反义寡核苷酸抑制MMP7基因表达对肺腺癌A549细胞凋亡敏感性影响的研究

目的观察基质溶解素(matrilysin,MMP7)反义寡核苷酸(antisense ligodeoxynucleotide,ASODN)对肺腺癌A549细胞凋亡敏感性的影响。方法采用硫代磷酸修饰的MMP7ASODN,通过脂质体导入A549细胞后,RT-PCR检测MMP7 ASODN对MMP7 mRNA表达的影响;流式细胞仪检测其对细胞膜Fas抗原表达率的影响;加入重组FasL,诱导凋亡,流式细胞仪检测凋亡率。结果RT-PCR结果表明,MMP7 ASODN转染能显著抑制A549细胞MMP7 mRNA表达。流式细胞仪检测表明,MMP7ASODN转染A549细胞后,与未转染组和错义寡核苷酸(scrambled oligodeoxynucleotide,SCODN)组比较,细胞膜Fas蛋白表达率增高,有显著性差异(P<0.01)。加入重组FasL,诱导细胞凋亡,细胞凋亡率明显增高,与未转染组和SCODN组有显著性差异(P<0.01)。结论MMP7ASODN可以抑制肺腺癌A549细胞株MMP7基因的表达,上调细胞膜Fas抗原表达,增强A549细胞凋亡敏感性。     

MMP7反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞粘附和侵袭能力的影响

目的:观察基质溶解素(Matrilysin,MMP7)反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide)对肺腺癌A549细胞体外粘附和侵袭能力的影响.方法:采用硫代磷酸修饰的MMP7 ASODN,通过脂质体导入A549细胞,RT-PCR检测MMP7 mRNA表达;平板粘附模型和Boyden chamber模型比较A549细胞的粘附和侵袭能力.结果:MMP7 ASODN转染A549细胞后,与未转染组和脂质体组比较,RT-PCR电泳条带相对光密度值显著降低(P<0.01).粘附于平板和穿过Boyden chamber的细胞数有明显下降(P<0.01).结论:MMP7 ASODN可以有效抑制肺腺癌A549细胞株MMP7基因的表达,降低细胞粘附和侵袭能力.     

肺癌组织MMP-7表达及其反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的 检测非小细胞肺癌患者基质溶解素（matrilysin,MMP-7）的表达,探讨重组基质溶解素（rMMP-7）和脂质体-MMP-7反义寡核苷酸（antisense oligonucleotde of matrilysin by liposome transfection,LIPO-MAON）对肺腺癌A549细胞和人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖的影响。方法 ①免疫组化法检测NSCLC患者癌组织MMP-7表达;②MMT法和半定量RT-PCR法检测rMMP-7和LIPO-MOAN作用下A549和HUVEC的增殖及MMP-7-mRNA表达。结果 57例肺癌组织47例MMP-7表达为阳性,阳性表达率为82．5％,与正常对照组相比P〈0．01。rMMP-7能促进肺腺癌A549细胞的增殖,LIPO-MAON对AM9细胞增殖则有明显抑制作用。对HUVEC增殖,仅高浓度的rMMP-7（0．75、1．0μg／ml）有促进作用,而LIPO—MAON对其增殖无抑制作用。RT-PCR结果表明,HUVEC不表达MMP-7-mRNA;rMMP-7能增加A549细胞MMP-7-mRNA的表达,LIPO-MAON可降低其表达（P〈0．05）。结论 非小细胞肺癌患者MMP-7表达阳性率为82．5％,MMP-7反义寡核苷酸能抑制肺腺癌细胞的增殖及MMP-7-mRNA表达,对正常血管内皮细胞增殖无抑制作用。MMP-7能促进肺腺癌细胞增殖。     

基质溶解素及其反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的 探讨重组基质溶解素 (recombinant matrilysin, rMMP-7)和脂质体-MMP-7反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide of matrilysin by liposome transfection, LIPO- MAON)对肺腺癌A549细胞和人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)增殖的影响.方法 ①构建MMP-7的反义寡核苷酸.②MTT法检测rMMP-7和LIPO-MOAN作用下A549和HUVEC的增殖状况.③RT-PCR法检测rMMP-7 和LIPO-MAON作用下腺癌A549细胞和HUVEC MMP-7 mRNA的表达.结果 0.75、1.0 μg/ml rMMP-7对HUVEC增殖有促进作用,各种浓度的LIPO-MAON无作用;对A549细胞的增殖,0.5、0.75、1.0 μg/ml的rMMP-7均有促进作用;而高浓度(7.5、10 nmol/ml)的 LIPO-MAON对A549细胞增殖有明显抑制作用.RT-PCR检测结果表明,HUVEC不表达MMP-7 mRNA;rMMP-7能增加A549细胞MMP-7 mRNA的表达,LIPO-MAON 可降低其MMP-7 mRNA的表达(P＜0.05).结论 在本试验浓度范围内高浓度的MMP-7能促进正常血管内皮细胞和肺腺癌细胞的增殖,其反义寡核苷酸不能抑制正常血管内皮细胞增殖,但高浓度的反义寡核苷酸能抑制肺腺癌细胞的增殖.     

端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性和诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸在肺腺癌A549细胞中抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡的能力.方法 用脂质体将荧光标记的端粒酶反义寡核苷酸转染入肺腺癌A549细胞后,TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性变化,凋亡细胞用透射电镜(TEM)观察,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 转染72h后,端粒酶反义寡核苷酸进入A549细胞内,端粒酶活性显著降低.透射电镜下,端粒酶反义寡核苷酸转染组细胞凋亡增加,细胞凋亡率比其他组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 端粒酶反义寡核苷酸能靶向端粒酶,抑制其活性,并诱导肺腺癌A549细胞凋亡.     

Anti-miR-155反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的观察anti-miR-155反义寡核苷酸（AMOs）对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法 A549细胞分为对照组和AMOs处理组，采用AMOs抑制A549细胞内miR-155的活性，液闪计数仪测定[3^H]-TdR掺入量，MTT法测定细胞增殖抑制率，流式细胞仪测定细胞周期。结果与对照组相比，AMOs显著减少A549细胞[3^H]-TdR掺入量，随着浓度从10nmol/L逐渐增加至100nmol/L，A549细胞[3^H]-TdR掺入量亦随之减少。MTT法测定细胞增殖抑制率结果显示，与对照组相比，AMOs显著抑制A549细胞的增殖。流式细胞术检测结果显示AMOs使G0/G1细胞比例显著增加，G2/M期细胞比例显著减少。结论采用AMOs抑制A549细胞内高水平表达miR-155的活性后，可显著抑制A549细胞的增殖。     

MMP-9反义寡核苷酸对肺腺癌细胞及其裸鼠移植瘤治疗的实验研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反史寡核苷酸(MMP-9ASODN)对人肺腺癌(A549)细胞及其裸鼠移植瘤治疗的实验研究.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN对A549细胞增殖和凋亡比率;采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型,以脂质体包裹的MMP-9ASODN直接移植瘤内注射.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率和生长指数,利用光镜观察对重要脏器的形态学改变. 结果 在一定范围内,MMP-9 ASODN对A549细胞存活率抑制呈浓度和时间依赖性(反义寡核苷酸浓度为600 nmol/L作用48 h时抑制作用最明显);与对照组相比转染MMP-9ASODN的A549细胞凋亡百分比明显升高(P<0.01);MMP-9ASODN能使A549细胞周期阻滞在G_1/G_0期,MMP-9ASODN组肿瘤生长指数为(3.20±0.14).明显低于对照组(6.40±0.33)(P<0.01).MMP-9ASODN组的肿瘤重量为(1.25±0.03).明显低于对照组(2.43±0.04)(P<0.01),MMP-9ASODN组的抑瘤率为(33.41±1.18)%,而且心肝肾组织观察,结构均基本正常,未见有明显的组织损伤改变.结论 MMP-9ASODN能够有效地抑制肺癌A549细-胞的增殖和促进其凋亡;在体内可以显著抑制裸鼠移植瘤的生长,且无明显毒副作用.     

新藤黄酸体外抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用及其相关机制。方法不同浓度GNA分别作用A549细胞24、48和72 h,甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测药物对A549细胞增殖的抑制率,吖啶橙/溴化乙啶（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色荧光显微镜检测细胞的凋亡;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测GNA对A549细胞损伤作用。结果 MTT法检测结果显示,GNA在0-8μmol/L浓度范围内、24-72 h时间范围内对A549的生长有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系;相差显微镜观察表明GNA作用A549细胞48 h后,细胞变圆,呈半贴壁状态;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA作用48 h后,细胞出现典型的凋亡特征;LDH实验进一步证实GNA在0-4μmol/L浓度范围内对正常细胞未见明显毒性作用。与空白对照组比较,8μmol/L GNA显著降低LDH释放。结论 GNA具有体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用,在0-4μmol/L浓度范围内GNA可能是通过诱导细胞凋亡而发挥抑制A549细胞增殖的作用。     

PBCA纳米粒介导反义寡核苷酸转染对肺腺癌细胞hTERT的影响

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(PBCA-NPs,NPs)作为端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)载体转染肺腺癌A549细胞,观察其对该细胞hTERT mRNA表达的影响。方法以NPs携带ASODN转染A549细胞后,用流式细胞仪检测细胞周期;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞hTERT mRNA表达的改变。结果转染后,与空白对照组和正义寡核苷酸(SODN)组相比,ASODN组G0/G1期细胞增加,S期细胞明显减少(P<0.01),hTERT mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论hTERT ASODN能有效改变A549细胞的细胞周期,下调hTERTmRNA表达,对肺腺癌细胞生长有抑制作用。     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的：探讨干扰素α（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：用不同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,７５μｇ／Ｌ,１００μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,记录细胞数目,进行甲基绿－派洛宁染色,测定软琼脂集落形成率。结果：ＩＦＮ－α能明显抑制Ａ５４９细胞的增殖,药物组与对照组之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）,药物组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落     

昆明山海棠总生物碱对肺腺癌A549细胞株增殖抑制作用的实验研究

目的观察昆明山海棠总生物碱(alkaloids from tripterygium hypoglaucum hutch,THHa)对人肺腺癌细胞系A549体外生长的影响.方法采用MTT比色法检测THHa对A549细胞生长的抑制作用,测定其吸光度D(490)值;用倒置和荧光显微镜观察药物作用后A549细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果随着THHa浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞增殖受到抑制,抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性.流式细胞仪结果显示,随着处理浓度和作用时间的增加,细胞的凋亡率逐渐升高.结论THHa能明显抑制A549细胞增殖,并可诱导A549细胞凋亡.     

丁酸、全反式维甲酸对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的观察丁酸(BA)、全反式维甲酸(ATRA)单用及联合应用对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响.方法采用绘制细胞生长曲线法、MTT比色法.结果经BA、ATRA处理后A549细胞生长曲线趋于平坦,细胞增殖速度、倍增时间降低,72h、120h生长抑制率显著增高,并呈剂量依赖性,其中BA和ATRA联合处理作用后72h、120h生长抑制率分别为(72.77±2.54)%、(84.03±1.58)%,较等浓度单药BA、ATRA显著增强.结论 BA对肺腺癌A549细胞具有与ATRA相近的增殖抑制作用,BA和ATRA联合应用具有良好的协同增效作用.     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。     

顺铂与蒿甲醚联用增强对人肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的体外观察顺铂和蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞的相互作用。方法采用MTT法,利用中效原理判定联合应用顺铂及蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞的效应。结果顺铂与蒿甲醚联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药单用和联用时随着药物浓度增加,其效应也增加;两药联用时的中效浓度明显小于两药单独使用时的中效浓度(顺铂减少34.5%,蒿甲醚减少97.2%);两药大剂量合用时CI<1,小剂量合用时CI>1;且两药联用时的效应与给药的时间先后次序无关(P>0.05)。结论顺铂与蒿甲醚的联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药联用时的中效浓度较单用时明显减小,在两药小剂量联用时表现为拮抗效应,大剂量为协同效应,且两药联用时的效应与给药的时间先后次序无关。     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.