Q3衰老小鼠模型的DNA损伤研究

目的 探讨自由基致衰老的小鼠模型DNA氧化损伤的情况。方法 通过给2月龄小鼠吸入一定量的O3,建立O3衰老小鼠模型;然后以单细胞凝胶电泳检测O3衰老小鼠模型、自然衰老小鼠和正常青年小鼠（阴性对照 组）的脾淋巴细胞DNA氧化损伤情况。结果 与阴性对照组相比,O3衰老小鼠模型的脾淋巴细胞DNA受到较显著的氧化损伤（P＜0．05）;其损伤程度与自然衰老小鼠相近（P＞0．05）。结论 O3衰老动物模型与自然衰老近似,在衰老的研究和抗衰老药物的药理实验中具有一定应用价值。     

六味地黄生物制剂对衰老小鼠脾淋巴细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨六味地黄生物制剂延缓衰老的机制。方法小鼠随机分为正常对照组、阳性药物(维生素E)组、衰老模型组与六味地黄生物制剂组。除正常对照组注射生理盐水外,其余各组皮下注射0.5mL 5%D-半乳糖以建立衰老模型,连续50 d。第10天开始以0.2 mL.10 g-1给予各组小鼠灌胃相应的药物,50 d后处死小鼠,分离脾淋巴细胞并利用单细胞凝胶电泳法检测各组小鼠脾脏淋巴细胞的DNA损伤情况。结果与正常对照组比较,衰老模型组小鼠的脾淋巴细胞有较为严重的损伤(P<0.01),尾长、尾距与DNA拖尾率分别为(145.96±94.63)μm、(51.34±44.67)μm、(23.14±15.90)%;与衰老模型组比较,阳性药物组和六味生物制剂组小鼠的DNA损伤均显著降低(P<0.01)。结论六味地黄生物制剂对D-半乳糖所致的衰老小鼠的脾淋巴细胞有明显的保护作用,这可能是六味地黄生物制剂延缓衰老的机制之一。     

脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响

目的观察脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响。方法小鼠随机分为6组,每组10只。分别为正常组、模型组、维生素E组、脾肾双补方治疗高剂量组、脾肾双补方中剂量组,脾肾双补方低剂量组,采用单细胞凝胶电泳法检测胸腺细胞DNA氧化损伤修复的情况。结果实验表明：正常组胸腺细胞虽有很短尾长,但并未表现为彗星样拖尾,提示正常组胸腺细胞DNA氧化损伤较少。中、高剂量组和西药对照组的胸腺细胞尾长与模型组比较均有显著性差异,且中药高剂量组作用强于维生素E组。结论脾肾双补法可以减少衰老模型小鼠胸腺细胞彗星拖尾长度,对DNA氧化损伤具有一定的拮抗或修复作用,并存在一定的量效关系,说明脾肾双补法延缓模型小鼠衰老的作用可能与其对DNA氧化损伤的拮抗或修复作用有关。     

脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响

目的观察脾肾双补法对衰老小鼠胸腺细胞DNA氧化损伤修复的影响。方法小鼠随机分为6组,每组10只。分别为正常组、模型组、维生素E组、脾肾双补方治疗高剂量组、脾肾双补方中剂量组,脾肾双补方低剂量组,采用单细胞凝胶电泳法检测胸腺细胞DNA氧化损伤修复的情况。结果实验表明:正常组胸腺细胞虽有很短尾长,但并未表现为彗星样拖尾,提示正常组胸腺细胞DNA氧化损伤较少。中、高剂量组和西药对照组的胸腺细胞尾长与模型组比较均有显著性差异,且中药高剂量组作用强于维生素E组。结论脾肾双补法可以减少衰老模型小鼠胸腺细胞彗星拖尾长度,对DNA氧化损伤具有一定的拮抗或修复作用,并存在一定的量效关系,说明脾肾双补法延缓模型小鼠衰老的作用可能与其对DNA氧化损伤的拮抗或修复作用有关。     

番茄红素对小鼠脂类及细胞DNA氧化损伤的影响

目的 建立小鼠前胃癌模型,探讨番茄红素对小鼠前胃癌的抑制机制及对脂类和淋巴细胞DNA的抗氧化损伤作用.方法 昆明小鼠随机分成5组,实验3组饲喂高、中、低不同剂量的番茄红素饲料.阳性与正常对照组饲喂正常饲料,实验组与阳性组灌喂含人类致癌物苯并(a)芘B(a)P的色拉油(浓度为5 mg/mL),正常对照组给予相同剂量的色拉油,每周两次,共8次,建立前胃癌模型,24周后处死动物,观察肿瘤生长及脂类和淋巴细胞DNA的氧化损伤情况.结果 番茄红素具有明显的抗肿瘤作用,给予番茄红素后能降低前胃癌的发生率,可提高小鼠血清超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性,降低丙二醛MDA含量和减少淋巴细胞DNA的氧化损伤(P<0.05).结论 番茄红素具有明显抑制肿瘤生长的作用,其作用机制可能与增强机体抗氧化酶功能,降低脂类氧化产物MDA,减少淋巴细胞DNA损伤有关.     

HMGB1调控重症急性胰腺炎脾淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠脾淋巴细胞中的表达及其对SAP小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。方法 成年雄性SPF级BALB/C小鼠30只,随机分为对照组、SAP组、SAP+Ab组,每组10只。实验前BALB/C小鼠禁食12h,自由饮水。SAP组采用腹腔注射雨蛙素和脂多糖诱导,SAP+Ab组于SAP造模成功后立即腹腔注射抗-HMGB1抗体。各组造模后12h取材,胰腺组织HE染色并对胰腺损伤进行评分,ELISA检测小鼠血清HMGB1和Caspase-3表达水平,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞凋亡率,RT-PCR检测脾淋巴细胞HMGB1、Caspase-3mRNA的表达情况。结果 与对照组比较,SAP组和SAP+Ab组胰腺损伤评分增加,血清中HMGB1和Caspase-3含量升高(P <0.05),脾淋巴细胞凋亡率增高(P <0.05),脾淋巴细胞HMGB1mRNA和Caspase-3mRNA表达升高(P <0.05)。与SAP组比较,SAP+Ab组胰腺的损伤评分降低,血清中HMGB1和Caspase-3含量降低(P <0.05),脾淋巴细胞凋亡率降低(P <0.05),脾淋巴细胞HMGB1mRNA、Caspase-3mRNA表达降低(P <0.05)。SAP组脾淋巴细胞HMGB1mRNA、血清HMGB1水平与脾淋巴细胞凋亡率、脾淋巴细胞Caspase-3mRNA、血清Caspase-3水平呈正相关(P <0.05)。结论 HMGB1与SAP脾淋巴细胞凋亡密切相关,可作为治疗SAP的一个潜在靶点。     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.     

硫酸铍对小鼠体外脾淋巴细胞DNA损伤的剂量效应

目的:观察不同剂量硫酸铍(BeSO4)在不同时相处理后引发小鼠体外脾淋巴细胞的DNA链断裂损伤的剂量效应. 方法:采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)分别测定BALB/c小鼠脾淋巴细胞体外染毒0.2, 2, 20, 100和200 μmol/L 1 h和2 h后DNA链断裂损伤情况. 结果:在不同剂量硫酸铍染毒1 h后,脾淋巴细胞出现DNA链断裂损伤的测定指标在各剂量组明显高于对照;染毒1 h 和2 h后,细胞均出现明显的DNA链断裂损伤,但其相同剂量组之间差异无显著性. 结论:硫酸铍可诱发小鼠体外脾淋巴细胞的DNA链断裂损伤.     

锰对小鼠淋巴细胞DNA损伤的研究

目的:研究不同剂量染锰小鼠淋巴细胞 DNA损伤的情况。 方法:随机分为正常对照组和 3个剂量组(低、中、高剂量组 ) ,给小鼠腹腔注射氯化锰 ,6周后采用单细胞凝胶电泳实验检测染锰小鼠外周血淋巴细胞 DNA链断裂情况 ,并进行对比分析。 结果:低、中、高剂量组小鼠淋巴细胞 DNA损伤率明显高于正常对照组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论:氯化锰可引起小鼠淋巴细胞 DNA的损伤     

益生菌DNA对变应性鼻炎疗效的动物实验研究

目的益生菌DNA对卵清蛋白（OVA）诱发的变应性鼻炎疗效的动物模型研究。方法培养益生菌,提取DNA,取6-8周Balb/c小鼠OVA造模成功后随机分为益生菌DNA滴鼻组及生理盐水对照组,每组15只。用已提取的益生菌DNA液滴鼻治疗,对照组采用生理盐水代替。采用ELISA法检测各组血清IgE及IL-4,IL-10,IFN-γ,IFN-γ/IL-4。结果益生菌DNA滴鼻组IgE显著高于对照组（P〈0.05）,益生菌DNA滴鼻组IL-10,IFN-γ,IL-4均低于对照组（P〈0.05）,而FN-γ/IL-4高于对照组（P〈0.05）。结论益生菌DNA干预治疗通过调整模型动物Th1/Th2细胞因子平衡对变应性鼻炎起一定防治作用。     

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

目的 引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂。方法 载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1h,在电泳缓冲液中解旋30min,电泳30min,胸腺细胞核用20mg／L的EB染色5min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用。结果 紫外线和不同浓度H2O20．001、0．01、0．1、1．0mmoL／L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重。结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤。     

硫酸锌对UVB致HaCaT细胞损伤的拮抗作用

目的:探讨中波紫外线(UVB)造成HaCaT细胞损伤的机制及硫酸锌能否拮抗UVB对细胞的损害作用,为开发预防UVB损伤的药物提供理论依据.方法:将HaCaT细胞随机分为对照组、UVB组、加锌(Zn)组和Zn+ UVB组.对照组不施加任何处理因素;UVB组细胞进行UVB照射;Zn组只加入终浓度为50 μmol·L-的硫酸...     

D-半乳糖衰老模型致衰特征及衰老标志物的研究

目的 论证8-羟基脱氧鸟苷作为衰老标志物的可行性,比较D-半乳糖模型鼠与自然衰老鼠在各方面的差异,进一步探究D-半乳糖衰老模型的致衰特征。方法 采用SD大鼠作为受试动物,将动物分为3组：3月龄鼠给予 D-半乳糖6周作为 D-半乳糖模型组;20月龄鼠作为自然衰老组;3月龄鼠作为正常对照组。实验前后测定各组大鼠尿液中8-羟基脱氧鸟苷含量,实验末对各组大鼠血清中丙二醛(MDA) 含量、超氧化物歧化酶(SOD) 活力、还原性谷胱甘肽(GSH)含量及生化指标测定、并对各组大鼠进行Morris水迷宫试验及病理检测。结果 8-羟基脱氧鸟苷含量试验前自然衰老组高于D-半乳糖模型组和对照组(P<0.05),D-半乳糖模型组与对照组差异无统计学意义;实验末期自然衰老组大鼠与D-半乳糖模型组8-羟基脱氧鸟苷含量均高于对照组 (P<0.01) ,前两组间差异无统计学意义 (P>0.05)。自然衰老组和 D-半乳糖模型组 MDA含量均高于对照组(P<0.05)、SOD 活性和GSH含量均低于对照组(P<0.05或P<0.01),前两组间差异无统计学意义 (P>0.05)。生化检验结果中,自然衰老组三酰甘油相对于正常对照组差异有统计学意义(P<0.01),其余生化结果差异均无统计学意义 (P>0.05)。D-半乳糖模型组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、尿素氮、肌酐及血糖相对于正常对照组差异均有统计学意义(P<0.01),其余生化结果差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠Morris水迷宫试验,自然衰老组大鼠与D-半乳糖模型组逃避潜伏期、游泳速度及穿越平台区次数与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,前两组间差异无统计学意义 (P>0.05)。组织病理学检查中,D-半乳糖模型组大鼠与自然衰老组大鼠病理形态更接近。结论 D-半乳糖造成的衰老模型在氧化损伤、神经行为及病理形态方面接近自然衰老动物组,尚存在一定肝肾损伤。8-羟基脱氧鸟苷可作为一种有效的衰老标志物,实现对衰老模型的无创检测。     

硫辛酸对细胞DNA损伤保护作用的初步研究

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究不同浓度过氧化氢(H2O2)分别作用于HepG2细胞2 h后DNA损伤的剂量效应关系,同时观察硫辛酸对H2O2损伤细胞DNA的保护作用. 方法: 将细胞分为对照组、损伤组和保护组,依次加入不同浓度的H2O2及硫辛酸,应用SCGE检测H2O2引起细胞DNA损伤. 结果: 随着H2O2浓度的增加,细胞DNA的损伤程度加重,能使尾长、尾部DNA百分含量和尾距显著增加(P《0.05). 硫辛酸能使H2O2损伤细胞的尾长、尾部DNA百分含量和尾距均较对照组减少(P《0.05). 结论: H2O2对细胞DNA损伤具有剂量效应关系,硫辛酸可以有效地减少H2O2引起的细胞DNA的断裂损伤.     

仙草提取物对小鼠脾淋巴细胞DNA氧化损伤保护作用的研究

目的:观察仙草提取物对原代培养脾淋巴细胞H2O2所致DNA氧化损伤的保护作用。方法:原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为6组,其中4组细胞用不同浓度的仙草提取物溶液预先处理60 m in,再加入50μm o l/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,6组细胞共同在4℃下染毒20 m in,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,最后用激光共聚焦显微镜拍摄图像,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度。结果:H2O2可致原代培养脾淋巴细胞DNA的严重损伤,而仙草提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100μg/m l的浓度下,彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为88%、60%和36%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(49.56±6.94)μm,逐渐降低为(41.14±5.64)μm、(38.89±9.81)μm、(28.62±4.66)μm(P分别<0.05、0.01、0.01)。结论:仙草提取物具有显著的抗氧化功能,能在一定浓度范围内保护细胞免受氧自由基对DNA的氧化损伤。     

巯基乙酸-碲化镉量子点对人肝细胞毒性和DNA损伤的诱导作用

目的：研究巯基乙酸（TGA）包覆的碲化镉(CdTe)量子点（QDs）对人正常肝HL-7702细胞的毒性和DNA损伤的作用,为QDs毒理学研究和安全性评价提供实验依据。方法：实验设立对照组和不同浓度CdTe QDs作用组（浓度分别为6.25、12.50、25.00和50.00 mg/L）。CdTe QDs作用于HL-7702细胞后,分别采用MTT法检测细胞增殖变化,单细胞凝胶电泳法（SCGE）检测细胞DNA损伤情况,PI单染流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化,AO/EB双荧光染色法和Annexin Ⅴ- FITC/PI双染FCM检测细胞凋亡情况。结果：MTT法,CdTe QDs可抑制HL-7702细胞增殖,并存在剂量-效应和时间-效应关系;SCGE和PI单染FCM法,CdTe QDs作用于HL-7702细胞24 h后,随着剂量的增加,DNA损伤率逐渐增高,G0/G1期细胞百分率显著下降,S期和G2/M期细胞百分率明显上升（P<0.05）;AO/EB检测,CdTe QDs作用后细胞出现凋亡形态学改变;Annexin Ⅴ-FITC/PI双荧光标记FCM法,CdTe QDs染毒可促进细胞凋亡,各剂量组细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：CdTe QDs可影响细胞存活,引起DNA损伤、细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡。     

半夏总生物碱对人肝癌细胞增殖的抑制作用研究

目的：探讨半夏总生物碱（ TATP）对人肝癌细胞株QJY-7703增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（ MTT）比色法及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对QJY-7703细胞株的生长抑制作用;应用单细胞凝胶电泳技术检测TATP导致QJY-7703细胞的DNA损伤情况。结果人肝癌细胞QJY-7703经TATP处理后,其体外增殖能力明显下降,且与药物的剂量、加药时间呈正相关,与对照组比较,差异均有统计学意义（24 h：对照组QJY-7703细胞增殖OD490＝0．486±0．037,TATP组2．5、10．0、30．0、50．0 mg/L时的OD490分别为0．475±0．026、0．377±0．029、0．286±0．026、0．242±0．023;48 h：对照组OD490＝0．793±0．046,TATP组2．5、10．0、30．0、50．0 mg/L时的OD490分别为0．747±0．028、0．497±0．025、0．287±0．021、0．207±0．020）（P＜0．01或P＜0．05）。单细胞凝胶电泳（SCGE）中,TATP组细胞尾DNA含量：对照组为（6．92±4．85）mg/L,TATP组10．0、40．0 mg/L时分别为（17．30±5．39）mg/L、（36．52±8．67）mg/L;尾长：对照组为（16．06±9．17）μm,TATP组10．0、40．0 mg/L时分别为（29．29±13．09）μm、（65．33±17．06）μm;尾动量：对照组为（0．97±0．34）μm,TATP组10．0、40．0 mg/L时分别为（7．87±4．04）μm、（21．43±7．67）μm,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0．01）,且呈现浓度依赖性。结论在体外培养的条件下,一定剂量的TATP能明显抑制QJY-7703细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。     

微胶囊化儿茶素拮抗H2O2诱导的大鼠GMCs DNA损伤

目的:研究微胶囊化儿茶素对过氧化氢(H2O2)诱导的肾小球系膜细胞(glumreular mesangial cells,GMCs)DNA损伤修复作用及可能机制.方法:按H2O2终浓度分为0(对照组)、50 μmol/L组、100 μmol/L组、150 μmol/L组、200 μmol/L组、250 μmol/L组,每个处理组又分6,12,24 h 3个小组,筛选过氧化氢对GMCs DNA损伤研究的最适剂量与最佳时点.然后将培养细胞分生理盐水对照组、H2O2组、不同浓度儿茶素组(按终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组)与不同浓度微胶囊化儿茶素组(按胶囊中儿茶素含量终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组),共8组进行培养.利用生物化学法检测各组大鼠GMCs培养上清中羟自由基(hydroxy radical,·OH-)、丙二醛(malonydialdehyde,MDA)与总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,tSOD)含量,利用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠GMCs DNA损伤修复.结果:(1)6 h时,100 μmoL/L过氧化氢剂量组即可引起GMCs DNA损伤,150μmoL/L组则可检测到DNA出现明显损伤;(2)微胶囊化儿茶素组GMCs慧星全长在不同剂量时与儿茶素组差异无统计学意义,微胶囊化儿茶素组GMCs慧星尾长与尾部荧光强度在不同剂量时均低于儿茶素组,差异有统计学意义(均P＜0.05,0.01);(3)10.0 mg/L时,儿茶素组与微胶囊化儿茶素两组之间相比,两组·OH-,MDA与tSOD含量差异无统计学意义;15.0 mg/L与20.0 mg/L剂量时,微胶囊化儿茶素组·OH-和MDA含量较儿茶素组降低,tSOD含量较儿茶素组增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:微胶囊化儿茶素可能是通过提高其抗氧化能力而提高其对DNA损伤保护及损伤修复能力.