首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到17条相似文献,搜索用时 125 毫秒
1.
目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepG2中survivin基因表达的抑制作用。 方法 设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列 ,中间间隔 9个核苷酸序列 ,通过定向克隆至载体PSilencer 2 .1,构建siRNA真核表达载体 ,经稳定转染HepG2细胞后应用RT PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。 结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT PCR及流式细胞术检测 ,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin基因表达分别达 73%和 75 %。结论 构建的PSilencer( ) survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达 ,从而为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。  相似文献   

2.
目的:构建针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体,体外观察其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响. 方法:设计针对PEG10基因的3个siRNA靶序列,构建真核表达载体siRNA1,siRNA2和siRNA3,脂质体分别转染HepG2细胞后实时定量PCR,检测其对HepG2细胞PEG10基因表达的影响,MTT法、流式细胞仪和激光共聚焦检测转染siRNA后的HepG2细胞的生长活性及凋亡. 结果:成功构建了针对PEG10基因的3个特异性siRNA表达载体. 它们不同程度地抑制了HepG2细胞PEG10基因的表达,以siRNA2抑制效率最高,可达93.99%. HepG2细胞的生长也明显受到抑制(P<0.05),大量HepG2细胞凋亡,siRNA2凋亡率最高,为66.91%. 结论:靶向PEG10基因的siRNA表达载体可抑制肝癌HepG2细胞的生长,诱导细胞凋亡,该作用与降低PEG10基因的表达有关.  相似文献   

3.
目的采用RNA干扰技术阻断Survivin基因的表达,观察其诱导乳腺癌细胞凋亡及对表阿霉素的化疗增敏作用。方法构建靶向Survivin的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,采用lipofectamine^TM2000转染乳腺癌细胞MCF-7,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞Survivin基因表达的变化;采用TUNEL法检测其诱导MCF-7细胞凋亡及对表阿霉素的化疗增敏作用。结果靶向Survivin的序列特异性的siRNA可以有效地抑制MCF-7细胞Survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为64.91%;在蛋白质水平其表达抑制率为79.72%;转染靶向Survivin的siRNA真核表达载体48h后可以诱导8.75%的细胞凋亡;阻断Survivin基因的表达。可以显著提高MCF-7细胞对表阿霉素的敏感性,靶向Survivin的siRNA联合表阿霉素可以诱导24.21%的细胞凋亡。结论本研究所构建的靶向Survivin的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断Survivin基因的表达,阻断Survivin基因的表达可以诱导一定程度的MCF-7细胞自发凋亡,并显著增强其对表阿霉素的敏感性。  相似文献   

4.
目的:构建靶向survivin的microRNA表达载体,观察其与siRNA表达载体对survivin基因表达的抑制作用。方法:以survivin为靶基因,根据pPRIME设计针对survivin的microRNA序列,获得目的片段克隆到相应载体中,序列正确的载体脂质体转染前列腺癌PC-3细胞,RT-PCR和Western Blot检测其对survivin基因表达的抑制作用,流式细胞术和电镜观察其对细胞凋亡的影响。结果:双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确,序列正确的microR-NA和siRNA表达载体在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制PC-3细胞中survivin的表达,流式细胞术和电镜结果显示其可促进PC-3细胞的凋亡,且microRNA表达载体的作用效果较siRNA表达载体强。结论:Survivin靶向microRNA和siRNA均能抑制靶基因的表达,诱导前列腺癌细胞凋亡,与siRNA相比,microRNA作用效果更强。  相似文献   

5.
目的 采用RNA干扰技术阻断STAT5基因的表达,观察其对人肝癌SMMC-7721凋亡的影响.方法 构建3种靶向STAT5的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,采用LipofectamineTM2000转染肝癌细胞SMMC-7721;分别采用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染前后SMMC-7721细胞STAT5 mRNA和蛋白质表达的变化;采用透射电镜技术观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 3条靶向STATS的序列特异性的siRNA可以有效地抑制SMMC-7721细胞STATS mRNA和蛋白质表达,STAT5 mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,STAT5蛋白表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%;转染靶向STAT5的siRNA真核表达载体48 h后出现凋亡细胞的典型形态学变化,并诱导25.61%的SMMC-7721细胞发生凋亡.结论 靶向STAT5的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断SMMC-7721细胞STAT5基因的表达,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,STAT5 siRNA在人肝癌的基因治疗中可能具有潜在的应用价值.  相似文献   

6.
目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人肝癌HepG2细胞中Survivin基因表达,观察小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞周期的影响。方法构建人肝癌HepG2的survivin-siRNA,将其导入肝癌细胞系后研究。HepG2细胞分为四组:siRNA干扰组、siRNA干扰对照组、未转染的对照组、空白载体组。作用48h后Western印迹检测基因沉默效果,MTT法测量细胞生长情况,流式细胞术分析siRNA对肝癌细胞增殖周期的影响。结果 Western印迹法显示干扰组survivin基因的表达受到明显抑制。MTT法显示经survivin基因干扰后的HepG2细胞相比对照组细胞吸光度A值较低;尤其是24、48小时降低更为明显(P〈0.05)。流式细胞术显示干扰组的G2/M细胞百分率相对干扰对照组显着增大(P〈0.05)。结论 siRNA转染能够抑制细胞survivin基因表达,使人肝癌细胞株HepG2细胞阻滞于G2/M期。  相似文献   

7.
MTA1靶向RNA干扰对人肝癌HepG2细胞生物学行为影响的研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 观察转移相关基因1(MTA1)特异性siRNA对肝癌细胞株HepG2细胞生物学行为的影响.方法 体外构建2个MTA1特异性siRNA表达载体(pRNAi-1、pRNAi-2),实验分为脂质体对照、空质粒转染对照及MTA1 siRNA重组质粒转染组,转染肝癌细胞株HepG2细胞,定量RT-PCR检测MTA1 mRNA表达情况,检验其对细胞的RNA干扰效果;采用MTT法分析其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.结果 测序表明MTA1干扰序列完全正确;pRNAi-1与pRNAi-2表达质粒有效抑制肝癌细胞株HepG2细胞中MTA1的表达,MTT 法检测结果显示转染重组质粒组细胞体外生长的抑制率高于脂质体对照组和空质粒对照组(P<0.01);流式细胞术检测的转染重组质粒组细胞凋亡率高于脂质体对照组和空质粒对照组(P<0.01).结论 成功构建了MTA1干扰真核表达载体,重组MTA1特异性siRNA质粒可抑制肝癌细胞中MTA1的表达,并抑制肝癌细胞生长,促进其凋亡.  相似文献   

8.
靶向survivin的siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的 采用RNA干扰技术(siRNA)阻断survivin基因的表达,观察其抑制胰腺癌细胞增殖及诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。方法 构建靶向survivin的siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染胰腺癌细胞PC-2,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后PC-2细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对PC-2细胞增殖的抑制作用:采用流式细胞术检测其诱导PC-2细胞凋亡的作用。结果 靶向survivin的序列特异性的siRNA可以高效地抑制PC-2细胞survivin基因表达,在mRNA水平其表达抑制率为81.25%,在蛋白质水平其表达抑制率为74.24%。转染靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以显著抑制PC-2细胞的增殖,细胞接种24、48h后其增殖抑制率分别为28.00%和33.38%:转染后24、48h可以诱导8.46%、7.53%的细胞凋亡。结论 所构建的靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断PC-2细胞survivin基因表达。阻断survivin基因表达可以显著地抑制PC-2细胞的增殖并在一定程度上诱导其凋亡,靶向survivin的siRNA在胰腺癌的基因治疗中具有一定的价值。  相似文献   

9.
目的构建联合靶向凋亡抑制基因Survivin和Livin的双重siRNA表达载体并鉴定其活性,为研究同时下调Survivin和Livin表达的协同效应奠定基础。方法选取已证实有效的分别靶向Survivin和Livin的siRNA序列,通过定向克隆技术构建同时编码2个siRNA分子的真核表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv,将其转染HepG2细胞后检测Survivin和Livin mRNA水平的变化,同时转染表达DsRed2-SURVIVIN和GFP-LIVIN的Hela荧光报告细胞观察荧光强度变化。结果双重siRNA表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv构建成功,转染HepG2后Survivin和Livin mRNA水平明显下降,转染Hela报告细胞后荧光强度变弱。结论联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体构建成功,并能有效下调Survivin和Livin的表达水平。  相似文献   

10.
目的通过小干扰RNA(siRNA)下调人肝癌HepG2细胞中SnoN基因的表达,探讨SnoN对HepG2细胞增殖、凋亡等生物学功能的影响及其意义。方法设计并化学合成3条靶向SnoN的siRNA序列,采用阳离子脂质体瞬时转染的方法将干扰序列转染至HepG2细胞内,采用RT-PCR和Western blot方法,检测转染后的抑制效果并筛选出一条抑制效果最好的干扰序列,然后采用CCK-8法和流式细胞术检测SnoN基因表达下调后HepG2细胞增殖、凋亡的变化。结果 3条siRNA均对SnoN的表达有抑制作用,以siRNA-C抑制效果最好。下调SnoN基因表达后,HepG2细胞的增殖受到抑制(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05)。结论靶向SnoN的siRNA可有效抑制SnoN基因的表达,进而使HepG2细胞的生长受到抑制、细胞凋亡增加,表明SnoN基因可能与肝癌细胞的增殖与凋亡有关。  相似文献   

11.
Objective To investigate the effects of small interfering RNA (siRNA) recombinant expression vector targeting survivin gene on chemotherapy sensitivity of human colon cancer cells to 5-fluorouracil. Methods siRNA recombinant expression vector targeting survivin gene was constructed and transfected into human colon cancer cell lines LOVO. After 48 hours of transfection, cells were harvested for analysis of survivin mRNA and protein expressions using RT-PCR and Western blot. In addition, after human colon cancer cell lines were treated with Survivin siRNA and/or 5-fluorouracil, MTT assay and flow cytometry were used to analyze cell proliferation and apoptosis. Results Restriction endonuclease analysis confirmed that siRNA recombinant expression vector targeting survivin gene was successfully constructed. Inhibitory ratios of survivin mRNA and protein expressions by Survivin siRNA were 36.33% and 44.65%, respectively. Survivin siRNA combined with 5-fluorouracil significantly increased the cell proliferation inhibitory ratio and apoptosis ratio compared with 5-fluorouracil treatin~ alone (P〈0.05). Conclusion The siRNA recombinant expression vector targeting survivin gene can inhibit the expression of survivin gene, and enhance chemotherapy sensitivity of human colon cancer cells to 5- fluorouracil.  相似文献   

12.
To study the influence of siRNA targeting survivin gene on the biological behavior of hepatocellular carcinoma (HCC), one pair of 21bp reverse repeated motifs of survivin target sequence with 9 spacers were synthesized and inserted into plasmid psilencer2.1 to generate siRNA eukaryotic expression vector. After stable transfection into HepG2 cells, the biological behaviors of the survivin siRNA transfected HCC cells were observed. After the recombinant plasmid Psilence( )-survivin was successfully constructed, survivin mRNA and protein expression inhibition ratio reached 73% and 75% respectively compared to control groups. Transfected cells with survivin siRNA demonstrated significantly inhibited cell growth and increased apoptosis. Subsequent study in nude mouse model demonstrated lower succeeding rate in cells transfected with survivin siRNA and slow growth rate. The results elucidated the siRNA targeting survivin gene could specially suppress its expression in HepG2 cells and inhibit tumor cells growth both in vivo and in vitro. This provides a theoretical basis to turn the drug resistance in tumor cells.  相似文献   

13.
目的:构建针对乙型肝炎病毒x基因(HBx基因)的小干扰RNA (siRNA)重组腺病毒表达载体,并在能表达HBx基因的人肝癌细胞株HepG2中观察其对HBx基因表达的抑制作用.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-HBx与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染能表达HBx基因人肝癌细胞株HepG2,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western Blot方法检测细胞中HBx基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对HBx基因的siRNA重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western Blot方法证实,在HepG2细胞中,HBx基因在mRNA和蛋白水平均有降低.结论:腺病毒介导的针对HBx基因的siRNA在体外能够高效、特异地抑制HBx基因的表达.  相似文献   

14.
冯霞  杨红 《中国医药导报》2013,10(11):25-28
目的研究RNA干扰Survivin基因表达对HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的影响。方法采用PCR扩增以及定向克隆技术重组构建shRNA的表达载体pshRNA-Survivin,使用脂质体介导转染至HL-60细胞,分为6组:①空白实验组;②阿糖胞苷(Ara-C)组;③阳性质粒组;④阴性质粒组;⑤阳性质粒+Ara-C组;⑥阴性质粒+Ara-C组。采用RT-PCR技术检测HL-60细胞内Survivin及其mRNA表达,运用流式细胞仪进行细胞凋亡率改变的检测。结果与空白实验组比较,阳性质粒组的mRNA表达抑制率为57.7%,表达下降,差异有统计学意义(P〈0.05);阳性质粒组细胞凋亡率为5.87%,阳性质粒+Ara-C组细胞对Ara-C敏感性明显提高,细胞凋亡率为12.4%,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 Survivin siRNA能够高效特异的抑制HL-60细胞内Survivin基因的表达,诱导细胞凋亡,并提高了HL-60细胞对Ara-C的敏感性,这有助于白血病基因治疗的进一步发展。  相似文献   

15.
RNAi技术抑制HepG2细胞中DcR3的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨特异性DcR3-siRNA对人肝细胞癌细胞系HepG2的DcR3基因表达的影响。方法设计并合成带FAM荧光标记的针对DcR3的siRNA4条和非特异性siRNA1条,用脂质体转染HepG2细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪判断转染效果;应用半定量RT-PCR和免疫细胞化学检测特异性DcR3-siRNA的对HepG2细胞中DcR3表达的抑制作用。结果各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3 mRNA表达(P<0.05),其中以siRNA4的作用更明显,干扰作用达62.9%;将siRNA4转染HepG2细胞,免疫细胞化学结果显示,siRNA4能明显抑制HepG2细胞中DcR3蛋白的表达(P<0.01)。结论特异性DcR3-siRNA在体外实验能抑制目的基因的表达。  相似文献   

16.
小干扰RNA体外抑制HBs-GFP融合基因的表达   总被引:4,自引:4,他引:0  
目的:利用增强型绿荧光蛋白(EGFP)和小发夹RNA(shRNA)表达载体技术,建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA的方法.方法:将HBV S基因融合到EGFP中,建立HBs-GFP融合基因表达载体;同时构建带U6 27 RNA转录启动子的shRNA表达载体pAVU6 4sh357.二载体共转染HepG2细胞后,流式细胞仪检测HBs-GFP蛋白的荧光强度;同时RT-PCR和实时定量PCR法检测HBs-GFP mRNA水平的改变.结果:小干扰RNA有效抑制目的基因的表达,共转染后第72 h荧光蛋白抑制率为55.4%;HBs-GFP 融合基因的RNA表达受到显著抑制,抑制率达到90%.结论:载体法表达的小干扰RNA体外显著抑制HBs-GFP融合基因的表达.  相似文献   

17.
目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2/ADM组。CCK-8法分析阿霉素对细胞生长抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;Western blot检测BC047440沉默后NF-κB蛋白表达的变化;Real-time PCR检测Survivin、CCNL1基因mRNA水平的变化。结果成功建立BC047440蛋白siRNA干扰模型;NF-κB蛋白表达BC047440-shRNA组约为HepG2/ADM组67.69%,约为control-shRNA组67.39%;细胞毒性实验中24、48 h阿霉素对BC047440-shRNA组细胞毒性作用明显增强;流式细胞仪检测结果显示BC047440-shRNA组细胞凋亡明显增多,细胞周期分布多停留于G1/G0期,S期细胞明显减少。Real-time PCR检测BC047440-shRNA组Survivin基因mRNA表达约为con-trol-shRNA组37%,约为HepG2/ADM组42%;检测BC047440-shRNA组CCNL1基因mRNA表达约为control-shRNA组3.5倍,约为HepG2/ADM组2.4倍。结论沉默BC047440基因可通过NF-κB信号通路及其下游Survivin、CCNL1信号逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,提示BC047440基因可能是形成肝癌多药耐药的重要分子之一。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号