高,低分化鼻咽癌细胞中间纤维的研究

采用选择性双步抽提法,配合普通组化及免疫组化法、整装电镜法及中间纤维蛋白电泳扫描定量分析法,对体外培养的高分化鼻咽癌细胞株CNE-1及低分化鼻咽癌细胞株CNE-2Z的中间纤维进行综合研究。结果表明:两株细胞内均含有网状排列的角蛋白纤维,但细胞分化不同,其中间纤维的排列及角蛋白的组成和含量均明显不同。低分化鼻咽癌细胞中间纤维的排列较高分化细胞紊乱,角蛋白含量低,但亚基种类多。     

食管癌组织角蛋白表达的免疫组化研究

角蛋白是广泛存在于多种上皮及肿瘤细胞内的一种中间丝，它对肿瘤的起源，分化程度的鉴别诊断具有重要价值。我们对56例食管石蜡包埋组织采用免疫组化法进行了角蛋白表达的研究，旨在了解食管癌不同病期、分化程度、淋巴结转移和病变浸润深度与角蛋白表达的关系及对临床预后的判断价值。     

培养细胞中间纤维表达的研究

应用角蛋白PKK_1、PKK_2、PKK_3、波状蛋白、结蛋白、神经纤维蛋白与胶质纤维酸性蛋白5类7种单克隆抗体研究食管上皮细胞、食管癌、肝癌、肺癌、人胚肺转化细胞、胃癌、星形胶质细胞瘤(BT_(420),BT_(325))、肌细胞、肺细胞及神经纤维细胞等11种培养细胞的中间纤维表达。结果表明,不同细胞具有不同的中间纤维表达的特异性。据此特异性可鉴定胶质细胞、神经细胞、间质细胞、肌细胞与上皮细胞的类型及鉴别正常细胞与肿瘤细胞系的性质与来源。PKK_3还可用于腺癌细胞检测。     

中间丝系列单克隆抗体的研制与特性鉴定

中间丝(Intermediate Filaments,IF)是真核细胞内的蛋白性丝状结构,在电镜下其直径为8～10mm,介于微丝与微管之间而得名。它们广泛地分布于各种细胞内,特别是在核周与细胞连接点上,与微丝微管—起构成细胞骨架。中间丝是细胞骨架及细胞成分中最为稳定的部分,当用高、低离了强度溶液或非离子去垢剂溶解细胞蛋白、离心去除后,中间丝仍为不溶部分,易于分离。它由多肽所组成,但各种中间丝多肽的分子量差别极大,从40～200KD不等。近年在细胞生物学中的一项重大成就是阐明了中间丝可分成五大类,一种细胞类型主要含有一种中间丝,如(1)上皮型细胞含有细胞角蛋白(分子量4D～65KD);(2)肌肉型细胞含有结蛋白(51KD);(3)间质型细胞含有波形蛋白(55KD);(4)神经胶质细胞含有胶质纤维酸性蛋白(50KD);(5)神经细胞含有神经微丝蛋白(70、140、210KD)。可见它们在细胞内的分布具有一定的型特异性。进一步研究发现,细胞内的中间丝在细胞恶变时,仍保留其表达能力,因而可用于低分化肿瘤的组织起源的判断,成为组织肿瘤标志物之一,在肿瘤病理学中具有很大的实用价值。     

人胎儿喉黏膜上皮细胞的发育分化特点

[目的]研究中国人胎儿喉黏膜上皮细胞发育分化的特点.[方法]收集9～40周胎儿喉标本33例.应用连续切片HE染色、细胞角蛋白免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜观察其黏膜上皮.[结果]9周胎喉黏膜由1～2层低柱状细胞组成,仅表层细胞表达微弱的角蛋白,13周后出现多种类型的上皮细胞,上皮全层均表达细胞角蛋白;会厌舌面、声带被覆鳞状上皮,会厌喉面、室带、喉室及声门下区被覆假复层纤毛柱状上皮,其基底细胞和中间细胞的胞浆内含有丰富的胞浆泡状系统、张力原纤维和桥粒;过渡上皮和纤毛上皮中均散在岛状鳞状上皮但出现时间不一致.[结论]人喉黏膜上皮细胞的分化发生于胎儿9～13周期间;纤毛上皮的基底细胞和中间细胞具有双向分化的潜能;过渡上皮和纤毛上皮中出现岛状鳞状上皮是生理现象,前者由复层立方上皮分化而来,后者由纤毛上皮分化而来.     

角蛋白17在皮肤科中的研究进展

表皮角质形成细胞占整个表皮结构组成的85%以上,角蛋白是表皮及毛发角质形成细胞内的主要结构蛋白,是角质形成细胞和其他上皮细胞的标志性成份,角蛋白17（K17）属于其中一种。K17是角质形成细胞增殖分化的标志性分子,可能与银屑病等疾病有关。近年来, K17在皮肤科疾病中的表达研究也逐渐增多,笔者就其在皮肤科中的研究进展作一综述。     

波形蛋白表达和功能的研究进展

细胞骨架包括微管、微丝和中间纤维,中间纤维家族中包含波形蛋白、角蛋白等许多成员,其中波形蛋白(vimentin)是间质细胞中最主要的中间纤维,它存在于中胚层起源的细胞中,如成纤维细胞、内皮细胞和白细胞等[1],并与微管、微丝共同形成了一个细胞支架网络而维持细胞完整性.     

小鼠H_(22)肿瘤的酶组织化学和超微结构观察

光镜下H_(22)肿瘤细胞弥漫索样排列,网状纤维包绕瘤细胞团形成巢状,胶原纤维极少。碱性磷酸酶反应产物主要附着于细胞膜部位;酸性磷酸酶细胞内散在分布;细胞色素氧化酶及乳酸脱氢酶弥散位于细胞浆内。各种酶反应产物均较匀细。扫描和透射电镜示瘤细胞表面微绒毛发达,细胞间可见桥粒连接,线粒体、粗面内质网和多聚核糖体丰富,胞浆内细胞器有极性分布倾向。以上结果不仅为该瘤株的进一步应用提供了有益的参考资料,同时提示关于H_(22)肿瘤已转变为多形细胞肉瘤的结论是值得商榷的,其应是一株低分化肝癌腹水瘤模型。     

人胎儿喉黏膜上皮细胞的发育分化特点

【目的】研究中国人胎儿喉黏膜上皮细胞发育分化的特点。【方法】收集9—40周胎儿喉标本33例。应用连续切片HE染色、细胞角蛋白免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜观察其黏膜上皮。【结果】9周胎喉黏膜由1—2层低柱状细胞组成，仅表层细胞表达微弱的角蛋白，13周后出现多种类型的上皮细胞．上皮全层均表达细胞角蛋白；会厌舌面、声带被覆鳞状上皮，会厌喉面、室带、喉室及声门下区被覆假复层纤毛柱状上皮，其基底细胞和中间细胞的胞浆内含有丰富的胞浆泡状系统、张力原纤维和桥粒：过渡上皮和纤毛上皮中均散在岛状鳞状上皮但出现时间不一致。【结论】人喉黏膜上皮细胞的分化发生于胎儿9-13周期间；纤毛上皮的基底细胞和中间细胞具有双向分化的潜能；过渡上皮和纤毛上皮中出现岛状鳞状上皮是生理现象，前者由复层立方上皮分化而来，后者由纤毛上皮分化而来。     

角蛋白18的功能及在肿瘤诊疗中的研究应用

角蛋白18（K18）是细胞中间丝蛋白之一,是构成细胞骨架的结构蛋白。K18是Ⅰ型角蛋白,主要表达于单层上皮组织,如胃肠道、乳腺、肺等,可保持细胞和组织结构的完整性,调节细胞分裂、迁移、分化和凋亡。近年来研究表明,K18可见于多种肿瘤如胃癌、肝细胞癌、食管癌、前列腺癌、乳腺癌等,K18在肿瘤的诊断、鉴别,肿瘤分期的判断,肿瘤转移风险的预测,肿瘤治疗效果的评价,患者预后的评估中有一定的临床价值。本文归纳总结了K18在人体细胞中的功能及其在肿瘤诊断、分期、转移、预后判断和疗效评估的意义,为进一步增加K18在肿瘤诊疗的临床应用提供思路。     

Survivin在不同分化状态的食管鳞癌组织及体外食管鳞癌细胞中的表达

目的:探讨survivin蛋白在不同分化状态下的食管鳞癌组织及体外细胞中的表达,同时观察其一致性。方法:应用免疫组化方法(SP法)检测了40例食管鳞癌组织、20例癌旁正常组织中survivin蛋白的表达情况;应用细胞的免疫化学方法分别检测食管正常上皮细胞,高分化食管鳞状上皮细胞(KYSE-70),低分化鳞状细胞上皮细胞(KYSE-450)中survivin的表达情况。结果:食管癌患者survivin蛋白的阳性表达水平分别为72.5%(29/40),明显区别于对照组(食管癌旁组织和正常组织)5.0%(P<0.01)。3系细胞中sur-vivin蛋白的阳性表达率分别为86%,69%和1%。结论:survivin蛋白的表达与食管鳞癌组织的分化程度有关,其在食管鳞癌组织与体外食管鳞癌细胞中的表达一致。     

MC1R在食管鳞癌细胞和组织中高表达

目的 通过分析MC1R在食管鳞癌细胞和组织中的表达水平及其与相关临床病理参数的相关性,探讨MC1R在食管鳞癌中的临床意义。方法 通过生物信息学分析MC1R在食管癌中的表达情况;以RT-PCR和Western blotting方法比较分析人食管上皮细胞BAr-T、人食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE150、KYSE510、TE-1、TE-13、EC9706、人胃癌细胞SGC7901及19对食管鳞癌组织和对应癌旁组织中 MC1R的表达水平;以IHC方法比较分析32对食管鳞癌组织切片和对应癌旁组织切片中MC1R的表达水平;使用t检验进行组间MC1R表达量的差异比较,使用Fisher 's精确检验分析MC1R表达水平与临床病理特征之间的关系。结果 生物信息学分析显示MC1R在食管癌组织中显著高表达（P<0.05）;食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE510、TE-13、EC9706和胃癌细胞系SGC7901中MC1R表达量高于食管上皮细胞（P<0.05）;食管鳞癌组织切片中MC1R相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。MC1R高表达现象主要存在于老年、胸中段和中分化食管鳞癌患者中,其与肿瘤T分期有关（P<0.05）,与年龄、细胞分化程度、肿瘤原发部位、TNM分期等临床病理参数无关（P>0.05）。结论 MC1R在食管鳞癌细胞系和组织中表达量显著升高,可能作为食管鳞癌诊断的辅助分子标志物。     

CLDN1在食管鳞癌中的表达及其分布异常在食管癌发生中的作用

目的 检测紧密连接蛋白CLDN1在食管鳞癌组织中的表达,研究CLDN1对食管鳞癌TE-11细胞生物学功能的影响。方法 应用免疫组化检测食管鳞癌组织芯片（含30例食管鳞癌组织、30例癌旁组织及30例食管远端组织）中CLDN1的表达,比较食管癌组织及癌旁组织中CLDN1的表达差异;应用Western blot检测15例食管鳞癌患者术后组织和食管癌细胞株CLDN1的表达,分析CLDN1在肿瘤细胞及正常食管上皮细胞内的分布;构建包含CLDN1 shRNA序列的慢病毒并转染TE-11细胞,采用Western blot和流式细胞术检测CLDN1干扰效果及细胞内分布。通过CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭迁移能力;采用Rhodamine phalloidin染色TE-11细胞骨架并在激光共聚焦显微镜下观察细胞肌丝变化。结果 免疫组化结果显示CLDN1在癌组织及癌旁组织中阳性表达率无明显差异( P>0.05),但在高分化和中分化的食管鳞癌组织CLDN1呈强阳性表达,低分化食管鳞癌组织CLDN1表达明显降低;Western blot检测CLDN1在TE-11细胞中主要分布在细胞核内;干扰CLDN1表达后,TE-11细胞增殖明显减慢,侵袭及迁移能力降低。激光共聚焦显微镜显示下调CLDN1表达后,TE-11细胞骨架蛋白荧光强度减弱,细胞表面肌丝减少。结论 CLDN1在食管鳞癌组织中的表达与其分化程度相关,在TE-11中具有促癌作用,其表达及分布异常与肿瘤的发生发展密切相关,有望作为食管鳞癌的重要生物标志物。     

DEC1参与顺铂诱导食管鳞癌的细胞衰老

目的 探究化学治疗药物顺铂对食管鳞癌细胞衰老的影响及其机制。方法 检测4种食管鳞癌细胞株(ECA109、EC9706、TE-1、TE-3)和一株正常的人类永生化食管上皮细胞株(Het-1a)中细胞衰老因子p53、分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyteexpressed gene1, DEC1)的mRNA和蛋白的表达情况;选取TE-3为研究对象,采用MTT方法检测不同浓度的顺铂(2、4、6、8、10 μmol/L)对TE-3增生的情况,并结合衰老相关的β半乳糖苷酶染色方法,筛选出诱导细胞衰老的最适浓度。以顺铂最适浓度(4 μmol/L)作用TE-3 48 h,采用Western blotting方法检测顺铂作用前后p53、DEC1蛋白水平的表达情况。结果 检测食管鳞癌细胞系中细胞衰老因子p53、DEC1的mRNA和蛋白的表达,发现食管鳞癌细胞与食管上皮细胞相比,p53的表达均有不同程度下降,DEC1的表达均有不同程度升高。用不同浓度的顺铂(2、4、6、8、10 μmol/L)作用TE3,MTT显示顺铂对细胞TE-3的增生抑制作用呈剂量和时间依赖性;结合衰老相关的β半乳糖苷酶染色,发现顺铂可诱导TE-3出现细胞衰老,并在顺铂4 μmol/L作用48 h时细胞衰老现象最明显;在顺铂4 μmol/L作用TE-3细胞48 h检测对照组与实验组的p53、DEC1的蛋白表达情况,发现实验组中TE-3的p53、DEC1的表达量分别升高了4.6倍(P=0.040)、2倍(P=0.032)。结论 顺铂可诱导食管鳞癌细胞呈现细胞衰老表型,细胞衰老相关基因p53和DEC1可能参与这一过程。     

Hes1和 Notch1在食管癌组织中的表达及其意义

目的：探讨食管癌组织中Hes1和Notch1表达及其意义。方法采用免疫组织化学PV二部法检测50例食管癌肿瘤组织及20例癌旁正常食管组织中Hes1和Notch1的表达情况。结果食管癌组织中Hes1和Notch1的阳性表达率均显著低于癌旁正常组织（ P＜0．05）。 Hes1的表达与食管癌的淋巴结转移、临床分期、分化程度、侵袭程度密切相关（P＜0．05）。 Notch1的表达与食管癌的分化程度、侵袭转移密切相关。食管癌组织中Hes1和Notch1两者的表达呈正相关（ P＜0．05）。结论 Hes1和Notch1的异常表达与食管癌的发生、发展及侵袭转移密切相关,检测两种蛋白对于食管癌的早期诊断及预后判断有重要的意义。     

miR-522促进食管癌增殖和转移的作用机制研究

目的 研究微小RNA-522(miR-522)对食管癌细胞增殖和转移能力的影响及作用机制.方法 选择2014年1月—2015年6月辽宁省健康产业集团阜新矿总医院心胸外科行食管癌根治性手术患者60例,qRT-PCR检测miR-522在食管癌组织和癌旁组织中的表达;培养食管癌细胞,qRT-PCR检测食管癌细胞系TE-1、T...     

PAR4在食管癌细胞中的表达及其机制

目的 探讨PAR4在食管癌细胞中的表达及其机制.方法 (1)分别用PCR和蛋白印迹法检测四株细胞中PAR4 mRNA和蛋白的表达;(2)BSP法检测4株细胞中PAR4基因CpG岛的甲基化状态.结果 (1)在TE-10、TE-11、Eca-109 3株食管癌细胞中PAR4的表达明显低于正常食管上皮细胞HEEpiC;2.PAR4基因的19个CpG位点在HEEpiC、TE-10、TE-11、Eca-109细胞中的甲基化频率分别为35.4%、83.8%、87.6%、94.3%.结论 PAR4在食管癌细胞中表达降低,其表达降低可能与PAR4基因启动子区高甲基化有关.     

上皮-间质转化在食管癌侵袭转移中的研究进展

上皮-间质转化(EMT)是上皮细胞形态和基因的改变,从具有紧密连接的上皮表型细胞转化为具有迁移和侵袭能力的间充质表型细胞。EMT不仅参与胚胎发育和正常生理,还参与许多病理过程,是肿瘤浸润转移中的重要事件,在食管癌的浸润和转移中发挥了重要作用,与患者的预后密切相关。该文概要回顾了EMT与食管癌浸润转移相关的研究成果,以期为本领域的研究提供一些思路。     

THAP11通过抑制p53的泛素化影响食管癌细胞的增殖和凋亡

目的：探讨死亡相关蛋白(thanatos-associated protein,THAP)11对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在 的机制。方法：采用蛋白质印迹法检测人食管上皮细胞Het-1A和人食管癌细胞(Eca109,TE-1和Ec 9706)中THAP11的 表达。将食管癌TE-1细胞分为空白对照(NC)组、阴性对照(LV-LC)组、TRA P11(LV-TRA P11)组,按分组处理细胞后, 采用MTT 法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,caspases试剂盒检测caspase-3和caspase-9的活性。采用体外泛素 化实验检测TE-1细胞的p53泛素化水平。结果：与Het-1A细胞相比,食管癌细胞中THAP11的表达显著下降(P<0.05)。 LV-THAP11转染食管癌细胞后,细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),caspase-3和caspase-9活性升高(P<0.05)。 THAP11能够提高食管癌细胞中p53蛋白的表达(P<0.05)。与LV-LC组相比,转染THAP11后食管癌细胞中p53的表达上调 (P<0.05),MDM2调节的p53的泛素化也被抑制。结论：THAP11通过抑制p53的泛素化抑制食管癌细胞的增殖,促进食管 癌细胞的凋亡。