不同剂量地塞米松对SD大鼠骨代谢的影响

目的:探讨不同剂量地塞米松对实验动物骨代谢的影响。方法:将SD大鼠40只随机分为平分为四组,对照组、地塞米低剂量组(1mg/kg)、地塞米松中剂量组(2.5mg/kg)和地塞米松高剂量组(5mg/kg),处理后分别进行骨生物指标测定、细胞凋亡与Caspase-3活性检测。结果:随着地塞米松浓度的增加,骨矿含量逐渐降低。地塞米松低剂量组的最大压缩载荷明显少于其他三组(P?0.05)。地塞米松三组成骨细胞的凋亡率与Caspase-3活性均明显增加(P?0.05),低剂量组的凋亡率与Caspase-3活性少于中剂量组与高剂量组(P?0.05)。结论:地塞米松的应用能降低骨生物学质量,诱导成骨细胞凋亡,Caspase-激活是一条主要途径,而小剂量的应用对于这种影响比较小。     

长期低剂量氯胺酮对青年早期食蟹猴自发活动和丘脑神经细胞凋亡的影响

目的 探讨氯胺酮长期低剂量给药对食蟹猴自发活动和丘脑细胞凋亡的影响.方法 12只月龄为(46.25±5.40)个月的雄性食蟹猴随机分组为氯胺酮组(8只)和对照组(4只).氯胺酮组按体质量1 mg/kg每天静脉注射氯胺酮(l mg/mL),对照组注射相应量的生理盐水(l mL/kg).采用观察法定期观察和记录动物给药前后的自发活动.3个月后处死动物,用TUNEL法测丘脑细胞的凋亡状况,Western blot法测得丘脑细胞的Bcl-2和Caspase-3的表达水平.结果 实验开始时,对照组和氯胺酮组动物的行走、攀爬、移动和跳跃自发行为无统计学差异.随着用药时间延长,氯胺酮组行为出现了逐渐减少的趋势,至第90天时行走、攀爬、移动和跳跃均低于初次用药时,差异具有统计学意义;对照组自发活动没有明显的改变.这提示氯胺酮组的自发活动行为出现了抑制现象.与对照组相比,氯胺酮组丘脑凋亡细胞增多,丘脑细胞的Caspase-3的表达水平升高,差异都具有统计学意义.Bcl-2的表达水平降低,但差异无统计学意义.结论 低剂量氯胺酮持续使用3个月可导致青年早期食蟹猴自发活动显著减少,可能出现了药物耐受现象;低剂量氯胺酮持续应用可致丘脑细胞的凋亡,其机制可能与Caspase-3表达增高有关.     

榄香烯调节大鼠脑缺血再灌注慢性损伤的保护作用及相关机制

目的探讨榄香烯对大鼠脑缺血再灌注慢性损伤的保护作用及相关机制。方法将48只SD大鼠采用随机数字表法分为榄香烯低剂量组（1mg/kg）、榄香烯高剂量组（10mg/kg）、假手术组和模型组。采用线栓法闭塞大脑中动脉90min,再灌注14d制作大鼠脑缺血再灌注模型。手术当天起连续给药14d,然后进行神经功能缺损评分;采用TTC染色检测大鼠脑梗死体积;HE染色观察大鼠脑组织皮层神经元形态;原位末端标记法（TUNEL）染色检测神经元凋亡数;Westernblot法检测B细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、微管相关蛋白轻链3（LC3）-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,榄香烯低剂量和高剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显降低（均P＜0.05）。与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死体积明显增大（P＜0.01）;与模型组相比,榄香烯低剂量和高剂量组大鼠脑梗死体积均明显缩小（均P＜0.05）。HE染色结果显示,除假手术组外,模型组、榄香烯低剂量组和榄香烯高剂量组大鼠脑组织皮层神经元均出现细胞核固缩、不规则,碎片化。与模型组相比,榄香烯低剂量组和榄香烯高剂量组大鼠脑组织皮层神经元细胞核畸形有所改善。TUNEL染色结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠皮层神经元核固缩明显,呈碎片状、深棕色颗粒,神经元凋亡数明显增加（P＜0.01）;与模型组相比,榄香烯低剂量组和榄香烯高剂量组大鼠脑组织皮层神经元凋亡数均呈不同程度降低（均P＜0.01）。与假手术组相比,模型组Bcl-2、p62表达水平均明显下调,Caspase-3表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显上调（均P＜0.01）;与模型组相比,榄香烯高剂量组Bcl-2表达水平明显上调,榄香烯高剂量和低剂量组caspase-3表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显下调,p62表达水平均明显上调（均P＜0.01）。结论榄香烯改善大鼠脑缺血再灌注慢性损伤,可能是通过抑制皮层过度自噬和凋亡实现的。     

大鼠皮层神经元原代培养及毒胡萝卜素干预后的表现

目的探讨离体大鼠皮层神经元原代培养方法及毒胡萝卜素诱导大鼠皮层神经元内质网应激的作用特点。方法体外培养SD乳鼠皮层神经元细胞,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度,Hoechst33258单染法观察凋亡细胞核的形态变化及测出细胞凋亡率,透射电子显微镜观察神经元的亚细胞结构。结果 SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养,对培养7d后的神经元进行NSE免疫荧光染色显示计数NSE阳性细胞数占细胞总数的百分数为（95±3）%,在TG浓度为2μmol/L作用时间为24h时离体培养原代神经元细胞凋亡率最高为19%±0.54%,P〈0.05。神经元细胞在2μmol/LTG作用24h后神经元呈现典型凋亡形态学改变,核周内质网,线粒体结构模糊不清,包膜破损,且出现染色质浓集、核固缩、细胞皱缩、核碎裂。结论体外改良的培养方法可以获得较高纯度的神经元,在毒胡萝卜素诱导的神经元内质网应激时,线粒体改变引起的变化可能是下游事件。     

氯胺酮和咪哒唑仑联合使用对乳鼠神经细胞凋亡的影响

目的　探讨联合使用氯胺酮和咪达唑仑对乳鼠神经细胞凋亡的影响。方法　新生 7日龄SD大鼠 2 4只 ,随机分成 4组 (n =6 ) :对照组 (C组 ) :腹腔注射生理盐水 (10ml·kg-1) ;K组 :腹腔注射氯胺酮 (2 0mg·kg-1) ;M组 :腹腔注射咪哒唑仑 (10mg·kg-1) ;K M组 :腹腔注射氯胺酮 (2 0mg·kg-1)和咪哒唑仑 (10mg·kg-1)。用药后2 4h ,用原位缺口末端标记法 (TUNEL法 )检测神经细胞的凋亡情况 ,免疫组织化学SP法检测Caspase 3的表达水平。结果　①对照组仅有少量的凋亡神经细胞。②与对照组相比 ,K组和M组的凋亡细胞及Caspase 3阳性细胞数明显增多 ,其中K组的凋亡细胞以皮层区多见 (P <0 0 5 ) ;M组的凋亡细胞以海马区多见 (P <0 0 5 )。两组在丘脑部位均可见较多的凋亡细胞 (P <0 0 5 )。③K M组的凋亡细胞及Caspase 3阳性细胞数明显多于对照组 (P <0 0 1) ,与K组、M组比较 ,差异有极显著性意义 (P <0 0 1)。结论　氯胺酮和咪哒唑仑联合使用可引起未成熟鼠脑明显的神经细胞凋亡 ,其机制可能与Caspase 3激活有关。     

丙泊酚对SD乳鼠少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白表达和髓鞘形成的影响

目的探讨不同剂量丙泊酚对新生SD乳鼠少突胶质细胞合成髓鞘碱性蛋白（MBP）和大脑髓鞘形成的影响。方法出生后 7 d（P7）SD乳鼠57只,随机分为对照组（n=13）、溶剂脂肪乳组（n=5）、25、50和100 mg/kg丙泊酚组（各组n=13）,单次腹腔注射给 药。采用qPCR和Western blot检测注药后8 h mbp mRNA、caspase-3 mRNA和MBP、Cleaved Caspase-3蛋白的表达;免疫荧光 法检测注药后8 h少突胶质细胞凋亡以及24 h大脑胼胝体和内囊处髓鞘形成情况。结果与对照组相比,各丙泊酚组8 h mbp mRNA和MBP蛋白呈剂量依赖性下调（P<0.05）,caspase-3 mRNA和Cleaved Caspase-3 蛋白转录表达水平均呈剂量依赖性 增加（P<0.05）;同时少突胶质细胞凋亡明显增加,且50 和100 mg/kg 组较25 mg/kg 组凋亡显著增多（P<0.05）;24 h 胼胝体处 100 mg/kg丙泊酚组、内囊处50和100 mg/kg丙泊酚组髓鞘形成均明显减少（P<0.05）。结论丙泊酚可致SD乳鼠少突胶质细胞 呈剂量依赖性凋亡增加,MBP表达减少,并且不同程度的影响胼胝体和内囊处髓鞘的形成。     

活性氧介导大剂量氯胺酮致原代培养皮层神经元凋亡

目的:观察活性氧(ROS)是否参与大剂量氯胺酮致原代培养皮层神经元凋亡?方法:单纯培养基(C组)?1 mmol/L氯胺酮(K组)?1 mmol/L氯胺酮复合2.5 μmol/L超氧化物歧化酶类似物M40403(M组)分别作用于体外原代培养第6天的神经元24 h,检测神经元ROS生成?凋亡细胞百分比及促凋亡蛋白Bax表达?结果:与C组相比,K组神经元ROS生成?凋亡细胞百分比?Bax表达分别是其1.7?4.2及2.0倍(P < 0.05);与C组相比,M组神经元ROS生成?凋亡细胞百分比?Bax表达差异无统计学意义?结论: ROS介导大剂量氯胺酮致原代培养皮层神经元凋亡?     

外源性重组人促红细胞生成素对胎鼠缺血缺氧性脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对胎鼠缺血缺氧性脑损伤后神经细胞凋亡的影响及可能机制.方法 将20只孕19d的SD大鼠分为rhEPO治疗组(rhEPO组)、生理盐水缺血对照组(I/R组)和假手术对照组(Sham组).不同剂量rhEPO治疗组和生理盐水缺血对照组采用钳夹双侧子宫卵巢动脉20 min制备宫内缺血缺氧模型,并于官内缺血前30 min分别经尾静脉给予2500、5000、7500 U/kg rhEPO或1 mL生理盐水,假手术对照组术前30 min经尾静脉注射1 mL生理盐水后只进行开关腹手术.术后24 h取胎鼠观察宫内活胎数,取脑组织,采用免疫组化方法检测活化的Caspase-3蛋白的表达,并通过末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记(TUNEL)法观察脑神经元凋亡情况.结果 与I/R组比较,Treat组胎鼠死亡率下降(P＜0.05).I/R组海马区可见大量Caspase-3表达阳性细胞.rhEPO组与I/R组比较,Caspase-3蛋白表达明显减弱.rhEPO组中,Caspase-3蛋白的表达随rhEPO剂量的增加呈现减弱趋势,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).不同剂量rhEPO组细胞凋亡数均较I/R组减少(P＜0.01).各剂量组间比较,2500 U/kg组凋亡细胞数高于5000 U/kg和7500 U/kg组(P＜0.01),而5000 U/kg与7500 U/kg两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rhEPO预处理,可抑制胎鼠宫内缺血缺氧后的神经细胞凋亡,对缺血缺氧性脑损伤具有一定的保护作用.     

奥沙利铂致大鼠后根神经节神经元凋亡及对Caspase-3的影响

目的：探讨奥沙利铂致大鼠后根神经节神经元凋亡及对Caspase-3表达的影响。方法：采用20mg/kg3、0 mg/kg剂量的奥沙利铂腹腔注射48只Wistar雄性大鼠,于注射后0、12 h,1、2、3、7 d取后根神经节,经光镜、免疫组化技术,研究奥沙利铂致大鼠后根神经节神经元凋亡的特点、Caspase-3表达。结果：20mg/kg组大鼠后根神经节神经元在1～2 d观察到神经节边缘有少量凋亡神经元;而30 mg/kg组腹腔注射后12 h～2 d,凋亡的细胞进行性增多,2 d达高峰,3 d后明显减少,凋亡的神经元大多在神经节周边;5～8d大鼠全身衰竭明显,全部死亡。凋亡的细胞核染色质浓缩、边集。注射1～2 d,Caspase-3于神经元胞浆中表达进行性增加,2 d达高峰,3 d基本恢复至正常水平。结论：细胞凋亡是奥沙利铂致大鼠后根神经节神经元死亡的主要方式,Caspase-3表达增加,参与后根神经节神经元凋亡的过程。     

生脉散对VD大鼠行为学及海马组织NOS和神经元细胞凋亡的影响

目的 探讨中药方剂生脉散改善VD模型大鼠认知障碍的作用机制.方法 取健康Wister大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、空白模型组、生脉散高剂量组、生脉散低剂量组和尼莫地平组.除正常对照组和假手术组外,其余各组采用双侧颈总动脉永久性结扎法,造成慢性脑灌注不足所致VD模型.术后生脉散低剂量组和高剂量组各自给予生脉散生药10 g/kg/d、30 g/kg/d,尼莫地平组予尼莫地平20/mg/kg/d灌胃,正常对照组、假手术组与空白模型组以等量生理盐水灌胃.通过Moreis水迷宫观察各组大鼠的学习记忆改善情况并检测各组大鼠海马组织中NOS阳性细胞数的变化及海马神经元细胞的凋亡率.结果 大鼠学习记忆能力、海马组织中NOS阳性细胞数及神经元细胞的凋亡率,生脉散低剂量组及尼莫地平组与空白模型组比较,差异有显著性意义(P<0.01);生脉散高剂量组和尼莫地平组相比,差异无显著性意义(P>0.05).结论 生脉散能明显改善VD大鼠的学习记忆能力.对缺血引起的VD具有益智作用,其作用机制可能与降低大鼠海马组织中的NOS阳性细胞数和抑制神经元凋亡有关;生脉散对血管性痴呆大鼠有一定的预防及逆转作用,但不能使其恢复至正常.