TRAF6敲低对低氧状态下IL-17调控人牙周膜细胞表达OPG及RANKL的影响

目的：探讨TRAF6敲低对人牙周膜细胞在低氧状态经IL-17刺激表达OPG及RANKL的影响。方法：将实验设为常氧加IL-17组、低氧加IL-17组以及单纯低氧组,每组内分为空载组(TRAF6-NC组)和干扰组(TRAF6-shRNA组)。将靶向TRAF6基因的shRNA慢病毒载体(TRAF6-shRNA)感染人牙周膜细胞,通过倒置显微镜观察病毒感染效率并用RT-PCR方法验证,用Western blot 及RT-PCR方法检测分析人牙周膜细胞表达HIF-1α、OPG及RANKL的变化。结果：低氧加IL-17组RANKL与OPG蛋白相对表达量的比值RANKL/OPG高于低氧组。在低氧加IL-17条件下,与TRAF6-NC组相比,TRAF6-shRNA组RANKL表达减少,RANKL与OPG相对表达量的比值RANKL/OPG减少。结论：TRAF6参与低氧状态下IL-17刺激人牙周膜细胞表达骨吸收分子的调控,敲低TRAF6可使低氧状态下IL-17诱导的人牙周膜细胞表达骨吸收分子减少。     

17-β雌二醇对人牙周膜细胞骨向分化时核因子κB受体激动子配体和骨保护因子表达的影响

目的：探讨17—β雌二醇（E2）对人牙周膜细胞（hPDLCs）骨向分化时核因子κB受体激动子配体（RANKL）和骨保护因子（OPG）表达的影响。方法：采用剂量对照设计,评价四代hPDLCs分别在含有0．1％无水乙醇（对照组）、10^-10mol／L E2（生理剂量组）或10^-7mol／LE2（高剂量组）的矿化诱导培养基中培养至72h,时间点的观察荧光定量RT-PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平。结果：高剂量和生理剂量E2均下调hPDLCs的RANKL mRNA的表达水平。高剂量组随时间增加RANKL的表达水平逐渐降低,第24,48和72小时的表达水平分别为对照组的31．0％,23．6％和15．4％;生理剂量组各时间点分别为对照组的28．4％,87．3％和22．6％。不同剂量E2均上调hPDLCs的OPG mRNA的表达水平,尤以第72小时作用明显,生理剂量组表达水平为对照组的210．1％;高剂量组为对照组的171．3％。结论：17—β雌二醇可能通过下调hPDLCs骨向分化时RANKL的表达并上调OPG的表达抑制破骨细胞的分化和牙槽骨的吸收,从而发挥对牙周组织的保护作用。     

缺氧对人牙周膜细胞OPG和RANKL 基因表达的影响

目的：研究缺氧对人牙周膜细胞骨保护素（OPG）和核因子κb受体活化因子配体（RANKL）基因表达的影响,揭示缺氧在正畸牙移动压力侧骨吸收中的作用。方法采取酶消化法结合组织块法培养人牙周膜细胞。取3～5代细胞,分别在常氧（O2浓度为20％,对照组）和缺氧（O2浓度为2％）状态下培养3、6、12、24 h ,采用RT‐PCR检测OPG、RANKL mRNA的表达情况。采用SPSS15．0软件包,对RT‐PCR数据进行单因素方差分析。结果在培养3、6 h时,缺氧组和对照组OPG、RANKL mR‐NA的表达水平比较差异无统计学意义（P＞0．05）;在培养12、24 h时,缺氧组OPG mRNA 表达水平低于常氧组,而缺氧组RANKL mRNA的表达水平高于常氧组,缺氧组RANKL／OPG的比值较常氧组升高,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论缺氧可以影响人牙周膜细胞OPG、RANKL mRNA的表达,在正畸牙移动压力侧骨吸收中起促进作用。     

壮骨止痛方对骨质疏松大鼠核因子κB受体活化因子配体和骨保护素的影响

目的 探讨壮骨止痛方对骨质疏松大鼠核因子κB受体活化因子（receptor activator of NF-κB，RANK）、核因子κB受体活化因子配体（receptoractivator of NF-κB ligand，RANKL）和骨保护素（osteoprotegrin，OPG）表达的影响。方法 将实验动物分为假手术组、模型组、壮骨止痛方高剂量治疗组、壮骨止痛方低剂量治疗组、雌二醇组5组，用酶联免疫免法测定大鼠血清中OPG、RANKL的水平。结果 模型组大鼠血清OPG降低、RANKL水平升高，经壮骨止痛方药物干预后，大鼠血清OPG水平明显下降、RANKL水平明显下降。结论 壮骨止痛方药物可以降低大鼠血清RANKL/OPG的比值，激活RANKL/RANK/OPG信号系统，达到预防治疗骨质疏松的作用。     

骨保护素的研究进展

1997年，Simonet等发现一种能够调节骨代谢的糖蛋白，将其命名为骨保护素（osteoprotegerin，OPG）。它与细胞核因子KB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand，RANKL）、细胞核因子κB受体活化因子（receptor activator of nuclear factor kappa B，RANK）组成的OPG／RANK／RANKL系统使人们对骨质疏松等疾病的发病机理有了更深入的认识。OPG与骨代谢、心血管系统、免疫系统等都有着重要联系，在类风湿性关节炎、骨髓瘤、冠心病等多种疾病中都发现OPG mRNA水平的异常。OPG的作用主要通过OPG／RANK／RANKL系统来实现，它的临床应用会给这些系统的相关疾病的诊治带来新的突破。     

健脾活血补肾汤对CIA大鼠血清IL-17及OPG／RANKL表达的影响

目的通过观察健脾活血补肾汤对关节炎（collageninduced arthritis,CIA）模型大鼠血清中炎性细胞因子白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）、骨保护蛋白（osteoprotegerin,OPG）及核因子KB受体活化因子配体（receptor activator for nuclearfactor—KBligand,RANKL）表达水平的影响,探索健脾活血补肾汤保护强直性脊柱炎关节骨质破坏潜在的分子药理机制。方法利用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原建立大鼠关节炎（CIA）模型,自造模成功后第3天起分别按健脾活血补肾汤高、中、低剂量给药组及生理盐水给予大鼠灌胃处理,每天1次,连续灌胃30d,处死大鼠,心脏采血取血清,用ELISA夹心法检测大鼠血清中IL～17、0PG及RANKL表达水平。结果健脾活血补肾汤高、中、低各剂量组CIA大鼠血清IL－17及RANKL水平均较模型组明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;而OPG水平较模型组显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论健脾活血补肾汤可能通过降低CIA模型大鼠血清中IL－17及RANKL表达水平,升高OPG表达水平,而起到延缓关节炎性损伤所致的骨质破坏的作用。     

Periostin表达在乳恒牙替换中的临床意义

目的 探讨Periostin在替牙期对骨改建和自噬的影响，研究Periostin在乳恒牙替换过程中调节骨代谢平衡的作用机制。方法 收集笔者所在医院因乳牙根尖周病及多生牙拔除的牙根周围粘连牙槽骨，体外培养成骨细胞，分为实验组和对照组各15例，实验组培养基中加Periostin，原位杂交法检测标本中Periostin、骨代谢基因、自噬基因的mRNA水平。蛋白质印记法检测成骨细胞中骨代谢蛋白，自噬蛋白表达。结果 原位杂交结果显示，实验组Periostin表达低于对照组（P<0.05），核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κb ligand，RANKL）、LC3、BECN1表达及RANKL/骨保护素（osteoprotegerin，OPG）值高于对照组（均P<0.05），OPG表达差异无统计学意义（P>0.05）；蛋白质印迹法显示实验组RANKL、RANKL/OPG、LC3Ⅱ、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ与对照组比较水平低（均P<0.05），OPG、LC3Ⅰ较对照组差异无统计学意义（均P>0.05）。结论 Periostin通过降低RANKL表达及改善过强自噬状态，从而减少炎症所致的骨吸收。     

慢性间歇低氧对小鼠骨密度和骨代谢的影响

目的：探讨慢性间歇低氧（CIH）对骨密度（BMD）和骨代谢的影响。方法将16只12周龄C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为慢性间歇低氧组（CIH组）和正常对照组（CON组）,每组8只。CON组小鼠在正常环境下饲养,CIH组小鼠在间歇低氧环境下饲养,低氧暴露时间为每日9：00-17：00,6d/周,共8周。于8周末取血,用ELISA法测定血清抗酒石酸酸性磷酸5b （TRACP-5b）、骨钙素（OC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;取右侧股骨检测其BMD;取左侧股骨观察骨组织形态学改变,并分别采用免疫组化和real- time qPCR法检测骨保护蛋白（OPG）和核因子-κβ受体活化因子配体（RANKL）和其mRNA表达。结果与CON组相比,CIH组小鼠BMD、血清OC水平及OPG/RANKL mRNA比值均明显下降（P＜0.05或0.01）,而血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织内RANKL和mRNA表达均明显升高（P＜0.05或0.01）;但骨组织内OPG和mR-NA表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）;小鼠股骨干骺端骨小梁分布稀疏,变细及断裂。血清IL-6水平与BMD呈负相关（P＜0.05）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.01）;血清TNF-α水平与BMD呈负相关（P＜0.01）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.05）。结论 CIH能导致骨吸收增加、骨形成下降和BMD下降,与低氧以及CIH引起的IL-6、TNF-α水平升高导致RANKL升高有关。     

白细胞介素29抑制破骨细胞分化的研究

目的:新型细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-29具有抗病毒?抗肿瘤?免疫调节等作用,但其在破骨细胞分化中的作用尚未见报道?本研究探讨IL-29对核因子κB受体活化因子配基(receptor activation of nuclear-κB ligand,RANKL)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7(破骨前体细胞)向破骨细胞分化的作用?方法:流式检测IL-29特异性受体IL-28Rα在RAW264.7细胞表面的表达,CCK8法检测IL-29对RAW264.7细胞增殖的影响?不同浓度IL-29重组因子加入到RANKL诱导的RAW264.7向破骨细胞分化的体系中,5 d后通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测IL-29对破骨细胞数目的影响?实时荧光定量PCR检测IL-29对破骨细胞标志性基因TRAP?CTR?CTSK及相关基因TRAF6?RANK表达的影响?结果:IL-29呈剂量依赖性抑制RANKL诱导的RAW264.7中破骨细胞的形成,100 ng/mL IL-29可显著抑制破骨细胞的形成以及破骨细胞形成相关基因TRAP?CTR?CTSK?TRAF6?RANK的表达?结论:本研究首次证实IL-29可以抑制破骨细胞形成及其功能?     

Pellino1 SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF⁃κB信号转导的影响

目的：研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物（small ubiquitin?related modifier,SUMO）修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子?6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）介导的核因子κB（nuclear factor κB,NF?κB）信号转导的影响。方法：构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒,与TRAF6、泛素（ubiquitin,Ub）质粒共转染至HEK?293细胞中,荧光显微镜观察转染效率,免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用;同时,检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平。采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导炎症反应,分提胞浆胞核蛋白,Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α（inhibitor of NF?κBα,IκBα）的磷酸化和NF?κB P65的核转位,分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF?κB信号通路的影响。结果：与野生型Pellino1相比,SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平,而且可增加其与TRAF6的相互结合作用,并增强TRAF6的泛素化修饰;LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF?κB P65的核转位,转染使Pellino1 SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF?κB信号激活。结论：Pellino1 SUMO修饰突变,可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合,增强TRAF6的泛素化,最终促进TRAF6介导的NF?κB信号通路的激活。