根据细胞系特征显示该细胞系是一新建的肺鳞癌细胞系.     

人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型、细胞系建立及其生物学特性研究

目的建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系.方法将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下,成瘤后行鼠间传代,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测.结果历时14个月传至5代,皮下移植瘤存活率为90%,持续6个月,体外建系(OVA-319)细胞生长稳定.镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征;染色体分布在12～46条之间,多为异倍体,显示人类肿瘤异常染色体;流式细胞术和RT-PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA-319细胞结果一致,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿,MAGE-2基因在mRNA水平异常表达.结论人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA-319细胞系为人类肿瘤的研究提供了良好的实验材料.     

PDX模型在胃癌研究方面的应用与挑战

在我国,胃癌发病率随着人口老龄化的越来越严重将成上升趋势,而它又是死亡率较高的恶性肿瘤。现如今,缺乏有效的抗肿瘤药物是关键因素,故临床前研究至关重要,动物模型与其密切相关。现代研究强调肿瘤的精准治疗,于是人源性异种移植模型(patient-derived xenograft,PDX)应运而生,它与病人原始肿瘤的生物特征有很高的一致性,弥补了传统细胞系模型的不足,为肿瘤研究提供了新的平台选择。本文综述了胃癌PDX模型的建立方法,归纳了近几年来的研究应用,提出了建立胃癌PDX模型的挑战。     

人源性食管癌移植瘤模型的建立、评价及其应用的初步研究

目的用,晦床新鲜肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠以建立人源性食管癌移植瘤模型并初步评估其应用性。方法将36例食管癌手术切除组织分别移植于SCID小鼠皮下,待移植瘤长成后对其进行裸鼠间连续传代。当每例模型的移植瘤体积生长至500-1000mm3时,收集肿瘤组织作4种处理,一部分继续用于鼠间传代,一部分组织冻存于液氮中用于将来肿瘤组织复苏模型重建,一部分组织作速冻处理用于DNA／RNA提取,一部分组织固定于福尔马林溶液中作石蜡包埋和HE染色用于病理学研究。选用其中4例模型ESX00l、Esx002、ESX003和ESX004进行体外药敏实验和体内药效实验以评价4例人源性食管癌移植瘤对常用抗肿瘤药物的敏感性。结果36例食管癌手术切除组织接种和传代,成功23例,成功率为63．89％。异种移植瘤生长稳定并能连续传代,各代移植瘤组织形态学特征与患者肿瘤组织一致。23例液氮保存的人源食管癌移植瘤组织复苏后移植于SCID小鼠皮下,21例成功生长肿瘤,复苏成功率为91．30％。体外药敏实验表明4例人食管癌模型对临床上常用的抗肿瘤药物索拉非尼（Sorafenib）、5-氟尿嘧啶（5．Fu）、阿霉素（Doxorubicin）、特罗凯（Tarceva）、和伊立替康（Irinotecan）敏感;对多西紫杉醇（Docetaxel）敏感性存在病例差异,其中ESX003和ESX004对多西紫杉醇无反应。体内药效实验表明Irinotecan在100mg／kg剂量下对4例人食管癌裸鼠移植瘤模型有较强的抑制作用,相对肿瘤增殖率分别为22．02％、39．63％、21．69％和39．70％。结论成功建立了人源性食管癌小鼠移植瘤模型,移植瘤保留了,临床食管癌的病理特征。冻存的肿瘤组织,经复苏后仍可建立小鼠移植瘤模型,提示本研究建立的人源性食管癌移植瘤模型具有可持续应用性。4例人源性食管癌移植瘤模型的体外药敏实验和体内药效实验均表明人源性食管癌移植瘤模型具有很好的应用价值,可用于抗肿瘤药物的筛选及转化医学研究。     

工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察

目的建立工程化人胃癌裸鼠原位模型,并利用活体荧光成像技术进行观察。方法以胶原为支架材料,表达绿色荧光的人胃癌BGC823-EGFP细胞为种子细胞,建立人胃癌体外模型;倒置显微镜观察肿瘤细胞生长状态;通过注射将体外模型移植到裸鼠体内;活体荧光成像评估胃癌原位模型的建立;解剖观察原位肿瘤的移植成功率,生长及转移情况;冰冻切片及HE染色进行组织学观察。结果工程化人胃癌体外模型中肿瘤细胞呈立体生长;原位肿瘤成瘤率100%,可见腹腔重要脏器转移;组织学特征呈典型低分化腺癌;活体荧光观察可见原位肿瘤形成,但效果不理想。结论建立了工程化人胃癌裸鼠原位模型;绿色荧光成像效果较差,活体荧光成像观察应选用穿透力较强的荧光。     

人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型的建立和改进

目的：建立人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型。方法：用人胃癌细胞SGC-7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤。将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆肌层，观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化等生物学特性。结果：肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特点，人胃癌裸鼠原位移植模型成瘤率为100％(20／20)，肝脏转移率为45％(9／20)。结论：人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似，为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型。     

肺癌人源性肿瘤组织异种移植模型的组织学变化及其p63、napsinA和TTF-1的表达差异

目的建立肺癌人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)裸鼠模型,检测原代肺癌组织标本和第三代(F3)PDX模型组织标本内组织形态结构的变化和p63、napsin A和TTF-1的表达差异性。方法取临床肺癌新鲜手术切除标本12例,裸鼠皮下移植建立PDX模型,HE染色比较原代患者肿瘤组织与移植瘤组织结构和细胞形态变化与否;免疫组化的方法检测原代组织和F3代组织标本内p63、napsin A和TTF-1的表达水平的差异性。显微镜观察。结果成功建立传至第三代的PDX模型5例,4例肺鳞癌,1例肺腺癌。PDX模型和患者原代肿瘤具有相同的组织学特点和排列结构;p63在肺鳞癌患者及其PDX模型癌细胞中表达阳性率为84.3%和96%,两者之间差异无显著性(P0.05),而在肺腺癌中呈阴性表达。Napsin A在肺腺癌患者及其PDX F3癌细胞中阳性表达率分别为66%和72.4%,两者之间差异无显著性(P0.05)。TTF-1在肺腺癌患者及其PDX F3癌细胞中阳性表达率分别为91%和85%,两者之间差异也无显著性(P0.05)。Napsin A和TTF-1在肺鳞癌中均呈阴性表达。结论本实验室所建立的肺癌PDX模型基本保留了部分原代肿瘤的组织学特性,为临床前药效的个性化筛选评估以及生物标志物的鉴定提供了有效的研发资源。     

基于胰腺癌患者来源异种移植模型的化疗药物筛选

目的 利用胰腺癌PDX 模型,评估临床化疗药物治疗效果,筛选个体化治疗方案?方法 将新鲜的胰腺癌手术标本移植裸鼠皮下,建立PDX 模型并稳定传代;利用STR 基因分型检测PDX 模型肿瘤组织的溯源性;选择临床使用的奥沙利铂?吉西他滨和伊立替康三种化疗药物进行治疗,并测量肿瘤体积;利用TGD 值数学模型方法,辅以血浆CA19 -9 检测评估三种化疗药物的治疗效果?结果 PDX 模型肿瘤组织样本的溯源性为99.99%,与原发瘤保持一致;与对照组相比,伊立替康组和吉西他滨组均具有显著的治疗效果(c =0.001),且吉西他滨抑瘤效果更为明显;伊立替康的药物毒性作用最小,吉西他滨次之?结论 成功建立胰腺癌PDX 模型并稳定传代,通过TGD 值数学模型法筛选,发现吉西他滨抑制肿瘤生长效果最为显著,推荐其作为该胰腺癌个体化治疗首选药物?     

人脑胶质母细胞瘤PDX模型的建立

目的：探讨患者来源的异种移植（patient derived xenograft,PDX）胶质母细胞瘤模型的建立方法,为临床和生物学研究提供重要的理论依据和技术支持。方法：收集胶质母细胞瘤组织,建立皮下肿瘤模型,待皮下肿瘤生长取出肿瘤,分散肿瘤细胞并种于小鼠颅内。HE染色比较原发肿瘤组织与PDX肿瘤形态学特点,免疫组织化学染色方法检测Ki?67的表达,比较肿瘤增殖能力。结果：成功建立人脑胶质母细胞PDX模型,原发肿瘤和PDX肿瘤形态学特点相似,PDX肿瘤保留了原发肿瘤的增殖能力。结论：通过建立PDX模型,可以将PDX作为胶质母细胞瘤患者个体化治疗的重要临床前研究工具。     

肝癌人源肿瘤异种移植模型构建及初步应用

目的建立肝癌人源肿瘤异种移植(patient-derived xenografts,PDX)模型,探讨其在肝癌精准医疗中的作用。方法取临床肝癌新鲜手术切除标本,NCG小鼠皮下接种肿瘤组织建立PDX模型,HE染色比较移植肿瘤组织与患者肿瘤组织形态结构的一致性。将成功传至第三代的PDX模型制备肿瘤细胞悬液,BALB/c裸鼠皮下接种制作肝癌移植瘤模型15只,成瘤后随机分为5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、索拉非尼(sorafenib)组和阴性对照组,每组5只。定期监测各组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量,根据瘤重计算抑瘤率,评估疗效。结果本研究共建成肝癌PDX模型6例,成功率为33.3%(6/18),模型较好的保持了原发肿瘤的特征。1例PDX模型中,5-FU与索拉非尼组肿瘤抑瘤率分别为63.7%和29.6%,5-FU组抑瘤率比较差异有显著性(P0.05),索拉非尼组抑瘤率比较差异无统计学意义,与临床结果相符。结论肝癌PDX模型保持了患者肿瘤组织的组织形态,可以适用于肝癌患者的精准医疗。     

人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型的建立及耐药性检测

目的建立人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型,并检测其多药耐药性,为进行肿瘤多药耐药逆转剂的筛选和体内实验研究奠定基础。方法采用皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;观察裸鼠生长状况;移植瘤生长情况;进行瘤重及瘤体积比较;移植瘤P-gp耐药蛋白表达;原代培养细胞,检测移植瘤模型多药耐药性。结果人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤组织病理学检查为低分化腺癌,移植瘤组织原代细胞培养后,P-gp表达强阳性+++,具有多药耐药性,模型建立成功。结论成功建立了人胃癌SGC7901/VCR裸鼠多药耐药移植瘤模型,为胃癌耐药研究提供了较理想的动物模型。     

胃癌人源性异种移植模型制备中的问题与策略

总结患者来源的胃癌异种移植模型（patient-derived xenograft model,PDX）制备中存在的主要问题,提出相应的解决方案。介绍胃癌PDX模型在靶向药物研究中的独特优势,提出在强调肿瘤个体化模型的同时,要善于运用共性研究思维,分析模型的基因型特征开展肿瘤靶向治疗研究。     

结直肠癌人体肿瘤移植小鼠模型的研究进展

 人体肿瘤移植( patient-derived tumor xenograft, PDX) 模型通过将患者新鲜的肿瘤组织直接移植到免疫缺陷小鼠, 可以较好地保持原发肿瘤的生物学特性及与患者相似的遗传特性和肿瘤异质性, 在临床肿瘤的精准治疗研究中可起到不可替代的作用, 但在其模型建立成功率、时效性和成本控制等方面仍存在不足。本文就人结直肠癌PDX模型构建的实验动物及移植组织类型和方式的选择、最新应用进展和面临的挑战进行综述。     

SGC-7901/HCPT裸鼠皮下移植瘤的建立和鉴定

目的:建立多药耐药人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型并探讨移植瘤的耐药特性。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901和耐药细胞株SGC-7901/HCPT分别接种于裸小鼠左侧背部皮下和右侧背部皮下,在SPF级动物合格环境下饲养,观察肿瘤细胞成瘤情况,用MTT法比较移植瘤细胞对羟基喜树碱的敏感性及免疫组化测定其耐药基因TOPO-Ⅰ表达的变化。结果:SGC-7901和SGC-7901/HCPT裸小鼠移植成瘤率为100%,无自行消退现象。MTT法测定SGC-7901/HCPT和SGC-7901/HCPT/nude的IC50分别为4.686μg/mL和4.381μg/mL,与移植前细胞比较,差异无统计学意义。耐药基因TOPO-Ⅰ表达分别为2.964±0.162和2.953±0.172,差异无著性意义。结论:以SGC-7901/HCPT细胞建立的裸鼠皮下耐药移植瘤模型,仍保持体外的耐药活性和基因表型,为耐药机制和逆转的研究提供了良好的动物模型。     

人源性结肠癌组织异种移植模型在个体化药物治疗中的应用研究

目的 建立结肠癌人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型并研究其在化疗药物筛选中的应用价值.方法 将新鲜的人结肠癌手术标本移植于BAIB/c裸小鼠皮下建立结肠癌PDX模型,稳定传至第3代;将PDX模型肿瘤组织与人肿瘤组织H&E染色,比较其组织形态特征;免疫组织化学检测肿瘤...