杀菌—通透性增加蛋白对烫伤大鼠脂多糖结合蛋白和CD14mRNA表？…

目的 观察烫伤后重组杀菌－通透性增加蛋白对内毒素增敏系统－脂多糖结合蛋白／脂多糖受体ＣＤ１４（ＬＢＰ／ＣＤ１４０及肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ表达的影响及意义。方法 采用大鼠３５％Ⅲ°烫伤模型,动物分为正常对照组,烫伤组和ｒＢＰＩ２１治疗组。烫伤组和ｒＢＰＩ２１治疗组动物分别于伤后１２和２４小时活杀。     

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS 100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。     

不同浓度脂多糖对J774A.1细胞CD14表达的影响

目的：探讨不同时间和不同浓度脂多糖（LPS）对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞CD14表达的影响。方法：用不同浓度LPS刺激J774A.1细胞后,FITC-CD14单克隆抗体染色45 min,用流式细胞术检测J774A.1细胞CD14的表达,观察用LPS刺激不同时间（1、2、4、8及16 h）后J774A.1细胞CD14表达的变化;选择最佳时间后,观察不同浓度(1、10、50 、100、500及1 000 μg·L^-1）LPS对J774A.1细胞CD14表达的变化。结果：在时间-效应关系上, 当LPS浓度为1 μg·L^-1时,刺激1、2 及4 h后CD14表达增强（分别为23.80±5.07、23.04±2.88、28.22±1.54）,与对照组（12.50±3.71）比较差异有显著性（P<0.01）,LPS浓度为10 μg·L^-1时,刺激1和2 h后CD14表达增强（分别为40.85±6.05、26.63±6.17）,与对照组（12.50±3.71）比较差异有显著性（P<0.05,P<0.01）,而LPS浓度为50 μg·L^-1时,刺激1 h后CD14表达增强（47.40±2.85）,与对照组（12.50±3.71）比较差异有显著性（P<0.01）。在剂量-效应关系上,刺激4 h时LPS浓度为小于10 μg·L^-1时CD14表达蛋白明显高于对照组（P<0.01）。结论：用LPS刺激J774A.1细胞表达CD14时,LPS刺激时间最好是在4 h以内,刺激浓度最好不要超过50 μg·L^-1。     

烫伤大鼠脂多糖受体CD14 mRNA在肺内皮细胞中的表达

目的：研究烫伤大鼠脂多糖受体CD14基因在肺中的表达及其定位，探讨急性肺损伤的发病机制。方法：采用5D大鼠30％—35％三度烫伤模型，分别于8、24、48、72h活杀，留取肺组织标本检测CD14 mRNA的表达；留取血标本检测内毒素、IL-4的含量。结果：烫伤后大鼠肺内皮细胞cD14 mRNA表达上调，分别于烫伤后24、48h出现高峰，烫伤后血内毒素和IL-4含量均明显增高。相关分析显示，内毒素刺激机体后引起IL-4的显著升高。结论：大鼠烫伤后，存在内源性内毒素血症，肺内皮细胞cD14 mRNA表达上调，与烫伤后急性肺损伤的发生密切相关，内毒素刺激可引起机体抑制性炎症因子IL-4的显著增加。     

β淀粉样蛋白诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达

目的：研究不同浓度的p淀粉样蛋白（Aβ1-42）诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αLmRNA表达的变化。方法：小胶质细胞株复苏培养后分为2组：Aβ1-42组和抗CD14加Aβ1-42组。抗CD14加Aβ1-42组使用抗CD14抗体拮抗CD14的表达，再分别用不同浓度的Aβ1-42（0、62．5nmol／L、125nmol／L、250nmol／L）进行干预，2组均在Aβ1-42干预2h后用RT—PCR法检测CD14及TNF—αmRNA表达的量。结果：不同浓度的Aβ1-42干预小胶质细胞2h后，62．5nmol／L与0nmol／L Aβ1-42组CD14mRNA的表达相比较，差异无统计学意义。当Aβ1-42浓度为125nmol／L和250nmol／L时，CD14mRNA的表达逐渐增加（P〈0．05）。使用CD14抗体后，抗CD14加Aβ1-42组中CD14mRNA的表达与Aβ1-42组比降低（P〈0．05）。Aβ1-42组TNF-αmRNA的表达随Aβ1-42的浓度增加而增加（P〈0．05），与Aβ1-42组相比，抗CD14加Aβ1-42组中TNF-αmRNA的表达在Aβ1-42浓度为125nmol／L开始明显受到抑制（P〈0．05）。结论：Aβ1-42诱导的小胶质细胞可通过脂多糖受体CD14使TNF-αmRNA的表达增加，且与Aβ1-42的作用浓度呈正相关。     

脂多糖对THP-1细胞CD14诱导表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对THP-1细胞CD14诱导表达的影响。方法应用不同质量浓度(0.1~50 mg/L)的LPS刺激培养48 h的THP-1细胞,并测定其CD14mRNA、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL-6)表达的变化。结果正常培养条件下,THP-1细胞CD14表达量极低,而LPS对单核巨噬细胞THP-1具有显著的诱导激活作用,在较低质量浓度剂量刺激下即可被活化,表现为CD14mRNA表达量迅速增加,同时,LPS可诱导THP-1细胞产生TNF-α和IL-6,并在一定范围内呈剂量依赖关系。结论LPS可导致THP-1细胞活化,显著上调CD14mRNA的表达,并诱导产生炎症介质TNF-α和IL-6。     

内毒素血症小鼠巨噬细胞膜脂改变对CD14表达及TNFα分泌的影响

目的 以小鼠内毒素血症为模型,研究小鼠腹腔巨噬细胞膜脂改变,及其对受体CD14表达及血浆TNFα产生的影响。方法 48只小鼠分为3组。①对照线（n=8）;②内毒素血症组：小鼠尾静脉注射LPS,200μg/只,分1、3、5、8 4个观察时相点,每个时相点8只动物;③脂质体预处理组（n=8）：小鼠腹腔注射卵磷脂脂质体1ml(1mg/ml),18h后尾静脉注射LPS,200μg/只,5h后观察巨噬细胞膜脂成分、膜流动性及CD14阳性率、血浆中TNFα含量的变化。结果 LPS刺激下,巨噬细胞主要膜脂成分降解,细胞膜荧光偏振度、微粘度和分子排列有序系数增加,膜流动性显著降低;CD14阳性率增加,5h达高峰,8h降至正常水平;TNFα含量显著升高,3h达高峰,8h降至正常水平。磷脂脂质体预处理后,膜损伤减轻,CD14阳性率及TNFα含量均明显降低。结论 内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞膜磷脂降解,细胞膜从相对比较流动变为相对固化,这可能是膜受体CD14阳性率增加,TNFα产生增多的重要原因。脂质体预处理能修复膜损伤,减少膜CD14表达,减轻炎症反应。     

脂多糖结合蛋白和可溶性CD14对小鼠体内脂多糖结合作用的研究

目的 研究血清中脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP),可溶性CD14(soluble CD14,sCD14)对小鼠体内脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)结合作用的影响.方法 ICR小鼠分组,共5组,分别注射蛋白终浓度均为100ng/ml的LPS与LBP、LPS与sCD14的混合液作为实验组,以及分别单独注射LPS、LBP、sCD14液作为对照组,30min后检测小鼠血清LPS浓度.结果 第2组LBP组和第4组sCD14组的LPS检测浓度明显低于第1组、第3组和第5组的结果(P＜0.01),第3组LPS与LBP混合组的LPS浓度明显高于第1组LPS组结果(P＜0.01).第5组LPS和sCD14混合组的LPS浓度高于第1组LPS组结果(P＜0.05),第3组LPS和LBP混合组的LPS浓度明显高于第5组LPS和sCD14混合组(P＜0.01).结论 100ng/ml外源性LBP比sCD14能更好地结合小鼠体内LPS,减轻了LPS对机体的损害.     

内毒素血症中脂多糖相关蛋白的混合调节机制

目的：研究内毒素血症发生时多种脂多糖（LPS）相关蛋白在LPS转运及活化中的调节作用。方法：培养佛波醇酯（PMA）诱导分化的THP-1细胞。选取LPS、脂多糖结合蛋白（LBP）、可溶性CD14（sCD14）、杀菌/渗透增强蛋白（BPI）、高密度脂蛋白（HDL）5因素2水平采用L16（215）正交设计。配制实验体系,培养4 h后,留取上清液,发光法检测TNF-α分泌量。结果：混合体系中,BPI和HDL存在负向效应,LBP、LPS和sCD14存在正向调节效应。TNF-α分泌量与sCD14、BPI的单独主效应有关（P〈0.05）,并与LBP和sCD14、LBP和HDL、LPS和LBP的交互作用有关（P〈0.05）。结论：在体内多种相关蛋白同时存在时,LPS对单核巨噬细胞的活化与sCD14、BPI的单独效应有关,并与LBP和sCD14、LBP和HDL、LPS和LBP交互作用有关。     

术后感染患者血清可溶性CD14和E-选择素的变化意义

目的　探讨术后并发严重感染患者血清 E-选择素(E- SL T)和 s CD14的变化情况及其与病情预后的关系 .方法　采用 EL ISA于术前和术后测定 37例手术和 30例健康志愿者血清 E- SL T、s CD14及 TNF- α的浓度 .结果　 E- SL T水平在未并发感染组于术后 1d开始增高 ,术后 3d达高峰 (15 1± 12 )μg· L- 1 ,4d后开始下降 ,至 2 5 d接近正常水平 (4 0±10 ) μg· L- 1 ;在并发严重感染组 E- SL T水平于术后 1d开始增高 (6 8± 9)μg· L- 1 ,至术后 2 5 d时仍处于高水平状态 (32 8± 5 4) μg· L- 1 .s CD14水平在未并发感染组于术后 1d开始增高 ,4d后开始下降 ,至 2 5 d接近正常水平 (1.0 3± 0 .16 )mg· L- 1 ;在并发严重感染组 s CD14水平于术后 1d开始增高 ,至术后 2 5 d仍处于高水平状态 (2 .6 3± 0 .82 ) mg· L- 1 .s CD14与 TNF- α者间的相关系数为 r=0 .896 ,P<0 .0 5 .结论　 s CD14和 TNF-α在术后并发严重感染的早期病理过程中起着重要的作用 ,s CD14与早期感染密切相关 ;E-选择素可能在感染病理变化过程的后期起着重要的作用 ,与感染严重程度相关 . E- SL T和 s CD14是反映术后并发感染病情变化和预后的可靠指标     

酒精性肝病大鼠Kupffer细胞CD14蛋白的表达及其在肝损害中的作用

目的:观察大鼠酒精性肝病时细胞()蛋白和基因的表达及其在肝损害中的作用。KupfferKCsCD14方法:随机将大鼠分为乙醇喂养组(剂量～)和葡萄糖对照组。周和周活杀分离,用流式细胞仪()测定细Wistar 512g/kg/24h48KCsFCM胞膜上蛋白的表达,同时用逆转录多聚酶联反应()测定中的表达;用酶联免疫法()CD14RT-PCRKCsCD14 mRNAELISA测定血浆中TNF-α和-浓度变化;测定血浆内毒素及血浆中转氨酶()水平变化,并观察肝脏形态学改变。IL6ALT结果: 乙醇组大鼠周时膜上已明显表达蛋白和　,周时其表达进一步增强,显著高于对照组4KCsCD14CD14mRNA8(P。乙醇<0.05)组周和周时血浆48TNF-α浓度、-浓度及内毒素浓度均明显高于对照组IL6 (P。乙醇组肝组织发生显著的病理变化,对<0.05)照组肝组织无明显病理变化。结论:乙醇能诱导大鼠肝脏膜蛋白和的表达显著增强,血浆中细胞因子KCsCD14CD14 mRNA-TNFα和-浓度增加,引起肝脏形态改变和功能损害。IL6     

急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14mRNA的表达

目的 探讨内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA表达的变化.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为2组:对照组、LPS模型组,每组再分为4 h和8 h两个亚组.尾静脉注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型.检测大鼠动脉血气、肺体指数,实时荧光定量PCR测定肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA的表达,并观察肺组织病理变化.结果 与对照组相比,模型组4 h和8 h时大鼠肺组织中的TLR4及CD14 mRNA表达均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现出血及坏死.结论 内毒素致急性肺损伤的发病机制可能与TLR4及CD14 mRNA的表达升高有关.     

脂多糖结合蛋白与CD14结合位点模拟肽的初步筛选

目的 应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14结合位点的多肽序列.方法 以CD14为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附(ELISA)法鉴定筛选后的噬菌体克隆与CD14的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合CD14的效力.结果 挑取的20个噬菌体克隆中,16个结合实验鉴定阳性,取6个亲和力最高的克隆测序,得到3条不同编码的12肽序列(FHRWPTWPLPSP、MHRHPPPITLPL和AAFHRAHHLTSP),3条多肽与LBP一级结构同源性低,为模拟肽.6个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率.结论 用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与CD14结合位点的模拟肽.     

三条脂多糖结合蛋白/CD14结合位点模拟肽体外抗内毒素活性的比较研究

目的 比较三条LBP/CD14结合位点模拟肽体外抑制内毒素性炎症反应的生物学活性.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测模拟肽与CD1l4的亲和力及与脂多糖结合蛋白(LBP)的竞争性抑制活性.将佛波脂(PMA)诱导成熟的U937细胞与内毒索共培养,并予以模拟肽干预,采用RT-PCR检测模拟肽对U937细胞TNF-α基因表达的影响.将大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)与荧光标记内毒素(FITC-LPS)共培养,并予以模拟肽干预,采用荧光显微镜观测模拟肽对内毒素(LPS)与AMs结合的影响.结果 1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP,10 μg/mL)与CD14的亲和力显著高于2号和3号模拟肽(20.3±4.1比11.8±2.4和13.7±3.3,P＜0.01或P＜0.05),1号模拟肽(10 μg/mL)对LBP的竞争性抑制活性也显著高于2号和3号模拟肽[(57.2±11.2)%比(39.4±9.7)%和(37.9±8.3)%,P均＜0.01].三条模拟肽(10μg/mL)均可从基因水平显著抑制LPS诱导U937细胞产生TNF-α(P＜0.01或P＜0.05),1号模拟肽的抑制作用显著强于2号和3号模拟肽(0.239±0.053比0.406±0.112和0.493±0.121,P＜0.01).1号模拟肽能显著抑制LPS与AMs结合(2 157±514比2 763±453,P＜0.01).结论 1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP)有较高的CD14亲和力及LBP竞争性抑制活性,具有潜在的抗内毒素性炎症反应的作用.     

烧伤后CD11b/CD18介导的中性多形核白细胞粘附对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响

目的观察烧伤后中性多形核白细胞（ＰＭＮ）对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，以及ＰＭＮ粘附及其粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８在该影响中的介导作用。方法用培养血管内皮细胞单层模型，建立培养肺微血管内皮细胞（ＰＭＥＣ）单层通透性测定的方法，根据处理内皮细胞单层的不同成份，将实验分为７组，用含荧光素异硫氰酸酯白蛋白的灌流液灌流后，测定液体滤过系数（ｋｆ）和渗透压反射系数（δ）。结果烧伤后ＰＭＮ能使反映小分子物质通透性的ｋｆ值明显增加，使渗透压反射系数（δ）显著下降。用单抗封闭ＰＭＮ膜上ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８能使δ值的变化得到纠正；用孔径０２μｍ的滤膜阻断ＰＭＮ与内皮细胞单层的粘附则使ｋｆ值和δ值均接近正常水平。结论白细胞与内皮细胞的粘附是介质类物质发生作用的前提条件，这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８本身可能具有着生物学信号调控的作用，并介导着对肺血管内皮细胞大分子物质通透性的影响     

烧伤后CD11b／CD18介导的中性多形核白细胞粘附对肺微血管内皮？…

目的 观察烧伤后中性多形核白细胞（ＰＭＮ）对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响,以及ＰＭＮ粘附及其粘附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８在该影响中的介导作用。方法 用培养血管内皮细胞单层模型,建立培养肺微血管内皮细胞（ＰＭＥＣ）单层通透性测定的方法,根据处理内皮细胞单层的不同成份,将实验分为７组,用含荧光素异硫氰酸酯－白蛋白的灌流液灌流后,测定液体滤过系数（ｋｆ）和渗透压反射系数（δ）。结果 烧伤后ＰＭＮ能使     

脂多糖结合蛋白多抗对大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性及Toll样受体4表达的影响

目的观察脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)多抗对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,φAM)内毒素(lipopolysaccharide,LPS)耐受性与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响,研究二者之间的联系.方法将从32只Wistar雄性大鼠分离所得φPAM,按随机数字法等分为正常对照组(A)、LPS单次刺激组(B)、LPS二次重复刺激组(C)和LPS二次重复刺激 LBP多抗组.运用ELISA和RT-PCR方法分别检测各组大鼠φAM分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及TLR4 mRNA表达的变化,Western blot检测TLR4蛋白表达的变化.结果大鼠φAMTNF-α分泌和TLR4 mRNA表达及TLR4的蛋白表达水平,A组分别为:(0.45±0.01),(0.77±0.06),(51.03±1.19)μg/L,B组分别为:(0.76±0.03),(1.55±0.25),(122.72±1.75)μg/L,B组与A组比较显著增加,P＜0.01;C组分别为:(0.49±0.05),(1.13±0.07),(85.35±0.68)μg/L,C组与B组比较,明显减少,P＜0.05.D组分别为:(0.28±0.07),(0.78±0.17),(61.06±1.36)μg/L,D组与C、B组比较,明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论LPS重复刺激可使大鼠φAM对LPS产生耐受性;LPS耐受性的产生与TLR4表达下降相关;LBP多抗通过降低TLR4表达,提高大鼠φAM对LPS耐受性,此乃LBP抗体可用于治疗LPS所致急性肺损伤的部分分子生物学理论基础.     

急性胆道感染时肝组织脂多糖受体CD14的表达机制

目的 探讨急性胆道感染时大鼠肝组织巾脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)受体CDl4的表达及其对细胞因子分泌的影响.方法 通过结扎Wiser大鼠月日总管,在胆总管内注人大肠杆菌0111:B4,复制急性胆道感染动物模型.于术后0、3、6、12、24 h分别检测肝组织中CDl4蛋白和mRNA表达水平,血浆内毒素、TNF-Ot和IL-6的含量、枯否细胞(kupffer cells,KCs)吞噬活性,电镜观察KCs超微结构的变化.结果 在急性胆道感染时随着感染时间延长,血浆内毒素浓度逐渐升高,KCs呈现激活的改变,血浆TNF-a、IL-6含量明显增加,而此时肝组织中CD14的表达也显著增加.结论 急性胆道感染时肝组织中CD14的表达进行性增强,KCs激活,释放的细胞因子也逐渐增多,这可能是急性胆道感染时KCs敛炎作用增强的重要机制之一.