环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562/A02 细胞的多药耐药

目的:探讨环孢菌素A(CsA)、汉防己甲素(Tet)及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用MTT法测定柔红霉素(DNR)对细胞的半数抑制量(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果:DNR对K562细胞和K562/A02细胞IC50分别为0.27和21.22 mg.L-1;CsA(1 mg.L-1)及Tet(0.1 mg.L-1)单独和联合处理K562/A02后,DNR的IC50分别为7.83、5.32和2.32 mg.L-1;CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响;K562/A02细胞48 h凋亡率为2.19%,DNR(1 mg.L-1)作用K562/A02细胞凋亡率为2.70%,CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10.27%、17.64%和52.79%;两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论:CsA及Tet均可逆转耐药,且联合作用逆转效果更强。     

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的：探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562／A02耐药性的逆转作用。方法：以柔红霉素（DNR）和高三尖杉酯碱（HHT）联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562／A02及敏感细胞系K562／S，以四唑盐比色法（MTT）检测两种化疗药物的半数抑制浓度（IC50），以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果：冬凌草甲素可明显减小K562／A02细胞对DNR，HHT的IC50，降低耐药倍数，下调P170蛋白的表达，增高细胞内DNR的浓度，而对K562／S细胞无显著影响。结论：冬凌草甲素可逆转药细胞系K562／A02的耐药性，是一种很有希望的抗白血病中药。     

磁性纳米四氧化三铁及纳米金协同柔红霉素作用于K562/A02细胞的初步研究

目的：研究磁性纳米四氧化三铁（Nano-Fe3O4）及纳米金（Nano-Au）是否具有逆转K562/A02细胞耐药的作用。方法：用MTT法测定盐酸柔红霉素（DNR）对K562/A02和K562细胞的毒性,并观察DNR与Nano-Fe3O4或Nano-Au的联合作用。结果：体积分数为25%的Nano-Fe3O4及Nano-Au能有效增强DNR的细胞毒作用,提高细胞的凋亡率,差异具有显著性。结论：Nano-Fe3O4及Nano-Au结合DNR后均能有效逆转K562/A02细胞的耐药性。     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562／A02核因子kB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562/A02核因子κB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

三氧化二砷协同柔红霉素对K562／A02细胞株的作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)及柔红霉素(DNR)联合应用后对人白血病耐药细胞株K562/A02的作用,探讨其应用于临床的可能性。方法:采用MTT比色法测定单用DNR及DNR与不同浓度As2O3合用时的生长抑制效果,用流式细胞术检测胞内DNR浓度及凋亡。结果:DNR对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50)为15.4 mg/L,加用0.25,0.5,1.0μmol/L As2O3时的IC50分别为1.73,0.78,1.42 mg/L。1 mg/L DNR作用于K562/A02 48 h后的凋亡率为(17.4±2.19)%,0.5μmol/L As2O3作用于K562/A02 48 h后的凋亡率为(53.8±5.6)%,而两药合用后凋亡率为(65.5±6.2)%,但合用后胞内DNR浓度并未增加。结论:低浓度的As2O3与DNR联合应用对K562/A02细胞的抑制为协同作用,其效应与增加药物的诱导凋亡作用有关,而非通过增加胞内DNR浓度。     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的研究

目的:探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的作用.方法:以不同浓度的冬凌草甲素处理K562/A02及敏感株K562/S细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测半数抑制率(IC50),分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内DNR浓度的影响.结果:冬凌草甲素可诱导两种细胞凋亡,两者在各浓度、各时点无显著差异;可显著逆转K562/A02细胞对DNR、HHT的耐药性,提高该细胞内DNR的浓度.结论:冬凌草甲素对K562/A02细胞有诱导凋亡、逆转耐药性的作用,是一种很有希望的抗白血病中药.     

人红白血病多药耐药细胞裸鼠移植瘤模型建立的初步研究

目的：建立耐药特性稳定的裸鼠移植瘤动物模型,为进行体内肿瘤耐药机制研究和逆转药物的筛选提供实验模型。方法：体外培养白血病细胞系k562／A02及k562细胞,建立裸鼠的皮下肿瘤,K562／A02耐药细胞接种于裸鼠右背侧皮下,而亲本l〈562细胞接种裸鼠左背侧皮下,接种细胞数分别为1×10。、5×10。、1×10。、5×10’细肜只,观察肿瘤成瘤情况及生长特性,并比较体内耐药模型与体外细胞株耐药倍数的变化,同时利用免疫组织化学染色对裸鼠K562／A02移植瘤多药耐药蛋白Pgp进行鉴定。结果：1）K562裸鼠移植瘤的成瘤率为78．13％,K562／A02裸鼠移植瘤的成瘤率为81．25％。大约于第5—10天成瘤,两种肿瘤生长速度无明显差别;2）裸鼠K562／A02移植瘤肿瘤细胞和体外培养原代细胞对阿霉素的IC50分别为169．38ug／ml和181．69ug／ml,而K562移植瘤和体外k562细胞的IC50分别为3．47ug／ml和3．61ug／ml,耐药倍数无明显差异;3）K562／A02裸鼠移植瘤肿瘤细胞Pgp表达稳定。结论：以K562／A02细胞建立的裸鼠移植瘤模型,仍保持近似体外的耐药活性,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型。     

环孢霉素A逆转Pgp多药耐药机理的研究

目的 控讨环孢霉素A（CsA)逆转糖蛋白Pap耐药细胞株K562/ADR耐药的机理。方法 采用RT-PCR、荧光法、MTT和共聚焦激光扫描镜等方法，研究CsA对柔红霉素（DNR）在Pgp耐药细胞株K562/ADR蓄积、毒性及分布的影响。结果 CsA可明显增加DNR在耐药细胞内的蓄积，恢复DNR在耐药细胞核、浆的弥漫分布，提高耐药细胞对DNR的敏感性。结论 CsA通过增加耐药细胞内化疗药物含量和逆转化疗药物异常分布的作用，恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。     

环孢菌素A与细胞因子联合逆转白血病多药耐药性的体外研究

目的 探讨环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）联合细胞因子对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的逆转作用,方法 以甲基四唑蓝法测定柔红霉素（ＤＮＲ）的细胞毒性,用流式细胞仪技术测定细胞内罗丹明（Ｒｈ１２３）浓度,用ＲＴ－ＰＣＲ及ＪＳＢ－１抗体分别检测多药耐药（ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ及其Ｐ糖蛋白的表达。结果 １μｍｏｌ／ＬＣｓＡ,５００Ｕ／ｍｌ干扰素２００Ｕ／ｍｌ白介素２（ＩＬ－２）均能增加ＤＮＲ对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的     

环孢菌素A诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响及其作用机制。方法：采用瑞氏染色、流式细胞术观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响K562细胞凋亡时Bcl-2基因表达的改变情况。结果：20μmol/L环孢菌素A作用24 h可诱导K562细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞术显示凋亡峰,细胞周期分析发现环孢菌素A可使K562细胞生长阻滞于G0~G1期。环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组（P〈0.01）;环孢菌素A处理组的Bcl-2蛋白阳性率低于对照组（P〈0.01）。结论：环孢菌素A可诱导K562细胞株凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2基因表达。     

亚砷酸对白血病K562/A02细胞的作用及机制

目的研究亚砷酸对白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用及对多药耐药基因1（mdr1）、P糖蛋白（P-gp）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨亚砷酸逆转白血病多药耐药（MDR）的作用机制。方法将K562/A02细胞与不同浓度的亚砷酸（0、0.5、2.0、5.0μmol/L）共同孵育,分别在24、48、72h时,用Wrights染色法观察K562/A02细胞形态,流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR法检测mdr1mRNA的表达,免疫组织化学法观察P-gp表达,并用ELISA法检测VEGF的浓度。结果随着亚砷酸作用浓度和时间的增加,K562/A02细胞的数目减少,并出现凋亡形态学改变,FCM显示随着作用浓度和时间的增加,细胞凋亡率逐渐上升;从作用48h组开始,mdr1mRNA及P-gp的表达出现显著降低（P〈0.05）,mdr1mRNA条带颜色较空白对照组明显变浅,mdrl/GAPDH灰度比值下降,此时,P-gp的灰度值上升,且随亚砷酸作用浓度和时间的增加,mdr1mRNA条带颜色进一步变浅,表达水平进一步下降;ELISA法检测表明从0.5μmol/L作用24h组开始,VEGF浓度即下降至405.02pg/mL（P〈0.05）,相同作用时间下以5.0μmol/L组较其它浓度组下调VEGF的作用最为显著。结论亚砷酸呈药物浓度-时间依赖性抑制K562/A02细胞增殖,诱导其凋亡,下调VEGF表达,有效抑制了mdrlmRNA的产生和P-gp的合成。     

盐酸小檗碱对环孢素A在大鼠小肠吸收的影响

目的研究盐酸小檗碱（berberine chloride，Ber）对环孢素A（cyclosporin A，CsA）小肠吸收的影响。方法三组大鼠分别以CsA试液、含Ber 100mg·L^-1的CsA试液、含Ber200mg·L^-1的CsA试液，进行在体肠段吸收实验，HPLC法测定CsA浓度。结果与单用CsA相比，空肠段合用Ber组CsA吸收率有明显增加，回肠段合用Ber组CsA吸收无明显变化。结论Ber对CsA小肠吸收有促进作用。     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562／A02凋亡,逆转耐药性？…

目的：探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２凋亡、逆转耐药性的作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素处理Ｋ５６２／Ａ０２及敏感株Ｋ５６２／Ｓ细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法检测半数抑制率（ＩＣ５０）,分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素（ＤＮＲ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内ＤＮＲ浓度的影响。结果：冬凌草甲素可诱导两种细胞     

川芎嗪对转基因多药耐药细胞K562/MDR耐药性的逆转作用

目的：研究川芎嗪（TMP）与环孢菌素A（CsA）单独及联合逆转人红白血病多药耐药细胞K562/MDR的多药耐药性（MDR）,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以倍比稀释后不同浓度的TMP（50～6　400 mg?L^-1 ）和CsA（0.5～256 mg·L^-1 ）作用于体外培养的K562/MDR细胞72 h,采用MTT法检测细胞生长率,确定TMP和CsA的非细胞毒性剂量;采用非细胞毒性剂量,实验分为5组：G1组（TMP+ADM+K562/MDR）、G2组（CsA+ADM+K562/MDR）、G3组（TMP+CsA+ADM+K562/MDR）、阴性对照组（以K562/S代替K562/MDR）、空白对照组（以1640培养基代替药物）,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC₅₀,计算耐药倍数和逆转倍数;利用荧光分光光度法检测各组细胞内ADM浓度;流式细胞术检测跨膜糖蛋白P-gp的表达情况。结果：TMP及CsA的非细胞毒性剂量分别为320和2.0 mg·L^-1,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA均能降低K562/MDR细胞的耐药性,逆转倍数分别为5.2及9.6倍,并且两者联合应用,逆转倍数为15.6倍;TMP和CsA单独及联合应用均能明显增加K562/MDR细胞内ADM浓度;TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,并且两者联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显降低,与阴性对照组比较差异有显著性（P<0.01)。结论：TMP和CsA单独及联合应用可逆转K562/MDR细胞对化疗药物ADM的MDR,且两者具有协同作用。其逆转机制可能为降低P-gp水平,升高细胞内ADM浓度,增强对ADM的敏感性,从而发挥治疗肿瘤的作用。     

G-CSF和IFN-α对K562/A02耐药细胞株的抗耐药作用

[目的 ]观察G CSF ,IFN α分别或联合应用于K 562 /A0 2耐药细胞株时对柔红霉素敏感性的影响 .[方法 ]通过MTT法测定各组的K 562 /A0 2细胞的抑制率 .[结果 ]G CSF组及IFN α组K 562 /A0 2细胞抑制率明显升高 ,分别为 55 0 8%± 2 18%及 56 72 %± 1 77% ,与柔红霉素组比较具有显著性差异 ;联合用药组K 562 /A0 2细胞的抑制率明显升高 ,与柔红霉素组、G CSF组及IFN α组比较均具有非常显著性差异 . [结论 ]G CSF及IFN α逆转K562 /A0 2的多种药物耐药性 ,且具有协同作用