一种新的细胞凋亡相关基因—高同型半胱氨酸诱导基 …

目的 探讨高同型半胱氨酸（ＨＣＹ）血症引起心血管病和出生性缺陷的作用机制。方法 采用诱导筛选方法克隆高同型半胱氨酸诱导基因ＨＣＹ－２，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析检测ＨＣＹ－２基因在大鼠不同组织中的表达，以免疫组化方法验证ＨＣＹ－２蛋白在大鼠不同组织中的表达。结果 以诱导筛选方法从大鼠血管平滑肌细胞内克隆到一个新的全长ｃＤＮＡ，即高同型半胱氨酸诱导基因ＨＣＹ－２，它编码１４２个氨基酸。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ     

同型半胱氨酸诱导基因HCY-2在大鼠体内的表达与分布

目的:研究同型半胱氨酸诱导基因(homocysteine induced gene,HCY-2)在大鼠体内的表达及分布,为进一步探讨该新基因的功能奠定形态学基础.方法:用免疫组织化学ABC法染色,对成年Wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑及脊髓等器官中HCY-2基因的表达与分布状况进行形态学观察与半定量分析. 结果:发现心脏中HCY-2阳性反应物质主要在心肌纤维、Pukinje纤维、大动脉中膜平滑肌和外膜营养血管平滑肌中;肾中HCY-2表达强烈,分布较广泛;脊髓前脚运动神经元和中央管室管膜细胞、肺内小支气管至肺泡管上皮及肺泡Ⅱ型细胞HCY-2均高表达;肝、大脑、小脑中表达很弱;胰腺和脾几乎没有表达.结论:同型半胱氨酸诱导基因在大鼠体内分布广泛,但在不同器官中的表达强弱不甚相同,同一器官内HCY-2分布也有极大差异.     

HR24L基因过表达抑制细胞凋亡

目的:研究人类DNA 损伤修复基因HR24L与细胞凋亡的关系.方法:PCR方法扩增HR24L基因开放阅读框序列,克隆入逆转录病毒载体pDOR-neo,转染HeLa细胞,筛选阳性克隆;Southern印迹验证HR24L基因的整合状况.Northern印迹检查HR24LmRNA的细胞内表达水平.过氧化氢、丁酸钠及血清饥饿诱导凋亡,流式细胞计数仪检测凋亡比例,电泳观察DNA Ladder,Western印迹检测凋亡相关蛋白质的表达.结果:获得转染有HR24L基因的HeLa细胞.与HeLa细胞相比,HeLa-HR24L细胞HR24LmRNA表达明显上升.HR24L基因过表达导致Bcl-2的表达升高,抑制caspase-3和Bax的表达,而对p53却无明显的影响.HR24L基因过表达抑制过氧化氢和血清饥饿诱导的细胞凋亡,但对丁酸钠诱导的细胞凋亡却无抑制作用.结论:HR24L基因过表达抑制细胞凋亡.     

苦碟子对高同型半胱氨酸血症细胞凋亡的影响

目的通过大鼠灌胃给予蛋氨酸复制高同型半胱氨酸血症动物模型,观察苦碟子对高同型半胱氨酸血症大鼠动脉病理变化和细胞凋亡的影响。方法将雌性Wistar大鼠共28只随机分为模型组（n=8）、空白对照组（n=7）、叶酸＋VitB12组（n=7）和苦碟子组（n=6）。除空白对照组外,其他组每天2次灌胃给予蛋氨酸0．75kg,连续10周,复制高同型半胱氨酸血症动物模型。叶酸＋VitB12组和苦碟子组同时给予叶酸＋VitB12和苦碟子干预。检测各组大鼠血浆同型半胱氨酸、Caspase-3含量及动脉病理变化和平滑肌凋亡细胞计数。结果模型组大鼠灌胃给予蛋氨酸后血浆同型半胱氨酸、Caspase-3含量和平滑肌凋亡细胞计数均较空白对照组升高（均P〈0．01）;苦碟子组血浆Caspase-3含量和平滑肌凋亡细胞计数与模型组比较降低（均P〈0．01）。结论高蛋氨酸可诱发高同型半胱氨酸血症,引发动脉粥样硬化。苦碟子对高同型半胱氨酸血症诱发的动脉粥样硬化具有预防作用．其机制与抑制细胞凋亡相关。     

苦碟子对高同型半胱氨酸血症IL-8、MCP-1的影响

目的：通过大鼠灌胃给予蛋氨酸复制高同型半胱氨酸血症动物模型，观察苦碟子对高同型半胱氨酸血症大鼠动脉病理变化和IL-8、MCP-1的影响。方法：Wistar雌性大鼠每天灌胃给予蛋氨酸0．75g／kg，10周／2次，复制高同型半胱氨酸血症动物模型。检测各组大鼠血浆同型半胱氨酸、白细胞介素-8、单核细胞趋化蛋白-1含量，组间比较t检验。结果：模型对照组大鼠灌胃给予蛋氨酸可诱发高同型半胱氨酸血症。血浆白细胞介素-8、单核细胞趋化蛋白-1含量升高，苦碟子干预组血浆白细胞介素-8、单核细胞趋化蛋白-1含量降低。结论：高蛋氨酸可诱发高同型半胱氨酸血症，引发动脉粥样硬化。苦碟子对高同型半胱氨酸血症诱发的动脉粥样硬化具有预防作用。     

大鼠小脑颗粒神经元凋亡相关的差异表达基因ARNT2的克隆

[目的]研究凋亡与非凋亡大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neuron,CGN)细胞中基因表达的差异,克隆出与大鼠CGN凋亡相关的基因.[方法]用荧光差异显示聚合酶链反应(florescent differential display polymerase chain reaction,FDD PCR)从低钾诱导的大鼠CGN凋亡模型中筛选出差异表达序列标签(expressed sequence tag,EST),反向Northern blot杂交进一步验证后,用cDNA 5′末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA 5′Ends,5′RACE)克隆差异表达EST的目标基因,用RT-PCR及Western blot进一步验证目标基因mRNA 及蛋白质水平的表达差异.[结果]用FDD PCR筛选出5号差异表达EST,经反向Northern blot验证后,用5′RACE法成功地克隆到5号EST完整开放阅码框,序列同源性分析证实为大鼠基因ARNT2,RT-PCR及Western blot证实低钾诱导后ARNT2mRNA与蛋白质水平的表达均显著地上调,统计学分析显示差异有显著性(P<0.001).[结论]ARNT2在低钾诱导的大鼠凋亡CGN中表达上调,提示ARNT2与CGN凋亡相关并在该过程中发挥重要作用.     

正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1基因转染对肾小球系膜细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP－1）对肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法 利用前期工作中克隆出的人TIMP－1全长cDNA,分别构建出表达正义及反义TIMP－1的重组真核表达载体pcDNA3-TIMP-1(PTs),pcDNA3-ATIMP-1(PTas),并将上述重组质粒转染至大鼠的肾小球系膜细胞中,Northern杂交检测正、反义TIMP－1的表达。无血清诱导大鼠系膜细胞凋亡,利用DNA缺口末端标记（TUNEL）分析、DNA电泳技术在无血清后的不同时间点检测细胞凋亡,RT－PCR的方法检测凋亡相关基因的表达。结果 转染PTas的大鼠系膜细胞可以高效表达反义TIMP－1,无于血清诱导12h开始发生凋亡;无外源基因转染及空载体转染的大鼠系膜细胞在无血清48h发生凋亡;而转染正义TIMP－1的大鼠系膜细胞可高效表达正义TIMP－1,在无血清4d时才发生凋亡。TIMP－1的高表达或低表达可引起大鼠系膜细胞bax的下调或上调,但并不影响bcl-2的表达。结论 TIMP－1可以抑制无血清诱导的大鼠系膜细胞的凋亡,反义TIMP－1对之则有促进作用。这提示TIMP－1在肾脏除了抑制细胞外基质的作用外还具有新的功能。     

叶酸降低高同型半胱氨酸血症大鼠单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的探讨补充叶酸对高蛋氨酸喂养所致的高同型半胱氨酸血症(Hhcy)大鼠主动脉内皮及外周血单个核细胞(PBMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达和释放的影响.方法健康清洁级SD雄性大鼠30只随机分为3组:正常对照(Control)组、高同型半胱氨酸(Hhcy)组、补充叶酸(FA)组.每组10只,分别给予普通饲料;普通饲料加1.7%蛋氨酸;普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%叶酸.饲养45 d,采用高效液相色谱法测定血浆总同型半胱氨酸浓度,用双抗体夹心ELISA方法测定3组大鼠氧化型低密度脂蛋白诱导后PBMC释放炎症趋化因子MCP-1的含量,免疫组织化学染色法及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠主动脉MCP-1的表达.结果大鼠喂以高蛋氨酸饲料45 d可诱导高同型半胱氨酸血症,同时补充叶酸可显著降低血浆总同型半胱氨酸水平(P＜0.01);与Contro1组相比,Hhcy组大鼠血浆总同型半胱氨酸升高,主动脉内皮MCP-1的表达和氧化型低密度脂蛋白诱导的PBMC释放的MCP-1水平均显著升高(P＜0.05,P＜0.01);FA组大鼠血浆总同型半胱氨酸水平降低,主动脉内皮MCP-1的表达及氧化型低密度脂蛋白诱导的PBMC释放的MCP-1水平较Hhcy组显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论叶酸治疗Hhcy大鼠可以降低血同型半胱氨酸水平,同时降低主动脉内皮细胞和外周血PBMC炎症趋化因子MCP-1的表达与释放.     

大鼠胚胎心脏的发育过程及基因HCY-2在大鼠胚胎心脏内的表达

目的 研究大鼠胚胎心脏的发育过程和同型半胱氨酸诱导基因(HCY-2)在大鼠胚胎心脏上的表达，为进一步探讨该基因与心血管疾病之间的关系奠定形态学基础。方法 分别于大鼠妊娠11～19d取胚胎，用组织学和免疫组织化学方法，观察大鼠胚胎心脏的发育过程和Hcy-2基因的表达并进行图像分析。结果 大鼠胚胎心脏11d出现第一房间隔，13d出现第二房间隔，14d心房不完全分隔完成；12d出现室间隔肌部，16d心室巳分隔完成。Hcy-2在大鼠胚胎心脏不同发育时期表达不同，11、12d表达强，13d表达减弱，14、15、16d表达又逐渐增强，17、18、19d表达强。结论 大鼠胚胎心脏内部分隔晚于小鼠；基因Hcy-2与心脏发育密切相关。     

Overexpression of Bcl-2 partly inhibits apoptosis of human ce rvical cancer SiHa cells induced by arsenic trioxide

ＳｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｆｒｏｍｔｈｅＨａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅＳｈａｎｇｈａｉＳｅｃｏｎｄＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ (Ａｓ2 Ｏ3)ｉｓａｎｉｄｅａｌｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ (ＡＰＬ)ａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＮＢ4ｃｅｌｌｓ 1 3　Ｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｘｐｅｒ…     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及基因调控的研究

目的 探讨紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的基因调控机制。方法 用紫杉醇诱导卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡，采用荧光染色，透射电镜，流式细胞仪，蛋白免疫印迹等方法进行检测和观察。结果 卵巢癌细胞在紫杉醇作用下，首先表现为G2／M期阻滞，一定时间后出现细胞凋亡。凋亡抑制基因bcl-2在细胞凋亡过程中低表达而促凋亡基因bax呈高表达。结论 紫杉醇可诱导卵巢癌细胞凋亡，bcl-2和bax基因在紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

Bax基因在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中作用的研究

目的:观察bax基因在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中的表达。方法:将不同浓度的紫杉醇作用于HL-60细胞,用RT-PCR法检测药物孵育前后bax基因的表达水平。结果:在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中bax基因的表达水平上升,并显示剂量效应。结论:bax基因参与紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡的基因调控。     

哇巴因诱导Jurkat T淋巴细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的变化

目的探讨哇巴因对白血病细胞株Jurkat是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl2基因家族在此过程中的作用。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制程度;脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法等观察细胞凋亡;半定量逆转录PCR检测bcl2、bax基因表达水平;应用Westernblot检测Bcl2、Bax蛋白表达水平。结果哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡,细胞凋亡的数量与哇巴因的浓度和作用时间呈正相关,在此过程中出现bax转录,Bax蛋白表达增加。结论bcl2基因家族参与了哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的基因调控。     

反义CDK4基因抑制人结肠癌细胞HT29生长

目的 将反义CDK4导入人结肠癌细胞株HT29细胞,观察其对肿瘤细胞生长的影响。方法 采用lipofectamine转染方法转染HT29细胞,Northern印迹,Western印迹,形态学和流式细胞术等方法用于转染效果的鉴定。结果 转化细胞有反义CDK4的表达,而内源性CDK4mRNA表达和蛋白合成下调,并且转化细胞的恶性行为及表型部分逆转,细胞生长受到抑制、软琼脂集落形成能力明显降低,同时揭示G1期阻滞。HT29-asCDK4细胞有较高的凋亡率。结论 反义CDK4基因可抑制HT29细胞的生长和增殖、诱导其凋亡。为结直肠癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径。     

ERK2-siRNA质粒的构建及其诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:合成、克隆、筛选ERK2-siRNA干扰片段,构建含有ERK2-siRNA的骨架质粒。明确其抑制基因ERK2在HeLa细胞中表达及诱导HeLa细胞凋亡。方法:利用RNA干扰方法构建真核表达载体pGenesil1.1-ERK2-siRNA。体外培养人宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体法将该质粒转染HeLa细胞。利用western blot法检测该质粒转染后ERK2基因的表达,筛选最佳干扰质粒。通过TUNEL法HeLa细胞凋亡染色及HeLa细胞Caspase-3表达的免疫组化染色检测其诱导HeLa细胞的凋亡。结果:成功构建及筛选出ERK2-siRNA质粒。该质粒在体外能够有效诱导HeLa细胞凋亡。结论:干扰ERK2基因的表达能够诱导HeLa细胞的凋亡,应用该方法可以为宫颈癌的治疗提供新思路。     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。