人肿瘤坏死因子—α的免疫PCR检测方法

将ＰＣＲ技术的极高灵敏度与ＥＬＩＳＡ技术检测肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）抗原的特异性相结合，利用生物素标记的腺病毒六邻体基因重组质粒（ＡｄＡＴ）作为ＰＣＲ的模板ＤＮＡ，以链亲和素作连接分子，与生物标记的兔抗鼠ＩｇＧ抗体相连接，后者再与ＴＮＦ－α的单克隆抗体结合。设计一对扩增六邻体基因的引物进行ＰＣＲ，通过对ＤＮＡ扩增片段浓度的定量分析，替代ＥＬＩＳＡ方法中的酶－底物显色反应而建立ＴＮＦ－α的免疫     

人凝血因子Ⅸ基因（pKG5—Ⅸ）直接注入小鼠骨骼肌中瞬间表达的研究

我们将带凝血Ⅸ因子基因ｃＤＮＡ的ｐＫＧ５－Ⅸ裸ＤＮＡ直接注入小鼠骨骼肌内，注射后第１４天取小鼠血分离血清进行研究。结果显示：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析中能清晰地看到一与凝血因子ⅨｃＤＮＡ表达相关的特定蛋白带，进一步的实验Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ，ＥＬＩＳＡ及一期法有力地证实了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果，人ＦⅨ基因转移小鼠出现５５ｋＤ特异带与人ＦⅨ相符，即证明它确系人ＦⅨ。     

人凝血因子Ⅸ基因（pKG_5－Ⅸ）直接注入小鼠骨骼肌中瞬间表达的研究

我们将带凝血Ⅸ因子基因ｃＤＮＡ的ｐＫＧ_５－Ⅸ裸ＤＮＡ直接注入小鼠骨骼肌内，注射后第１４天取小鼠血分离血清进行研究。结果显示：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析中能清晰地看到一与凝血因子ⅨｃＤＮＡ表达相关的特定蛋白带，进一步的实验ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ及一期法有力地证实了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果，人ＦⅨ基因转移小鼠出现５５ｋＤ特异带与人ＦⅨ相符，即证明它确系人ＦⅨ。     

肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明，我们构建的重组逆转录病毒可介导ＴＮＦ－α基因在人脑胶质瘤ＴＩＬ中的表达     

α肿瘤坏死因子（TNFα）基因的分离鉴定及在人肝癌细胞中的表达

应用不连续密度梯度法分离获得人肝癌浸润性单个核细胞（ＴＩＭ），ＲＮＡ斑点杂交提示ＴＩＭ中有明显的ＴＮＦαｍＲＮＡ转录。经ＲＴ－ＰＣＲ扩增反应分离得到一特异的７００ｂｐ左右的ＤＮＡ片段，ＤＮＡ序列分析证实这一ＤＮＡ片段中包含编码人ＴＮＦα成熟肽所需的的全部ｃＤＮＡ序列。将这一人ＴＮＦαｃＤＮＡ克隆到真核细胞表达质粒ｐＳＶＫ３，获得真核细胞表达重组ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ，用磷酸钙沉淀法将ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ导入人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１中的细胞培养上清中可检测到ＴＮＦα的一过性表达。结果提示ＴＩＭ可成为获取ＴＮＦα基因的来源，获得的ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ重组质粒为肝癌的基因治疗奠定了基础。     

桂枝浸出物对小鼠巨噬细胞内α—TNF基因表达的影响

目的：检测小鼠应用桂枝浸出物后腹腔巨噬细胞内ＴＮＦα－ｍＲＮＡ含量的变化。方法：雌雄小鼠随机分组，口服给药后制备巨噬细胞涂片。克隆人ＴＮＦ－ＤＮＡ的ＰＧＥＭ－１质料转化Ｅｃｏｌｉ ＪＭ１０３，选择培养扩增。随机引物法制备地高辛标记的探针，利用原位杂交技术检测巨噬细胞内ＴＮＦα－ｍＲＮＡ的表达。结果：抗肿瘤中草药桂枝等浸出物可增强小鼠腹腔巨噬细胞内ＴＮＦα－ｍＲＮＡ表达。结论：分子生物学的方法与手段     

免疫介异的再生障碍性贫血小鼠脾细胞中肿瘤坏死因子基因表述的研究

以前的研究征明多数再障患者血清ＴＮＦ升高。本文用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测免疫介导的再障小鼠脾细胞α－ＴＮＦｍＲＮＡ的表达和用ＥＬＩＳＡ检测脾细胞诱生ＴＮＦ的量的改变。结果显示：再障组小鼠的ＴＮＦｍＲＮＡ水平和脾细胞诱生的α－ＴＮＦ的旦均比正常组者明显降低。（Ｐ＜０．００１），这一结果提示免疫介异的再障小鼠血清ＴＮＦ的升高与脾细胞无关。     

E.coli DNA 对荷瘤小鼠血清中TNF-α、NO含量的影响

２４只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中,８只作为正常对照组,其余１６只荷瘤后,随机分为两组,Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ治疗组和ＴＥＳ对照组。荷瘤后第４ｄ予ＤＮＡ治疗组、ＴＥＳ对照组小鼠皮下注射Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ（１００μｇ／ｍｌ）或ＴＥＳ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）０．３ｍｌ／只,隔日１次,共５次,荷瘤后２１ｄ,摘眼球取血,制备血清,测定ＴＮＦ－α含量。结果显示：Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ可调节荷瘤机体的ＴＮＦ－α、ＮＯ水平,防     

头孢地秦对细胞因子及细胞因子mRNA表达的影响

目的：探讨头孢地对正常及金黄色葡萄球菌感染的败血症小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭ）肿瘤坏死因子与白细胞介素６（ＩＬ－６）分泌及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：采集小鼠ＰＭ，体外给药，分离细胞培养上清。生物检测法测定ＴＮＦα，ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ－６；ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：头孢地秦使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性降低，使金黄色葡萄球菌感染小鼠ＰＭ４８ｈ２上清中ＴＮＦα活性升高。２００ｍ     

山莨菪碱对LPS诱导的急性肺损伤大鼠肺组织TNFα,IL—8表？…

目的 探讨山莨菪碱（６５４－２）对内毒素致伤急性损伤（ＡＬＩ）大鼠的防治作用和可能机制。方法 观察６５４－２对ＡＬＩ大鼠血气分析和肺组织损伤的影响。并采用原位杂交法检测肺组织ＴＮＦα、ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达和ＥＬＩＳＡ检测肺组织匀浆ＴＮＦα、ＩＬ－８含量的改变。结果 ６５４－２干预后可减轻ＡＬＩ大鼠肺组织损伤程度，减少肺组织ＴＮＦα、ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达及其肺组织匀浆含量。结论 ６５４－２可能通过抑