流行性出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

用流行性出血热病毒(EHFV)陈株血凝素(HAN)免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤生长孔率为60％,阳性率为22％,三次克隆化培养阳性率达100％,通过筛选建立一株杂交瘤细胞1H8。其腹水单克隆抗体(McAb)的间接免疫荧光滴度为1:16×10~4,其血凝抑制滴度为1:5120。经染色体核型分析,1H8杂交细胞染色体为85—105条,每个细胞均含1—2条中着丝点标记染色体。经琼脂双扩散试验,1H8McAb属IgG2b亚类。该McAb与17株不同来源的EHFV都有免疫荧光反应,且对5株不同来源的EHFV—HAN具有血凝抑制活性。故1H8为血凝抑制抗体。这说明17株EHFV都具有血凝素抗原决定簇,但是1H8McAb对它们具有不同的活性。     

适于标记的HFRS病毒组特异性McAb的建立及其应用

用陕西81-14A株HFRSV,免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗HFRSV抗体的C_4株杂交瘤细胞系。C_4株McAb与我国各地的28株及朝鲜的76-118株、Seoul株HFRSV均产生免疫反应,表明是HFRSV组特异性扩体,并适用于荧光素及辣根过氧化物酶标记。经初步应用,效果满意。     

人单克隆抗独特型抗体诱导动物产生有中和活性的抗HFRSV抗体

在建立稳定分泌具有肾综合征出血热病毒(HFRSV)抗原内影像的抗独特型(αId)人单抗(Ab_2β)的基础上,用纯化的αId人单抗免疫6只BALB/c小鼠和2只大耳白兔,均有效地诱导产生特异性的抗HFRSV抗体(Ab_3)(IFAT),抗体滴度随加强免疫次数的增加而增高。αId诱导的抗HFRSV抗体与HFRSV野鼠型76/118株和家鼠型L99株均起反应,其中免疫小鼠血清具有一定效价的血凝抑制活性和中和活性。从而进一     

分泌抗人A型、B型单克隆抗体细胞系的建立及初步应用

本文共得到分泌血型抗体的杂交瘤细胞6株,其中抗A 5株,抗B 1株。杂交瘤细胞系AN3/77、92、58、60、90(抗A)和AN1/4、25、45、40(抗B),经详细鉴定,其结果如下:(1)抗A 细胞系和抗B 细胞系在试管中传代3个月以上,稳定地分泌抗体,属鼠IgM。(2)小鼠腹腔接种后,腹水抗体效价为1:10000～1:20000(抗A)和1:320000～1:640000(抗B)。(3)吸附试验和阻断试验,证明抗A McAb 和抗B McAb 具有高度特异性。(4)随机抽样人血样品656份,用常规标准血清和本文所得两种单抗体,进行血型鉴定,结果二者完全相符。     

医学期刊速览

高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用[摘要]以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FCl、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析。结果发现这6种株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒性血凝素单抗可适用H5N1病毒的诊断…     

抗葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体的免疫学特性鉴定及其应用

作者以国产纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)免疫BALB/c小鼠制备出6株抗SEB单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系(S_1,S_2,D_1,3D_6,B_4及E_7).对其分泌的抗SEB McAb的主要免疫学特性鉴定的结果表明,6株McAb具有相同的表位特异性或构象表位相关;它们的相对亲和力由高至低依次为:S_1>D_1>3D_6>B_4>S_2>E_7;对SEB刺激外周血单个核细胞(PBMC)增殖活性的中和抑制作用不一(抑制率65.1％-22.0％).在上述鉴定的基础上,应用D_1株McAb建立的BA-ELISA及反向被动血凝试验(RPHA),检测了SEB人工污染的4种食物标本,所获敏感性分别为:0.38-0.75ng/ml及9.4-15.6ng/ml.     

流行性乙型脑炎病毒McAb的研究

将SP2/0-Ag小鼠骨髓瘤细胞与经乙脑病毒SA_(14)株免疫的BALB/C鼠脾细胞融合,获3株分泌乙脑McAb的杂交瘤细胞,其中32号用血凝抑制试验测抗体时不仅抗乙脑,而且和乙组其它虫媒病毒有交叉反应;51号无血凝抑制作用,用免疫荧光法测抗体时只和乙脑病毒     

淋巴细胞杂交瘤学术会议论文摘要——25个分泌抗SabinⅠ型疫苗株McAb杂交瘤细胞系的建立及其在抗原分析中的应用

使用杂交瘤技术可制备针对单一抗原决定簇的McAb,后者是鉴别抗原微小差异的有效工具。在我们建立的26个分泌McAb的杂交瘤细胞系中,除E_8用Brunhilde株免疫所得外,25个均用Sabin I型LSc 2ab株免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0或NS-1细胞融合而得。在4次成功的融合试验中,共接种600孔,其中有明显克隆生长的366孔,融合率61％、间接免疫荧光法筛选出抗体阳性孔10个,微量中和试验法筛选出阳性孔27个。经2～3次有限稀释后,仍持续分泌抗体的杂交瘤细胞系中,荧光试验阳性的有7个,中和     

25个分泌抗SabinⅠ型疫苗株单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其在抗原分析中的应用

用Sabin Ⅰ型疫苗株建立25个杂交瘤细胞系,其中7个间接免疫荧光试验阳性,18个中和试验阳性,它们可分泌三种 McAb:型特异的 5个,株特异的 6个,二者之间的 13个;L_(76)号 McAb既和10株 Polio Ⅰ型病毒结合,又可与Ⅱ型 MEF-1 病毒起阳性荧光反应;株特异性McAb 可用微量中和试验鉴别 Sabin 株与非 Sabin株;文中初步分析10株 Polio Ⅰ型病毒的抗原性。     

应用ELISA筛选脊髓灰质炎病毒单克隆抗体及其抗原分析

在Ⅲ型Polio病毒McAb的研究中,用ELISA法筛选出60株阳性杂交瘤细胞系,其中11株中和试验阳性。ELISA试验型特异的McAb有10个,中和试验型特异的McAb有5个。McAb C_(36)和C_(50)只能与疫苗株和类疫苗株起中和反应而不能与非类疫苗株病毒起反应。因而这二株McAb具有区分Ⅲ型Polio野毒株与疫苗株相关病毒株的能力。另外应用McAb初步分析了17株Polio Ⅲ型病毒的抗原性。     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

目的制备抗赭曲霉毒素A（OA）的单克隆抗体（McAb）并对其进行初步鉴定,在此基础上建立竞争抑制酶联免疫吸附试验（ELISA）用于OA的检测。方法采用小剂量长周期的免疫方案,以OA 牛血清白蛋白（BSA）偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合法获得分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法大量制备McAb,以OA为竞争抗原,建立检测OA的竞争抑制ELISA。结果OA BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1:512?000,与BSA有强烈的交叉反应。细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,抗OA BSA的McAb与BSA的交叉反应率仅为3.5%,对分泌抗OA BSA特异的McAb的细胞株经3轮克隆化,抗体分泌阳性率达到100%,建立了1株能稳定分泌抗OA BSA McAb的杂交瘤细胞株,竞争抑制法进一步证明了该抗体是特异针对OA的,腹水诱生法制备了大量的McAb。竞争抑制ELISA线性范围为0.24～125?ng/mL,线性方程y=-0.113?2logx+0.901?6,相关系数r=0.98,最低检出浓度为0.24?ng/mL。样品的加标回收率为97.07%～107.83%。结论获得了分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,建立了OA检测的简单、灵敏、高效的ELISA检测方法。     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的 :制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体 (SjAWMMcAb) ,探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法 :用SP2 / 0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合 ,经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体 ;采用Westernblotting和免疫荧光测定 (IFA)对其进行鉴定 ;小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果 :建立了 3个分泌SjAWMMcAb的细胞株 ,Westernblotting显示 3个McAb可识别 5种不同分子量的蛋白 ,IFA表明 3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应 ,3B6和 1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高 4 1.78%和 2 4 .12 %。结论 :某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体制备及其对病毒抗原特性的鉴定

用肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）免疫Ｌｏｕ／ｃ大鼠脾细胞与ＩＲ９８３Ｆ骨髓瘤细胞融合，获得１１株能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系。用放射免疫沉淀、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及免疫酶技术等对这一组大鼠单克隆抗体（单抗）进行了特性鉴定和病毒抗原性分析。发现１１株单抗中，９株为抗核壳蛋白（ＮＰ）特异性，２株为抗Ｇ２糖蛋白。大多数抗ＮＰ单抗无中和活性及血凝抑制（ＨＩ）活性，但有２株例外，具有一定程度的中和或（和）ＨＩ活性。而抗Ｇ２单抗均只有一定程度的中和或（和）ＨＩ活性。在ＨＦＲＳＶ抗原性分析方面，可初步将１１株大鼠单抗分成组、亚组、野鼠型及亚型特异性单抗，并对上述单抗特性进行了讨论。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究

作者用绿脓杆菌多价菌苗免疫的人外周血淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓癌细胞融合,一次成功。细胞融合率为74％,抗体阳性率为19.7％。经3次克隆化后共获得2株能稳定地分泌抗绿脓杆菌人单克隆抗体的杂交瘤细胞株A_3和F_3。核型分析可见人与小鼠的染色体共存。亚类检定均属人IgG,免疫印迹实验证明它们可识别绿脓杆菌抗原分子量为43kd和36kd的特异组分。     

抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

采用登革Ⅱ型病毒免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞,在40％PEG1000的作用下进行融合,获得6株分泌抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤,用间接免疫荧光法鉴定其单克隆抗体(McAb)对登革Ⅱ型病毒均有特异性。HIA和CF试验有5株McAb为CF型特异的。5株具有HIA抑制活性。     

抗人IgM单克隆抗体的制备及其特征研究

以人IgM作为抗原免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤技术获得5株分泌抗人IgM单抗的杂交瘤细胞株.通过酶联免疫吸附试验、免疫双向扩散试验证明:该组单抗仅与人IgM起反应,而不与其他各类免疫球蛋白反应。间接免疫荧光试验证明:该组单抗测得不同人群外周血淋巴细胞阳性数与用抗B细胞单抗和直接免疫荧光法测得的结果接近.免疫转印试验证明抗体作用的分子量为50～70kd(dalten法定单位为u,换算系数0.9921,下同).提示为IgM.本文还对单抗应用价值进行了讨论。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备及其对抗原决定簇特异性的研究

用杂交瘤技术建立三株分泌抗甲状腺球蛋白(TG)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所获三种单克隆抗体经兔抗小鼠IgG亚类、IgM及IgA血清鉴定表明,两种为IgG_1,一种为IgA;三种含单克隆抗体小鼠腹水的滴度(ELISA法)均为51200以上;以竞争性固相抗体结合试验测定它们对抗原决定簇的特异性差异,结果发现三种单克隆抗体的抗原结合部位是不同的,但对抗原的结合有一定的相互竞争抑制现象。     

抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8 000~1∶256 000,培养上清效价为1∶256~1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究。