TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的：本研究旨在明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导鼠肝细胞凋亡与caspase-3及caspase-8的关系。方法：通过50％CCl4腹腔注射，用8W时间诱发BALB／c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF-β1(5ng／ml)诱导的凋亡，利用1．5％的琼脂糖凝胶电泳观察：DNA梯形条带，应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行了染色，并在荧光显微镜下观察比较caspase-3和caspase-8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果：胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95．2％。正常肝细胞予以TGF-β1处理后，应用1．5％的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF-β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现，其凋亡率明显高于未处理组，分别为58．76％和18．03％，两组具有明显的差别。但凋亡可以被caspase-3和caspase-8抑制剂阻止。结论：硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡，提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过caspase-8和caspase-3的活化诱导鼠肝细胞产生凋亡。     

VBE-3对卵巢癌CoC1细胞凋亡的影响

目的:观察黄荆子木脂素VBE-3诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用。方法:体外培养CoC1细胞和中国仓鼠卵巢CHO-K1细胞,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。结果:PI染色FCM分析发现VBE-3以浓度依赖方式诱导CoC1细胞凋亡(P<0.01),对CHO-K1细胞的作用弱。琼脂糖凝胶电泳观察结果表明10μmol/L的VBE-3和LY294002处理24小时,CoC1细胞呈现典型凋亡细胞的DNA梯形条带;而CHO-K1细胞未见DNA梯形条带。结论:VBE-3选择性诱导CoC1细胞凋亡作用与其阻断PI3K信号传导有关。     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：用缺血－再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法（TUNEL）。结果：缺血－再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞。Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低。结论：缺血－再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡。     

应用原位末端转移酶标记和DNA电泳检测白内障晶体上皮细胞凋亡

目的：探讨老年性白内障晶体上皮细胞凋亡与白内障发生的关系。方法：应用原位末端转移酶标记和DNA片段凝胶电泳法，对50例老年性白内障和20例正常透明晶体上皮细胞进行凋亡细胞检测。结果：用Tunel法检测老年性白内障晶体上皮细胞，凋亡细胞比例为8．4％—37．8％，而正常透明的晶体上皮细胞中凋亡细胞百分率≤0．01％，两组有统计学差异；琼脂糖凝胶电泳结果显示，在老年性白内障组中出现了典型的DNA梯状条带，而正常组晶体上皮细胞DNA无此现象。结论：晶体上皮细胞凋亡与老年性白内障的发生发展有关。     

幼龄小鼠短期甲基汞中毒致细胞凋亡

目的探讨甲基汞所致免疫损伤机制。方法将幼龄小鼠分为6组除对照组外实验5组分别各皮下注射甲基汞1、2、4、8、10mg/(kg.d),连续7d,15d后取胸腺,进行形态学、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳等观测,研究不同剂量组小鼠胸腺细胞凋亡变化。结果甲基汞诱导小鼠胸腺细胞凋亡,凋亡率随剂量增大而增加,第15天凋亡率从(5．42±0．95)％增至(59．30±1．17)％;光镜下实验3、4、5组均观察到胸腺细胞凋亡的典型形态变化;琼脂糖凝胶电泳结果呈"梯形"条带。结论甲基汞可诱导小鼠胸腺细胞凋亡。     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:用缺血-再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响.方法:琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法(TUNEL).结果:缺皿-再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞.Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低.结论:缺血-再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡.     

紫花牡荆素通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其诱导凋亡机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片;碘化丙啶染色流式细胞术定量分析Sub-G1细胞百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.caspase比色试剂盒检测caspase-3/-9活性;Rh123探针染色FCM检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达.结果:不同浓度的CAS处理48h后,HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加、Sub-G1细胞百分率显著增高、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到典型的DNA梯形条带;CAS处理组caspase-3/-9活性明显升高、线粒体膜电位降低、细胞色素c、Bax显著升高,而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低.结论:CAS通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡.     

TNF-a 与IFN-g 诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡

目的探讨TNF-a 与IFN-g 诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用.方法建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系;利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测TNF-a 与IFN-g 处理后的细胞凋亡情况.结果 TNF-a 与IFN-g 可引起活细胞数减少;透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳有"梯形条带".结论 TNF-a 能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层细胞凋亡,IFN-g 对TNF-a 具有协同作用.     

芹菜素增强TRAIL诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究芹菜素(API)与重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析sub-G1百分率。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。结果:API(20μmol/L)和TRAIL(20ng/mL)以及两者合用作用48h的人宫颈癌HeLa细胞sub-G1百分率分别是3.56%±0.20%、6.69%±0.40%和59.8%±4.20%;DNA琼脂糖凝胶电泳显示:20μmol/LAPI与20ng/mL的TRAIL联合处理,展示出典型DNA梯形条带图谱。结论:芹菜素具有增强TRAIL诱导HeLa细胞凋亡作用。     

海洋甾体YC-1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

【目的】观察海洋甾体YC 1对低钾 (5mmol/L ,lowK )诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响 ,并对其机制进行初步探讨。【方法】小脑颗粒神经元原代培养 ;采用二乙酸荧光素 (fluoresceindiacetate ,FDA)和Hoechst 332 5 8DNA染色法观察神经元存活率及形态学特征 ;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。【结果】低钾引起小脑颗粒神经元凋亡。Hoechst332 5 8DNA染色表现出染色体固缩 ,DNA凝胶电泳表现出由大小不一的断裂DNA片段形成的“梯形”条带。YC 1(1 2 5～ 2 0 μmol/L)呈时间和剂量依赖性地抑制上述现象的出现。蛋白质合成抑制剂放线菌酮 (cycloheximide)不能改变由不同孵育时间造成的YC 1对神经元不同保护效果的差异。【结论】YC 1抑制低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,YC 1的这一作用可能属于一非基因效应。