产碳青零烯酶KPC-2肺炎克雷伯菌局部流行

目的了解我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌的耐药机制及其同源性分析。方法收集2006年3月～9月我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌共10株，采用Etest法测定细菌对各抗菌药物的最低抑茵浓度（MIC）；通过等电聚焦电泳（IEF）检测所产生的β-内酰胺酶，并通过聚合酶链反应（PCR）及序列分析确定其基因型；接合试验和Southern杂交进行基因定位；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对这些菌株进行同源性分析。结果10株肺炎克雷伯菌均产KPC-2（pI6.7）、DHA-1（pI7.8）和SHV-28（pI7．6），其中3株同时产TEM-1广谱酶（pI5．4）。blaKPC-2位于60kb左右可接合性质粒上。10株菌株对β-内酰胺类抗生素呈多重耐药，但对多黏菌素，替加环素，复方SMZ敏感。PFGE证实为同一克隆株的传播。结论质粒介导的KPC-2造成肺炎克雷伯茵对碳青霉烯类抗生素敏感性下降，并在我院短暂流行；携带KPC-2基因的临床菌株同时携带多种耐药基因。     

对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌耐药机理探讨

目的 研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制.方法 对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(KB法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶表型确证;利用PCR及DNA序列分析,确定其基因型;通过质粒提取、质粒接合试验,对耐药基因进行定位.结果 药敏纸片法显示该菌株对碳青霉烯类抗生素敏感,其抑菌圈直径16～17 cm,提示分离的菌株可能产碳青霉烯酶,改良Hodge试验、EDTA协同试验确证产金属β-内酰胺酶(MBLs),PCR扩增和序列分析发现该菌携带MBLs基因blaIMP,药敏纸片法证实接合子对美罗培南的敏感性降低,IMP-4基因位于接合子约73 000 bp质粒上.结论 肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机理是携带MBLs基因的blaIMP.     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布情况及其同源性探讨

目的：了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯杆菌（CR-KP）中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法：收集我院2016 年1月至2017年12月对厄他培南、亚胺培南或美罗培南药敏试验结果不敏感的CR-KP共34 株,根据CLSI M100S-27th文件的改良碳青霉烯灭活试验确证其是否为产酶菌株,通过PCR方法扩增5种碳青霉烯酶基因（bla KPC、bla IMP、bla OXA-48、bla VIM、bla NDM）,PCR扩增产物进行测序明确基因型;通过脉冲场凝胶电泳对肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果：34株肺炎克雷伯菌经改良碳青霉烯灭活试验确证均为产酶菌株,PCR检测显示均为KPC-2型酶。脉冲场凝胶电泳（PFGE）结果显示34株菌可分为5组,其中1、2、4组为主要流行菌株。结论：院内存在以KPC-2为主要耐药基因的CR-KP克隆株的流行,且主要以重症医学科耐药株流行,34株菌间存在不同程度的亲缘关系。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及耐药特性.方法:对42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行药敏试验、改良Hodge试验,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测细菌肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因.结果:42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中,药敏试验结果显示耐药情况严重,仅对替加环素、阿米卡星、妥布霉素、复方新诺明较敏感.改良Hodge试验及KPC基因检测全部阳性,基因测序为KPC-2型.结论:KPC-2是引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因,应引起临床及实验室的关注.     

产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的耐药性及基因型分布与流行病学分析

目的 探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriales bacteria,CRE)的耐药性及基因型分布与流行病学.方法 收集2018年2月至2019年10月本院临床分离菌中美罗培南、亚胺培南及厄他培南任一耐药的CRE共35株,用E-test法或纸片扩散法(K-B法)复核碳青霉烯类的耐药性,用PCR扩增及测序方法确定CRE基因型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析,并分析流行病学情况.结果 35株CRE标本来源以痰液居于首位,占比40％;菌种分布中以肺炎克雷伯菌检出最多,达20例,占比57.14％;35株CRE对常用抗菌药物除阿米卡星和复方新诺明外均表现出较高的耐药性(>80％);经PCR扩增,32株检出碳青霉烯酶基因,检出率91.43％,3例未检出.经PFGE同源性分析,32株碳青霉烯酶基因均非同源性;通过DNA测序,检出blaKPC-2型23株,blaIMP-4型4株,blaNDM-1型6株,其中1例源自血液标本的肺炎克雷伯菌同时含有KPC-2型及NDM-1型基因,blaVIM及blaOXA-48均未被检出.结论 本地区CRE对多种抗菌药物表现为高度耐药性,以肺炎克雷伯菌占比最高,以产碳青霉烯酶(KPC-2型)为主要耐药机制.本院虽未出现流行性感染事件,仍应加强CRE主动检测及感染控制,以有效防范院内感染.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的了解铜陵市人民医院分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药基因型。方法收集2011年5月至2016年8月铜陵市人民医院临床标本中分离的CRKP,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM)和bla_(OXA-48)),并对各碳青霉烯酶基因阳性扩增产物进行基因测序。结果共收集CRKP 90株,其中改良Hodge试验阳性84株(93. 3%),51株(56. 7%)携带blaKPC-2基因,2株(2. 2%)携带bla_(IMP-4)基因,1株(1. 1%)携带bla_(VIM-1)基因。结论该院肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的主要耐药机制是产KPC-2型碳青霉烯酶。