JNK在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响

目的：研究（JNK）在惊厥持续状态（SC）幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响。方法：雄性SD幼年大鼠120只分为正常对照组（NC组）、惊厥持续状态组（SC组）、依达拉奉组（EDA组）三大组;各大组均随机分为5组,分别于惊厥后4、12、24、48和72h处死。采用氯化锂-匹鲁卡品法制作惊厥持续状态模型。EDA组在大鼠造模前三天予EDA腹腔注射,每天注射一次,连续3d。TUNEL法检测观察大鼠海马细胞凋亡情况;免疫组化法检测海马p-JNK蛋白表达动态变化;RT-PCR技术检测海马JNK1 mRNA表达的动态变化。结果：SC组在惊厥12h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NC组（P〈0.01）,而ED组TUNEL阳性细胞数均较SC组显著下降（P〈0.01或P〈0.05）。幼年大鼠海马CA1区p-JNK蛋白在SC组表达显著增强,与NC组比较差异有显著性（P〈0.01）,在EDA组表达较SC组明显下降（P〈0.01）。SC组海马JNK1 mRNA表达明显高于NC组（P〈0.01）,而在EDA组JNK1 mRNA的表达较SC组显著降低（ P〈0.01）。结论：SC可诱导JNK的表达,促进SC后海马神经元凋亡;EDA预处理可以影响JNK的表达,减轻惊厥后海马神经元凋亡程度。     

幼鼠惊厥持续状态脑损伤时依达拉奉的神经保护作用

目的 观察幼年大鼠惊厥持续状态后海马CA1区神经细胞损伤的情况,探讨依达拉奉对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法 采用随机数字表法将195只幼年大鼠分为3组,依达拉奉组、惊厥持续状态组和对照组,每组65只,各组再按处死时间点不同分为4、12、24、48和72h5个亚组,每个亚组13只。采用氯化锂-匹罗卡品法制作惊厥持续状态模型,使用依达拉奉进行干预,并观察各组幼年大鼠出现惊厥发作的行为学表现;利用HE染色观察幼年大鼠脑神经元病理形态,电镜观察海马CA1区超微结构变化,原位末端标记（TUNEL）法观察神经元凋亡情况。结果两组大鼠5级惊厥率和平均惊厥潜伏期比较差异有统计学意义（P＜0.05）;与对照组相比,惊厥持续状态组和依达拉奉组12、24、48和72h海马CA1区TUNEL阳性细胞数差异均有统计学意义（P＜0.01）;在惊厥持续状态后,依达拉奉组12、24、48和72h海马CA1区TUNEL阳性细胞数均较惊厥持续状态组下降（P＜0.01）,但在4h,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论惊厥持续状态可导致幼年大鼠海马神经元损伤,依达拉奉预处理能减轻幼年大鼠惊厥持续状态后海马神经元损伤程度,提示依达拉奉对幼年大鼠惊厥持续状态后脑损伤具有一定的保护作用。     

PDTC 对惊厥持续状态大鼠海马细胞凋亡及 TLR4、caspase-3表达的影响

目的观察大鼠惊厥持续状态后海马中 Toll 样受体 4（TLR4）、NF-κB 和半胱氨酸蛋白酶 -3（caspase-3）的动态表 达及神经细胞凋亡的变化,探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对惊厥后脑损伤的可能保护机制。 方法 将 106 只 SD 大鼠随机 分为 0.9%氯化钠组（A 组）、SC 组（B 组）和 PDTC 组（C 组）,B 组根据大鼠惊厥后处死时间（4、24、48 和 72h）,分为 B1~B4 组,B 组和 C 组大鼠惊厥持续状态模型的制作采用氯化锂 - 匹罗卡品法,C 组在大鼠制模成功后,每天腹腔注射 PDTC（100mg/kg）1 次,连用 3d,于惊厥后 72h 处死。电镜观察海马超微结构改变;免疫组化法测定大鼠海马 NF-κB/p65 的表达;RT-PCR 法检测海马 TLR4、 caspase-3 mRNA 表达的动态变化;TUNEL 法检测神经细胞凋亡数的变化。 结果 B 组大鼠海马神经元超微结构损伤存在动态变 化,72h 内病变进行性加重;C 组大鼠病理改变较 B4 组减轻。B1~B4 组海马神经元胞核内有不同程度 NF-кB/p65 的表达,且较 A 组 明显升高（P＜0.05 或 0.01）。C 组较 B4 组 NF-κB/p65 表达明显下降（P＜0.01）。B1~B4 组 TLR4、caspase-3 mRNA 的表达量均高 于 A 组 （P＜0.05 或 0.01）,且随时间延长逐渐升高,72h 达到高峰;C 组 TLR4、caspase-3 mRNA 的表达较 B4 组明显降低 （P＜ 0.05）。B 组在惊厥 24h 后海马 CA1 区 TUNEL 阳性细胞数已明显高于 A 组（P＜0.01）,72h 达高峰,而 C 组 TUNEL 阳性细胞数较 B4 组明显下降（P＜0.01）。 结论 惊厥持续状态后大鼠海马 TLR4、NF-κB/p65 和 caspase-3 的表达增强。NF-κB 抑制剂 PDTC 可 以下调 TLR4 和 caspase-3 的表达,并使神经细胞凋亡减轻;提示 TLR4/NF-κB 信号通路在惊厥后海马细胞凋亡的发生、发展过程 中起促进作用。     

尼莫地平对惊厥持续状态幼年大鼠海马GRP78、CHOP表达及细胞凋亡的影响

目的观察尼莫地平对惊厥持续状态（statusconvulsion,SC）幼年大鼠海马葡萄糖调节蛋白78／免疫球蛋白重链结合蛋白Bip（GRP78／Bip）、前凋亡因子（CHOP／GADD153）表达及神经元凋亡的影响。方法雄性幼年SD大鼠117只,随机分为正常对照组（NC组）、惊厥持续状态组（SC组）、尼莫地平预处理组（NM组）三大组;分别予生理盐水、氯化锂-匹罗卡品、尼莫地平和氯化锂-匹罗卡品进行处理,各组又均随机分为3个亚组,分别于4、24、48h处死。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型;RT—PCR技术检测海马GRP78／Bip和CHOP／GADD153mRNA表达的动态变化。原位末端标记（TUNEL）检测海马CA1区中神经细胞的凋亡。结果SC组各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞表达均明显高于NC组（均P〈005或001oNM组各时间点TUNEL阳性细胞较SC组低,但高于NC组（P〈0．05或0．01）。与NC组相比,SC组各时间点海马GRP78／BipmRNA和CHoP／GADD153mRNA表达均升高。NM组GRP78／BipmRNA、CHOP／GADD153mRNA表达情况与SC组表达规律类似,但表达水平有差别。结论NM预处理可以影响CHOP／GADD153和GRP78／Bip的表达,缓解内质网应激,减轻惊厥后海马神经元细胞凋亡程度。     

依达拉奉联合黄芪对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护作用及其机制

目的探讨依达拉奉与黄芪合用对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织中c—Jun磷酸化的影响。方法sD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌组、黄芪组、依达拉奉组、依达拉奉与黄芪合用组及溶剂对照组。采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织c—Jun磷酸化的情况。结果①与假手术组比较，缺血再灌组海马神经元损伤非常严重，脑组织中c—Jun磷酸化增高（P〈0．05）。②各给药组与缺血再灌组相比海马神经元损伤减轻，脑组织中C—Jun磷酸化有所降低（P〈0．05），其中依达拉奉与黄芪合用组效果最显著（P〈0．05）。结论依达拉奉、黄芪两药合用比单用依达拉奉或黄芪更能减少海马神经元损伤及脑组织c—Jun磷酸化程度。     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及hsp-70表达的影响

目的：观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后海马组织神经细胞凋亡及hsp-70表达的影响。方法：将45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型。脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注海马组织hsp-70表达及凋亡细胞。结果：与假手术组比较比较,依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、hsp-70阳性细胞明显增加,差异有显著性（P〈0．01）。与对照组比较,依达拉奉预处理组术后24hTUNEL阳性细胞明显减少（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hhsp-70阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调hsp-70蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及bcl-2、Bax表达的影响。方法将45只健康雄性sD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg／kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注后海马组织bcl-2、Bax表达及凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、bcl-2、Bax阳性细胞明显增加,与假手术组比较差异有显著性（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hTUNEL、Bax阳性细胞数明显少于对照组（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hbcl-2阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

依达拉奉对心肺复苏大鼠海马神经元NGF、BDNF表达的影响

目的观察心肺复苏术后大鼠海马神经元神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及依达拉奉对NGF、BDNF表达的影响。方法采用窒息法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,然后行心肺复苏术(cardiopulmonary rsuscitation,CPR)。雄性Wistar大鼠60只,随机分3组:手术对照组(A组)、心肺复苏组(B组)、心肺复苏+依达拉奉组(C组),复苏至自主循环恢复(return of spontaneouscircultion,ROSC)时腹腔注射依达拉奉注射(3mg/kg)。应用免疫组化方法观察各组大鼠复苏2h后海马神经元TUNEL、NGF及BDNF表达情况。结果与对照组(A组)相比心肺复苏组(B组)大鼠海马神经元NGF、BDNF表达明显降低(P<0.05),TUNEL表达明显增加(P<0.01);心肺复苏+依达拉奉组(C组)NGF、BDNF表达明显增加,高于B组和A组(P<0.01),TUNEL表达明显降低(P<0.05),低于B组。结论心肺复苏模型大鼠自主循环恢复2h海马神经元NGF、BDNF表达降低,依达拉奉能恢复神经元NGF、BDNF的表达,减少神经细胞凋亡,对缺血、缺氧性神经元损伤有保护作用。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨自由基清除剂依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡和脂质过氧化的保护作用。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,TUNEL法检测大鼠局灶脑缺血再灌注损伤及依达拉奉干预后海马CA1区原位凋亡情况,用试剂盒检测脑组织丙二醛（MDA）含量和一氧化氮合酶（NOS）活性。结果缺血再灌注损伤后,大鼠海马CA1区神经元细胞凋亡随时间延长而增加,脂质过氧化产物丙二醛含量和一氧化氮合酶活性增高,依达拉奉干预能显著减轻海马神经元凋亡,降低MDA含量和NOS活性。结论在脑缺血再灌注损伤后,依达拉奉能通过清除自由基而减轻细胞凋亡及脂质过氧化损伤。     

依达拉奉对血管性痴呆大鼠模型学习记忆能力的影响

目的 研究依达拉奉对血管性痴呆（VaD）大鼠学习记忆及海马神经元的影响.方法 将受试的30例大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉治疗组共三组,将假手术组双侧颈总动脉进行分离,不阻断血流,不注射药物.模型组、依达拉奉治疗组采用＂双颈总动脉永久结扎＂法建立大鼠血管性痴呆（VaD）模型.在三组造模后行Morris进行水迷宫测试,同时HE染色观察海马区神经元的变化.结果 Morris进行水迷宫测试结果显示：第1天模型组逃避潜伏期（92.6±8.1 s）明显大于假手术组（71.9±5.1 s）和依达拉奉治疗组（71.2±4.9 s）,差异有统计学意义（P〈0.05）;第2、3、4天模型组逃避潜伏期（85.9±9.8s、66.2±8.6s、68.9±7.4s）明显大于假手术组（51.9±4.9 s、38.3±4.2 s、21.1±2.9 s）和依达拉奉治疗组（52.3±3.9 s、37.5±3.9 s、20.2±2.4 s）,差异有显著统计学意义（P〈0.01）;神经元变性凋亡明显减少.结论 依达拉奉可有效改善大鼠的学习记忆能力,并通过抗自由基的作用对VaD大鼠海马区神经元起保护作用.     

幼年大鼠惊厥持续状态后海马CA1区Caspase-3和IL-1β的表达

目的：观察幼年大鼠惊厥持续状态（Status convulsion，SC）后海马Caspase-3和白细胞介素-1β（IL—1β）表达的变化及神经元损伤情况，探讨幼年大鼠惊厥性脑损伤的可能机制。方法：出生后21dSD雄性大鼠，随机分成A组（正常对照组）20只、B组（SC组）26只。两组又随机分为两亚组（即B1、B2，A1、A2组）。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型，并选择合格致痫模型。B组分别于惊厥后24h、72h处死；A组也于相应时间点处死。采用免疫组化法检测海马组织Caspase-3、IL-1β的表达变化；电镜观察大脑海马区组织超微结构改变。结果：大鼠SC后Caspase-3表达的IOD值随时间的延长显著升高，IL-1β于SC后24h迅速升高，72h下降。SC后24h大鼠海马CA1 IL-1β和Caspase-3的IOD值之间呈正相关（r=0．54，P〈0．01，n=8）。电镜观察结果显示SC后24h海马CA1区出现早期细胞凋亡改变，72h部分神经元出现特征性的凋亡改变。结论：SC后Caspase-3参与了幼年大鼠惊厥性脑损伤的发生发展过程，IL-1β可能参与了惊厥性脑损伤的启动过程。     

血红素氧合酶-1对体外氧糖剥夺海马神经元Caspase-12表达抑制作用的研究

目的研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的影响及其机制.方法将培养7d的大鼠海马神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋血晶素组（C＋H组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺＋血晶素组（D＋H组）.C组正常培养方法培养.C＋H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D＋H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率的检测,HO-1、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和神经元凋亡的检测.结果C＋H组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3、神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学意义（P〉0.05）;D组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3高于C组（P〈0.01）,神经元存活率低于C组（P〈0.01）,神经元凋亡率高于C组（P〈0.01）;D＋H组神经元HO-1表达高于D组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3低于D组（P〈0.01）,神经元存活率高于D组（P〈0.01）,神经元凋亡率低于D组（P〈0.01）.结论HO-1可抑制氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的表达,从而抑制神经元的凋亡.     

益气化瘀方对腰神经压迫模型大鼠背根节神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤大鼠背根节神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响。方法：雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、弥可保组和益气化瘀方组,每组10只。造模各组用自制胶块压迫于大鼠右侧L;神经根背根节处,假手术组仅切开皮肤和椎旁肌。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,益气化瘀方组大鼠给予益气化瘀方煎剂灌胃,弥可保组大鼠肌肉注射弥可保。于造模10d后取右侧受压神经根,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测神经细胞的凋亡情况;分光光度法结合考马斯亮蓝法检测受压迫神经根caspase-3活性;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测神经根组织caspase-3mRNA表达变化。结果：腰神经根受压迫后背根节的神经细胞凋亡明显增加,模型组大鼠神经细胞的凋亡指数高于假手术组（P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可减少背根节神经细胞的凋亡,两组大鼠神经细胞的凋亡指数低于模型组（P〈0．05）。模型组大鼠神经根组织caspase-3活性和mRNA表达明显增高,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可降低造模后大鼠神经根组织caspase-3活性及其mRNA表达,二者与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：腰神经根压迫可导致受压神经根组织caspsae-3的过表达和神经细胞凋亡的增加。益气化瘀方可抑制神经根组织caspase-3的过表达,减轻背根节神经细胞的凋亡。     

姜黄素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及Caspase-3表达的影响

目的：观察姜黄素（Cur）对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化及对其肝组织转化生长因子-β1（TGF-β1）及半胱天冬酶-3（Caspase-3）表达的影响．方法：采用皮下注射400g／L四氯化碳复制模型,造模后给予姜黄素治疗,观察肝组织病理改变并进行肝纤维化分级和血清生化学检测;免疫组化法测定肝组织中TGF-β1及Caspase-3蛋白表达的变化,RT-PCR检测肝组织中TGF-β1mRNA表达．结果：Cur治疗组大鼠肝纤维化程度较模型组显著减轻（P〈0．01）;并且大鼠血清ALT（nkat／L）,AST（nkat／L）,ALP（nkat／L）水平明显降低[（757±234）惦（1677±252）,（2776±238）VS（4865±403）,（1850±191）掷（4310±728）,P〈0．05或P〈0．01],A／G比值提高[（0．89±8．06）US（0．60±7．48）,P〈0．05];Cur治疗组TGF-β1mRNA,TGF-β1表达较模型组显著下降[（3．13±1．55）粥（9．56±2．01）,（0．32±0．12）傩（0．87±0．40）,P〈0．05或P〈0．01];Caspase-3表达较模型组显著升高[（5．47±1．06）US（1．56±0．61）,P〈0．05]．结论：Cur对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制TGF-β1表达、促进Caspase-3表达相关．     

电针预处理抑制癫痫持续状态诱发的海马区神经元凋亡研究

目的：观察电针预处理对癫痫持续状态（status epilepticus,SE）诱发的海马区神经元凋亡的影响。方法：20只SD大鼠被随意分为4组：对照组、癫痫组、电针组、电针对照组,电针组和电针对照组给予电针预处理3周后,按经典方法建立锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,用TUNEL法及免疫荧光法观察海马区神经元的凋亡。结果：（1）与对照组比较,癫痫组和电针对照组海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性的神经元明显增多（P〈0.01,n=5）;（2）与癫痫组和电针对照组相比,电针预处理减少了海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性神经元的数量（P〈0.05,n=5）。结论：电针百会及大椎穴预处理,可以减低SE诱发的海马区神经元的凋亡。     

维拉帕米对利多卡因致小鼠惊厥作用的影响

目的 观察维拉帕米对利多卡因致小鼠惊厥作用的影响.方法 将昆明种小鼠随机分为3组（n=10）：生理盐水（NS）组、维拉帕米1.5 mg·kg^-1（V1.5）组、3.0 mg·kg^-1（V3.0）组.以NS或不同剂量的维拉帕米给小鼠腹腔注射,5 min后,各组腹腔注射致惊厥剂量的利多卡因,观察各组小鼠发生惊厥的只数、已发生惊厥小鼠的惊厥潜伏期、持续时间、惊厥次数及惊厥级数.结果 与NS组相比,V3.0组惊厥潜伏期延长（P〈0.05）;V1.5、V3.0组惊厥持续时间缩短（P〈0.05）;V3.0组惊厥次数减少（P〈0.05）;维拉帕米使利多卡因致小鼠惊厥的级数降低.结论 维拉帕米能部分拮抗利多卡因致小鼠惊厥作用.     

针刺对慢性神经痛大鼠海马EphrinBs/EphBs mRNA和EphrinB3蛋白表达的影响

目的:观察长期针刺治疗对慢性神经痛大鼠海马EphrinBs/EphBs mRNA和EphrinB3蛋白表达的影响,探讨针刺镇痛可能的机制。方法:SD雄性大鼠共35只,随机分为假手术组(n=9)、模型组(n=8)、电针组(n=9)、手针组(n=9)。采用慢性坐骨神经结扎性损伤(CCI)模型,电针组和手针组大鼠从造模后第8天开始至第34天分别给予电针、手针干预大鼠"足三里"和"三阴交"穴,隔日1次。所有大鼠均在造模前、造模后第7、14、21、28和35天进行机械性痛阈(MWT)测定;各组大鼠于术后第35天处死取材,采用定量Q-PCR的方法检测海马EphrinBs/EphBs各型mRNA的表达,并采用Western blot方法检测EphrinB3蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组造模后第7天起各时间点MWT值显著降低(P0.01)。与模型组比较,电针组、手针组大鼠造模后第14至35天大鼠MWT值均显著上调(P0.05,P0.01),与假手术组相比,模型组大鼠海马中EphB1、EphB2、EphB3和EphrinB2的mRNA表达水平均显著增加(P0.05,P0.01);与模型组比较,手针组及电针组大鼠EphB1、EphB2、EphB4和EphrinB3 mRNA表达水平显著下降(P0.05,P0.01),电针组EphB6 mRNA的表达显著下调(P0.01);电针组和手针组海马EphrinB3蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论:针刺广泛调节海马EphrinBs/EphBs系统的表达可能是针刺治疗神经病理性疼痛的机制之一。     

调心方有效部位TX0201对类AD模型大鼠脑内APP mRNA与Caspase-3表达的影响

目的：观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病（AD）模型大鼠脑内APP mRNA、Caspase-3表达的影响。方法：应用β淀粉样蛋白1-40片段（Aβ1-40）注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型。实验设正常对照组、类AD模型组、TX0201组、调心方组、安理申组,均采用灌胃给药20d;分别用RT—PCR法、免疫组化法检测大鼠脑部皮层和海马的APP mRNA、Caspase-3表达。结朵：TX0201和调心方均能明显降低大鼠皮层、海马APP（MPI） mRNA和APP（KPI） mRNA的表达。模型大鼠大脑海马CA2区和皮层Caspase-3蛋白阳性细胞表达明显增多,调心方和TX0201均能明显调低Caspase-3蛋白阳性细胞的表达。结论：TX0201可能通过降低皮层、海马部位APP mRNA的表达,下调Caspase-3,减轻神经细胞凋亡,从而发挥保护神经元作用。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对癫痫持续状态大鼠海马c-fos表达的影响

目的：通过戊四氮癫痫持续状态大鼠模型,观察外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对癫痫大鼠海马组织内c—fos表达的影响。方法：建立SD大鼠戊四氮（PTZ）诱导癫痫持续状态模型,生理盐水（NS）注射作为对照,皮下注射bFGF进行干预,分4组：即NS组、NS＋bFGF组、PTz组、Frrz十bFGF组。选择处理后第3、7、14天3个时间点进行观察,采用免疫组化SABC法检测c-fos。结果：发作后3、7、14dPTZ组海马组织c—fos较NS组有显著升高（P〈0．01）,以发作后14d升高更为明显,眦＋bFGF组各时间点c-fos较PTZ组下降（P〈0．05）;c-fos含量在P1lZ组各时间点亦大于NS组（P〈0．05）,以发作后14d升高较为显著;NS＋bFGF组发作后各时间点c-fos较PTZ组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：大鼠癫痫持续状态后一定时间内c—fos表达增加,bFGF能够降低大鼠癫痫发作后c—fos表达,减少神经元的损害。     

ALK-3、Pax-8基因抑制后大鼠心肌细胞中Smad1/5/8的表达

目的：抑制大鼠胚胎心肌细胞株中ALK-3、Pax-8基因的表达后,探索Smad1/5/8在其中所起的作用。方法：将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为4组：针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组、ALK-3基因的小干扰RNA（ALK-3siRNA）组、阴性对照（NCsiRNA）组和空白对照组。前3组分别给予相应siRNA（5.0μL）和Lipofectamine2000（5.0μL）配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用qRT-PCR测定Pax-8和ALK-3的mRNA表达,Westernblot法检测磷酸化Smad1/5/8（p-Smad1/5/8）和半胱天冬酶（Caspase）-3表达。结果：与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组的Pax-8mRNA表达分别下调50%（P＜0.05）和54%（P＜0.05）,ALK-3siRNA组的ALK-3mRNA表达分别下调49%（P＜0.05）和53%（P＜0.05）,而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较,ALK-3siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量分别下调58%（P＜0.05）和55%（P＜0.05）,Pax-8siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量差异无统计意义（P＞0.05）。NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组Caspase-3蛋白表达量分别上调76%（P＜0.05）和81%（P＜0.05）,ALK-3siRNA组Caspase-3的蛋白表达量分别上调135%（P＜0.05）和140%（P＜0.05）,而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。结论：在大鼠胚胎心肌细胞株中对基因ALK-3、Pax-8干扰后能引起细胞凋亡蛋白Caspase-3明显增多,并且在ALK-3siRNA组发现Smad1/5/8蛋白磷酸化减少,而Pax-8siRNA组中未发现Smad1/5/8磷酸化减少,提示Smad1/5/8在基因ALK-3被干扰后引起细胞凋亡蛋白Caspase-3增多中起重要作用。