蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响。方法 CCK-8法检测SMMC-7721细胞活力;DCFH-DA染色法检测SMMC-7721细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;荧光染色法观察SMMC-7721细胞线粒体膜电位变化;流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡率。结果 蟾酥注射液明显抑制SMMC-7721细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,作用24、48和72h后,半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.60±0.01、2.00±0.10和1.57±0.17μg/L;ROS检测结果显示不同浓度药物处理组细胞内ROS水平与对照组比较均明显升高(P=0.000);荧光染色观察到药物处理组细胞的绿色荧光随药物浓度增加而变强,红色荧光反而逐渐变弱;流式细胞术检测出SMMC-7721细胞经低、中、高浓度蟾酥注射液处理48h后,总凋亡率分别为17.33%±3.20%、25.60%±1.05%和35.76%±4.72%,与对照组比较,总凋亡率明显增加,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 蟾酥注射液能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并诱导7721细胞凋亡。该凋亡可能与蟾酥注射液引起SMMC-7721细胞ROS水平增加、线粒体损伤以及膜电位下降有关。     

脂多糖对衰老大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对衰老大鼠模型肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡的影响方法用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)复制衰老大鼠模型,实验动物分为老年组和青年组,青老年大鼠分别通过支气管肺泡灌洗和细胞贴壁的方法获取AM,将其分为LPS刺激组和对照组,每组6只,LPS刺激组用10mg/l LPS直接攻击细胞,24h后用AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒进行检测。结果衰老大鼠LPS刺激组细胞凋亡百分率(50.57%±2.29%)高于对照组(17.25%±1.68%,P<0.05);青年大鼠LPS刺激组(28.22%±1.75%)较对照组(14.25%±3.09%,P<0.05)高,青老年对照组之间差异无统计学意义。结论LPS刺激组的AM凋亡衰老大鼠明显高于青年组,老年大鼠对LPS刺激的反应程度大于青年组。     

APP17肽对糖尿病大鼠海马线粒体膜电位的影响

应用流式细胞仪分别观察糖尿病模型组、糖尿病APP1 7肽治疗组和正常对照组大鼠海马线粒体膜电位和凋亡率。结果 :糖尿病组大鼠海马线粒体膜电位明显下降 (P <0 .0 1 ) ,凋亡发生率增加 (P <0 .0 1 ) ;APP1 7肽治疗组与糖尿病组相比海马线粒体膜电位增高 (P <0 .0 5 ) ,凋亡发生率降低 (P <0 .0 5 ) ,与正常对照组比较无显著性差异。结果提示 :海马线粒体膜电位下降和细胞的凋亡可能参与糖尿病脑病的发生和发展 ;APP1 7肽具有改善这一病理过程的作用     

线粒体途径在丹参酮ⅡA诱导人宫颈癌细胞凋亡中作用

目的探讨丹参酮ⅡA诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的可能途径。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,用不同浓度丹参酮ⅡA处理后,流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡,JC-1染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位的改变,Western印迹法检测细胞色素C(Cyto C)从线粒体释放情况。结果不同浓度丹参酮ⅡA作用48h后,与空白对照组比较,HeLa细胞凋亡率均增加;线粒体Cyto C表达减少,细胞质Cyto C表达增加;线粒体膜电位电压较高细胞(正常细胞)数量减少,线粒体膜电位降低的细胞数量增加,差异均有统计学意义(F=116.5～1 064.6,q=4.11～75.38,P<0.01)。结论丹参酮ⅡA对HeLa细胞的凋亡诱导作用与线粒体膜电位降低及线粒体释放Cyto C有关。     

β淀粉样蛋白1-40对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用

目的观察Aβ1-40对大鼠皮层神经元的毒性作用. 方法原代培养大鼠皮层神经元,分别采用AO-EB染色、TUNEL染色和DNA凝胶电泳,观察不同终浓度的Aβ1-40对培养的神经元凋亡的诱导作用. 结果在荧光显微镜下可见,经AO-EB染色后凋亡的神经元胞核染色质着绿色荧光呈固缩状、圆珠状或新月状,Aβ1-40三个浓度(20,40和80 μg/ml)作用不同时间的凋亡率依次为24 h 20.17%±0.76%, 25.17%±3.82%, 28.33±2.84%;48 h 22.33%±1.44%, 38.83%±1.26%, 36.67%±1.04%;72 h 17.50%±1.80%, 26.50%±1.32%, 30.67%±1.26%.TUNEL染色结果显示胞核内散在分布断裂的DNA片段;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的"梯状"带等细胞凋亡的特征性改变. 结论 Aβ1-40可诱导大鼠皮层神经元凋亡,以40 μg/ml作用48 h的诱导效果最为明显.     

右美托咪定对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制

目的 研究右美托咪定(Dex)对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制.方法 应用高浓度谷氨酸处理PC12细胞以建立细胞缺氧损伤模型.应用MTT法测定细胞存活率,采用试剂盒分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶释放量,细胞丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力,DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,Fluo-8染色流式细胞仪检测细胞内钙离子含量,JC-1染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位.结果 在0.01～100 μmol/L浓度范围内,Dex浓度依赖性地拮抗谷氨酸所致PC12细胞损伤,至100 μmol/L时,细胞存活率达到正常组的(86.6±2.2)％,显著高于模型组(P＜0.01),乳酸脱氢酶释放量为正常组的1.4±0.1倍,显著低于模型组(P＜0.01).1μmol/L Dex预处理谷氨酸损伤的PC12细胞,与模型组相比,能够显著降低丙二醛含量(P＜0.01),提高超氧化物歧化酶活力(P＜0.01),抑制胞内活性氧过度生成(P＜0.01),降低细胞内Ca2+浓度(P＜0.01),稳定细胞线粒体膜电位(P＜0.01).结论 Dex对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Dex抗氧化和抑制细胞内钙超载,保护线粒体功能相关.     

线粒体信号转导途径参与海人酸致痫大鼠海马神经元凋亡

目的:研究海人酸(KA)致痫大鼠海马神经元凋亡、线粒体功能和线粒体凋亡通路相关蛋白的表达,探讨线粒体凋亡通路在KA致痫大鼠海马神经元损伤中的作用. 方法:40只雄性SD大鼠随机分为2组,分别为模型组:32只,采用一侧海马注射KA(2μg/Kg)制备;等渗盐水对照组,8只,一侧海马注射等量的等渗盐水.模型组根据点燃时间又分为6h、1d、3d和7d,每组8只.采用高效液相色谱(HPLC)测定大鼠海马组织CA3区中谷氨酸(glutamic acid, Glu)的含量;流式细胞仪及原位末端标记法(TUNEL)测定神经元凋亡情况;JC-1荧光检测线粒体膜电位;Fluo-3荧光染色检测细胞质内Ca2+浓度;Western blot检测各组海马细胞内细胞色素C(cyctochrome C)和caspase-9表达. 结果:①模型组大鼠海马组织中Glu含量自KA注射后3d开始增加,第7d达到高峰.与对照组比,差异有显著性统计学意义.②KA注射6 h始海马神经元内Ca2+浓度升高,线粒体膜电位下降,凋亡细胞数增高,至第7d最为显著.③对照组大鼠海马细胞色素C和caspase-9均有一定量表达,模型组KA注射后6h,海马细胞色素C和caspase-9表达即显著增加,分别为对照组的1.78和2.14倍,与对照组比,差异有显著性统计学意义.至第7d达到高峰,分别为对照组的4.37和3.20倍,与对照组比,差异有显著性统计学意义. 结论:线粒体凋亡通路参与KA致痫大鼠海马神经元损伤.     

低氧培养对RL95-2细胞线粒体损伤及凋亡的影响

目的 探讨低氧培养对于人子宫内膜上皮腺癌细胞株（RL95-2）线粒体损伤及细胞凋亡的影响。方法 用含有不同浓度（0、10、30、62.5、125 μmol/L）氯化钴的培养液培养RL95-2细胞株。采用CCK-8法测定细胞增殖活性;JC-1荧光染色,流式细胞仪分析细胞线粒体膜电位变化;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 随着氯化钴浓度升高或作用时间延长(62.5 μmol/L作用下), RL95-2细胞增殖活性逐渐下降,线粒体膜电位去极化增加,细胞凋亡率升高。结论 缺氧造成子宫内膜上皮细胞增殖活性下降,线粒体损伤,凋亡率升高。     

培土生金法对慢性阻塞性肺疾病线粒体膜电位影响的实验研究

目的观察培土生金法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期模型大鼠肺组织线粒体膜电位(△·ψm)、肺组织病理的影响。方法 120只SD大鼠随机分成正常对照组(n=20)和模型组(n=100)。模型组采用气管内注射脂多糖加烟熏的方法,制作COPD大鼠模型,从模型组中选出大鼠80只,再随机分为黄芪建中汤(高、中、低剂量组)、金水宝胶囊组和生理盐水组。给药8周后,用流式细胞仪检测肺组织线粒体膜电位,在光镜下观察肺病理形态变化。结果 COPD模型组大鼠见肺气肿病理形态变化,黄芪建中汤可明显改善COPD模型组支气管壁和肺泡炎性细胞浸润、肺泡扩张融合等病理改变;COPD模型组大鼠肺脏组织中线粒体膜电位较正常对照组明显下降(P<0.01);与模型组相比:黄芪建中汤(高、中、低剂量组)、金水宝胶囊组肺脏组织中线粒体膜电位明显升高(P<0.01),升高的次序为黄芪建中汤高剂量组>黄芪建中汤中剂量组>金水宝胶囊组>黄芪建中汤低剂量组。黄芪建中汤高剂量组与黄芪建中汤中剂量组、黄芪建中汤中剂量组与金水宝胶囊组,金水宝胶囊组与黄芪建中汤低剂量组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论通过培土生金法治疗,不仅对COPD大鼠呼吸系统的症状和体征有明显改善,而且可以显著提高肺组织线粒体膜电位,对COPD稳定期的防治具有一定的理论和实践意义。     

低氧培养对RL95-2细胞线粒体损伤及凋亡的影响

目的 探讨低氧培养对于人子宫内膜上皮腺癌细胞株（RL95-2）线粒体损伤及细胞凋亡的影响.方法 用含有不同浓度（0、10、30、62.5、125 μmol/L）氯化钴的培养液培养RL95-2细胞株.采用CCK-8法测定细胞增殖活性;JC-1荧光染色,流式细胞仪分析细胞线粒体膜电位变化;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 随着氯化钴浓度升高或作用时间延长（62.5 μmol/L作用下）, RL95-2细胞增殖活性逐渐下降,线粒体膜电位去极化增加,细胞凋亡率升高.结论 缺氧造成子宫内膜上皮细胞增殖活性下降,线粒体损伤,凋亡率升高.     

机械通气对大鼠肺泡巨噬细胞内毒素CD14受体表达的影响

目的：探讨机械通气对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AM)内毒素受体CD14表达的影响。方法：清洁级成年雄性SD大鼠18只，随机分为自主呼吸组 （A组）、小潮气量机械通气组（S组）和大潮气量机械通气组（L组）3组，每组各6只。实验4?h结束，放血处死大鼠。测定大鼠肺病理形态学积分、肺组织湿/干重比（W/D）、支气管灌洗液（BALF）炎性细胞数和肺蛋白透性系数。RT PCR测AM上内毒素受体CD14的表达，免疫组化法测BALF里AM上的CD14表达。结果：与A组比较，L组肺病理形态学积分、W/D、WBC和肺蛋白透性系数、BALF里AM的CD14蛋白表达和CD14基因表达显著升高(P＜0.01)，S组改变差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：大潮气量机械通气导致大鼠的肺部损伤，并使AM上CD14表达明显上调。小潮气量机械通气可避免上述改变的发生。     

流式细胞术分选小鼠肺泡巨噬细胞及鉴定

目的 建立一种基于流式细胞术分离小鼠肺泡巨噬细胞(AM)的方法.方法 小鼠肺脏在体外经胶原酶ⅣV消化后获得单细胞悬液,再经CD11b和CD11c抗体标记,利用流式细胞仪分选获得CD11blowCD11c+ AM,并经台盼蓝染色计数细胞活力,以及通过Real-time PCR和吞噬功能进行鉴定.结果 流式细胞术分选小鼠肺脏单细胞悬液,获得CD11blowCD11c+细胞,纯度为(93±2)％,细胞活力为(80±5)％;Real-time PCR结果显示过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在该群细胞高表达(P＜0.001);细胞吞噬功能实验结果显示该群细胞具有较好的吞噬活性,吞噬率约为10％.结论 建立了一种基于流式细胞术分选获得AM的方法,该方法获得的细胞纯度高,细胞活性好,可用于功能性实验.     

牛磺酸对TGF-β1诱导的人RPE细胞凋亡的抑制作用

目的:研究牛磺酸对TGF-β1诱导体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的抑制效应及其机制。方法:体外原代培养正常RPE细胞。设置正常对照组(无药物处理);损伤组(1μg/L TGF-β1处理RPE细胞);牛磺酸保护组(10 mmol/L和20 mmol/L牛磺酸预先处理RPE细胞后再加入1μg/L TGF-β1)。利用流式细胞仪检测RPE凋亡率;RT-PCR检测RPE细胞Fas mRNA表达情况;通过Fur-2/AM测量细胞内游离钙离子浓度。结果:TGF-β1能够诱导RPE细胞凋亡,细胞Fas mRNA表达明显增高,而且细胞内钙离子浓度升高;牛磺酸可以显著地降低TGF-β1诱导的RPE细胞的凋亡率,呈浓度依赖性,Fas mRNA的表达随细胞内钙离子浓度的降低而减少。结论:牛磺酸可以抑制TGF-β1所致体外培养RPE细胞的凋亡;其作用机制可能与降低细胞内钙离子浓度进而影响Fas通路发挥诱导细胞凋亡效应有关。     

酪氨酸激酶受体RON在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺内表达的研究

目的:探讨酪氨酸激酶受体RON在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠气道炎症中的作用。方法:单纯熏香烟法建立COPD大鼠模型;支气管肺泡灌洗计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数与肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)数,培养正常和COPD大鼠AM,采用逆转录-聚合酶链式反应法检测大鼠肺组织中酪氨酸激酶受体RON mRNA的表达情况,免疫组化法观察大鼠气道和离体培养的AM中RON蛋白的表达水平,图像分析系统测定肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)和肺泡腔面积与总面积比(PAA)。结果:COPD组MLI、PAA较正常对照组明显增高[MLI:(111.451±49.334)×10-6m vs(44.803±10.624)×10-6m;PAA:(79.653±7.594)%vs(48.352±13.063)%],而MAN则明显低于正常对照组[(81.621±20.394)×106/m2vs(170.098±42.398)×106/m2],差异均有统计学意义(P<0.01)。COPD组BALF中细胞总数和AM计数均明显高于正常对照组[细胞总数:(6.029±0.420)×108/L vs(1.463±0.0692)×108/L;AM数:(5.752±0.571)×108/L vs(1.387±0.105)×108/L,P<0.01)]。COPD组大鼠肺组织RON mRNA表达较正常对照组明显上调[(0.892±0.088)vs(0.353±0.080),P<0.01],COPD组大鼠气道上皮及AM中RON蛋白水平也较正常对照组显著增加[气道RON蛋白:(0.171±0.027)vs(0.073±0.009);AM RON蛋白:(0.310±0.101)vs(0.110±0.006),P<0.01]。结论:RON与COPD气道炎症调节密切相关。     

大鼠单核/巨噬细胞功能异质性及其在创伤-失血后免疫紊乱中的意义

目的探讨单核/巨噬细胞功能异质性与创伤后免疫紊乱的关系.方法健康Wistar大鼠48只,分为正常对照组、创伤-失血后1,4,7 d组,以无色孔雀绿比色法及流式细胞仪分别测定不同部位单核/巨噬细胞非特异性吞噬功能及I-A抗原的表达.结果①生理状态下,肺泡巨噬细胞(AM)非特异性吞噬功能最强,腹腔巨噬细胞(PM)次之,单核细胞(Mo)最弱.PM高表达I-A,而AM及Mo表达量较低.②创伤-失血后大鼠单核/巨噬细胞非特异性吞噬功能均下降,但各部位变化具有差异性.AM降低最为显著,且持续时间长,而PM受影响较小.创伤-失血后大鼠单核/巨噬细胞I-A抗原表达变化各异,PM伤后持续处于较低水平,而AM在伤后4、7 d出现升高.结论生理状态下单核/巨噬细胞功能及表型存在异质性,创伤-失血后这种异质性表现更为明显,并很可能为导致创伤后免疫功能紊乱的重要原因.     

二氧化硫对大鼠肢体缺血再灌注致急性肺损伤中肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的: 探讨二氧化硫(sulfur dioxide,SO₂)在肢体缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)保护作用中对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡的影响,为控制炎症反应寻找新的靶点。方法: 分离培养AM,应用肢体缺血再灌注致ALI大鼠血清制备细胞模型,给予外源性SO₂,然后检测线粒体膜电位以及线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放情况,AM凋亡情况及凋亡相关Bcl-2、Caspase-3分子蛋白表达情况。结果: 与对照组相比,I/R组红、绿荧光的比值下降,吸光度显著降低,AM凋亡率增加到43.81%±2.40%,Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降;而与I/R组比较,I/R+SO₂组红、绿荧光的比值升高,吸光度增高,AM凋亡率减少37.01%±1.93%,Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高。结论: 外源性SO₂可通过抑制线粒体途径改善巨噬细胞的凋亡。     

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。　方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 ]i变化。　结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。　结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 超载的作用     

8 Hz/130 dB次声对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨8 Hz,130 dB次声作用对海马细胞内钙离子浓度的影响. 方法: 将48只SD大鼠随机分为6个组,即对照组、次声作用1 d组、次声作用7d组、次声作用14 d组、次声作用21 d组、次声作用28 d组. 采用急性细胞分离技术,通过钙离子荧光探针及激光共聚焦显微镜观察大鼠脑海马细胞内钙离子浓度变化. 结果: 频率8 Hz,声压级130 dB次声分别作用2 h/d后,海马细胞内钙离子浓度于1 d组即有增高(P<0.01),7 d组仍呈增高趋势,至14 d组达高峰并呈现细胞内钙离子超载征象,至28 d组已回落. 结论: 8 Hz,130 dB次声作用不同时间可导致海马细胞内钙离子浓度不同程度增高,随作用时间延长,海马细胞对次声作用呈现适应性.     

七氟醚与芬太尼对老龄大鼠认知功能的影响

目的 评价七氟醚与芬太尼对老龄大鼠术后认知功能的影响.方法 随机将120只Wistar老龄大鼠分为4组:假手术组、心肌缺血再灌注模型组、七氟醚组、芬太尼组.术后4周和8周采集大鼠脑组织标本和血标本,流式细胞术用于测定大鼠海马神经元的凋亡率以及胞质内的钙离子水平, TUNEL用于测定大鼠海马神经元细胞凋亡指数.ELISA试验用于测定大鼠心尖血液中炎症因子含量,荧光探针用于测定大鼠海马神经元胞质中线粒体的膜电位情况.采用水迷宫实验检测大鼠术后认知功能.结果 与心肌缺血再灌注模型组相比,七氟醚组和芬太尼组学习潜伏期和记忆潜伏期缩短,肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β表达降低而血管内皮生长因子(VEGF)表达升高,大鼠神经元凋亡率和凋亡指数降低,钙离子向神经元细胞内的转移减少,神经元胞质内线粒体膜电位活性有所升高(P＜0.05)七氟醚组与芬太尼组相比,其学习潜伏期和记忆潜伏期缩短,TNF-a和IL-1β表达降低而VEGF表达升高,大鼠神经元凋亡率和凋亡指数降低,神经元胞质内线粒体膜电位活性有所升高(P＜0.05).结论 七氟醚和芬太尼可提高老龄大鼠术后 VEGF表达水平,减低IL-1β和TNF-α等炎症因子的释放,七氟醚和芬太尼还能够减少缺血再灌注后大鼠海马神经元细胞的凋亡,减轻了老龄大鼠术后认知功能障碍的发生.其中,七氟醚效果更佳.