冷保存/再灌注损伤对大鼠移植肝术后胆汁酸代谢轮廓的影响

目的：探讨大鼠移植肝脏经历冷保存/再灌注损伤（cold preservation reperfusion injury,CPRI）后早期胆汁酸的变化规律。方法：采用柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测法对供肝冷保存 12 h组、1 h组和对照组大鼠术后胆汁中胆汁酸成分进行测定,并结合主成分分析法和偏最小二乘判别分析法对胆汁酸代谢轮廓进行分析。结果：胆汁中胆汁酸代谢轮廓可区分 CPRI 12 h组、1 h组和对照组,牛磺脱氧胆酸与胆管损伤密切相关且肝移植术后 CPRI 12 h组的疏水指数明显增高,并与供肝冷保存时间呈正相关。结论：CPRI影响肝移植大鼠胆汁中胆汁酸代谢轮廓。     

TNF-α和IL-6在大鼠部分肝移植术后肝再生的作用

目的:研究肝再生相关细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)在大鼠移植肝内的表达及其与肝脏再生的关系.方法:建立稳定的冷缺血45 min和10 h 50%大鼠部分肝移植模型,50%肝切除为对照组.术后免疫组织化学检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)、TNF-α、IL-6的表达,RT-PCR检测术后2 h TNF-α、IL-6 mRNA的表达,并探讨TNF-α和IL-6的变化规律及其对大鼠部分肝移植术后肝再生的影响.结果:冷缺血10 h肝移植组PCNA表达明显下降.与对照组相比,冷缺血45 min组大鼠移植肝内细胞因子TNF-α、IL-6表达明显增加,高于对照组和冷缺血10 h组(P＜0.05),持续的时间也延长到移植后24 h以上.结论:与大鼠肝切除后诱导肝再生的机制相似,TNF-α、IL-6等细胞因子在移植后肝脏再生的早期启动过程中非常重要.短暂冷缺血促进大鼠肝移植后的肝脏再生,较长时间冷缺血降低部分肝移植术后肝再生.     

SWH液对大鼠肝脏能量代谢的影响

目的通过与UW液进行比较,探讨SWH液对SD大鼠肝脏能量代谢的影响.方法应用大鼠原位肝移植模型,通过高效液相色谱法(HPLC),检测肝组织ATP、ADP、AMP,计算总腺苷酸含量(TAN)及Atkinson′s能量转换(EC);肝脏低温保存8、12、18 h后行原位肝移植,观察移植术后7 d动物存活率.结果保存18 h组的ATP、TAN、EC恢复水平明显低于保存8 h组,相差显著,保存12 h组与保存8 h组比较相差不显著;SWH液组移植术后7 d动物存活率有高于UW液组的趋势.肝脏ATP、TAN含量及EC水平与大鼠术后生存率的变化趋势相同.结论肝脏ATP、TAN含量及EC水平与大鼠术后生存率密切相关,采用SWH液保存肝脏,能够有效的保护肝脏能量代谢功能.     

冷缺血损伤后大鼠移植肝内细胞因子的变化

【目的】研究不同冷缺血损伤条件下,肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)等细胞因子在大鼠移植肝内的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】建立大鼠原位肝移植模型。实验分为:冷缺血1h组、冷缺血16h组、假手术对照组。观察各组的生存率,并在术后0、1、2、4、16、24、48、72h收集标本,检测TNF-α、IL-6等细胞因子的表达。免疫组化检测肝细胞摄取溴脱氧尿核苷情况。对冷缺血1h组和冷缺血16h组在移植后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数进行分析。【结果】冷缺血损伤1h、16h肝移植组和假手术组存活率均为100%(>14d)。与冷缺血1h相比,冷缺血16h组大鼠移植肝内TNF-α、IL-6等细胞因子表达明显增加,持续的时间也延长到移植后24h以上。移植术后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数也明显增多(P<0.05)。【结论】重度冷缺血损伤启动大鼠肝移植后的肝脏再生,修复组织损伤。与大鼠肝切除后诱导肝再生的机制相似,TNF-α、IL-6等细胞因子在移植后肝脏再生的早期启动过程中也非常重要。     

大鼠部分肝移植后早期肝内细胞因子的变化

【目的】研究不同冷缺血损伤条件下,肿瘤坏死因子-α和白介素-6等细胞因子在大鼠部分肝移植后的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】建立Lewis大鼠50%部分原位肝移植模型。实验组分为：冷缺血1h、8h和16h组,每组20只。观察各组的生存率,并在术后90min、1、2、4和7d收集标本。检测不同冷缺血时间肿瘤坏死因子-α、白介素-6等细胞因子的表达。检测溴脱氧尿核苷摄取观察肝细胞DNA合成情况。【结果】共行60例大鼠部分肝脏移植,肝移植手术的成功率是100%。冷缺血1h、8h组的部分肝移植物存活率均为100%（〉7d）。冷缺血16h后部分肝移植组存活率为20%（〉7d）。与冷缺血1h相比,8h和16h的冷缺血损伤诱导大鼠部分肝移植物白介素-6（P〈0.05）和肿瘤坏死因子-α（P〈0.05）等因子表达增加。与冷缺血1h相比,冷缺血8h组的移植肝在移植术后24h摄取溴脱氧尿核苷明显增多（P〈0.05）。冷缺血16h组的移植肝在移植术后24h仅有少数溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞存在。【结论】肿瘤坏死因子-α和白介素-6等细胞因子的上调表达在启动和完成部分肝移植后早期肝脏再生的过程中非常重要。轻度（1h）和中度（8h）的冷缺血损伤可以启动并完成部分肝移植物移植后的肝脏再生,但重度（16h）的冷缺血损伤即使在早期启动信号存在的情况下,不能完成移植后的肝脏再生。     

冷保存时间对部分肝移植肝再生影响的实验研究

目的：建立大鼠部分肝移植模型基础上，研究不同冷保存时间对移植肝再生相关细胞因子表达的影响。方法：实验分为：冷保存30mim部分肝移植组、冷保存4h部分肝移植组和冷保存10h部分肝移植组，观察各组生存率并分别于术后1、2、4天取肝组织，免疫组化检测各组增殖细胞核抗原（PCNA）、TNF-α、IL-6的表达。结果：冷保存30mim部分肝移植组、冷保存4h部分肝移植组和冷保存10h部分肝移植组存活率分别为79％、71％、29％，和其他实验组相比：冷保存10h部分肝移植组PCNA、TNF-α、IL-6表达降低（P〈0．05）。结论：随着冷保存时间的延长，降低了部分肝移植术后的肝再生能力和生存率。冷保存时间影响移植肝TNF-α和IL-6的表达，移植物中细胞因子TNF-α和IL-6的表达对移植肝肝再生过程中起重要的调控作用。     

肝星状细胞的激活在大鼠供肝冷缺血损伤中的作用

目的：在大鼠全肝移植模型的基础上,检测大鼠全肝移植中,肝星状细胞的激活在供肝冷缺血损伤中所起的作用．方法：建立大鼠全肝移植模型,按冷缺血时间,分为冷缺血1h组和冷缺血5h组．观察两组7d生存率;术后6,48h处死大鼠,取下肝脏标本,应用d—SMA抗体进行免疫组织化学染色以测定肝星状细胞(hepatic stellate cell)的激活程度．结果：成功建立了大鼠全肝移植模型;冷缺血1h组和冷缺血5h组7d生存率分别为91．7％(11／12)和25％(3／12);两组间比较,在各时间点上,冷缺血5h组d-SMA的表达均高于同一时间点冷缺血1h组d-SMA的表达,表明冷缺血5h组HSC激活的程度总体上高于冷缺血1h组．结论：在大鼠全肝移植中,肝星状细胞的激活与供肝冷缺血损伤密切相关．     

冷缺血损伤后大鼠移植肝内细胞因子的变化

【目的】研究不同冷缺血损伤条件下，肿瘤坏死因子（TNF-α）和白介素-6（IL-6）等细胞因子在大鼠移植肝内的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】建立大鼠原位肝移植模型。实验分为：冷缺血1h组、冷缺血16h组、假手术对照组。观察各组的生存率，并在术后0、1、2、4、16、24、48、72h收集标本。检测TNF-α、IL-6等细胞因子的表达。免疫组化检测肝细胞摄取溴脱氧尿核苷情况。对冷缺血1h组和冷缺血16h组在移植后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数进行分析。【结果】冷缺血损伤1h、16h肝移植组和假手术组存活率均为100％（〉14d）。与冷缺血1h相比，冷缺血16h组大鼠移植肝内TNF-α、IL-6等细胞因子表达明显增加，持续的时间也延长到移植后24h以上。移植术后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数也明显增多（P〈0．05）。【结论】重度冷缺血损伤启动大鼠肝移植后的肝脏再生，修复组织损伤。与大鼠肝切除后诱导肝再生的机制相似，TNF-α、IL-6等细胞因子在移植后肝脏再生的早期启动过程中也非常重要。     

IL-6/STAT3与冷保存大鼠部分肝移植肝再生的关系

目的 探讨冷保存对大鼠部分肝移植术后肝再生的影响及IL-6/STAT3与其的关系.方法 实验分为Ⅰ组(肝切除组)、Ⅱ组(冷保存1 h部分肝移植组) 和Ⅲ组(冷保存8 h部分肝移植组).观察比较各组术后1、6、12、24、48、72、168 h肝再生率、肝组织TNF-α、IL-6含量及增殖细胞核抗原(PCNA)、STAT3表达.结果 Ⅰ组、Ⅱ组术后肝再生迅速,至术后第7天时分别接近和超过原来肝脏大小,Ⅲ组术后2～3 d大鼠肝再生率较Ⅰ组、Ⅱ组明显偏低(P＜0.05).术后12 h 内Ⅰ组、Ⅱ组肝组织TNF-α、IL-6水平明显高于Ⅲ组(P＜0.05).Ⅰ组、Ⅱ组TNF-α、IL-6于术后12 h达高峰,后逐渐下降;而Ⅲ组24 h达高峰,此后一直维持较高水平.Ⅰ组、Ⅱ组PCNA表达于术后12～24 h达高峰;Ⅲ组术后12 h内PCNA表达明显低于其余两组(P＜0.05),48 h才达高峰,但至第7天仍有较多表达.Ⅰ组、Ⅱ组术后1 h STAT3表达最多,以后逐渐下降,7 d后表达基本消失.Ⅲ组STAT3 6 h才出现表达,12 h达高峰,7 d时仍有较多表达.结论 长时间冷保存降低了部分肝移植术后的肝再生能力,TNF-α、IL-6/STAT3的早期异常可能是长时间冷保存肝再生受损的主要原因之一.     

丹参对大鼠移植肝脏再灌注损伤的防护及肝细胞凋亡的影响

目的 研究含丹参冷灌注液对移植肝缺血再灌流损伤的防护及肝细胞凋亡的影响.方法 将40只SD大鼠分为对照组、丹参组及假手术组,建立原位肝移植模型,在供肝灌注冷保存时,以4℃乳酸林格氏液为基液,丹参组灌注保存液中加丹参注射液(60ml/L),对照组不加丹参.保存5 h后置入受体.移植后6h处死大鼠取样,检测血清中AST、ALT及肝组织中氧自由基代谢相关指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平,采用TUNEL法检测移植术后肝细胞凋亡情况,光镜及透射电镜下观察移植肝脏组织形态学及超微结构的改变.结果 移植肝再灌注后丹参组AST、ALT显著低于对照组.与对照组相比,丹参组肝细胞凋亡指数明显下降(P<0.01),肝组织中MDA含量较对照组降低(P<0.01),SOD、GSH-PX活性较对照组升高(P<0.01).丹参组较对照组肝组织形态及超微结构上再灌注损害程度明显减轻.结论 丹参可抑制冷保存再灌注导致的肝细胞凋亡,对原位肝移植肝脏的缺血-再灌注损伤有保护作用.     

大鼠移植肝再灌注损伤过程中肝细胞凋亡及其调控基因表达变化

目的 研究移植肝缺血冷保存再灌流损伤过程中肝细胞凋亡变化情况及凋亡调控基因Bcl-2,FasL的表达变化.方法 将72只SD大鼠分为假手术组及移植组,移植组建立原位肝移植模型,以4℃乳酸林格氏液为基液对供肝灌注并冷保存4 h后置人受体,于移植后1,6,24h处死大鼠取样,检测血清中AST、ALT水平,采用TUNEL法检测移植肝肝细胞凋亡情况,流式细胞仪检测凋亡相关基因Bcl-2,FasL蛋白的表达.结果 再灌注后移植组AST、ALT显著高于假手术组.与假手术组相比,移植组各时点肝细胞凋亡指数明显升高,肝组织中Bcl-2表达减少,FasL表达量增加(P<0.01),以再灌注后6h变化最为显著.结论 移植术后移植肝缺血-再灌注损伤过程中肝细胞凋亡加重,于冉灌注早期达到高峰,这可能与抗凋亡基因Bcl-2的表达减少,促凋亡基因FasL表达增加有关.     

大鼠肝移植技术改进及免疫排斥初步观察

目的：对大鼠肝移植模型进行技术改进,并观察将SD大鼠肝脏移植至Wistar大鼠时免疫斥发生的规律,方法：将“二袖套法”肝称植技术在袖套管制作,受体麻醉,肝上下腔静脉,门静脉及肝下下腔静脉吻合等方面进行,行供肝取自SD大鼠的Wistar大鼠肝移植30例,并随机分为环孢霉素（CsA,2mg/kg,术后第1天至第7天皮下注射）治疗组和对照组,观察移植术后免疫排斥情况,结果：肝上下腔静脉吻合时间为6．5－10．0mg/kg,术后第1天到第7天皮下注射）治疗组和对照组,观察移植术后免疫排斥情况,结果：肝上下腔静脉吻合时间为6．5－10.0min,无肝期为8．5－12．0min,93%以上的移植大鼠生存超过7天,对照组大鼠术后9－13天全部死亡,组织病理学提示有典型的免疫排斥,而CsAI治疗组到目前为止生存良好,结论：对大鼠肝移技术进行了可明显提高移植大鼠的生存率,SD大鼠移植对Wistar大鼠的肝移植组合为高排异组合,是较理想的研究肝移植排斥及移植免疫耐受的动物模型。     

MDR-1基因骨髓造血干细胞移植抑制大鼠肝癌移植术后复发的研究

目的探讨MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移的影响。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠30只为异基因肝移植受体(将HCCLM6肿瘤组织原位接种于大鼠肝脏,10 d后行肝移植,2周后处死大鼠)随机分为两组,A组MDR-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组,B组为单纯肝移植组。比较两组大鼠肝移植术后2周生存率、肝内复发和肝外转移情况。结果术后两周,A组大鼠存活14只,B组存活10只(P<0.05)。两组大鼠肝内复发率均为100%,但复发瘤大小差异有统计学意义(P<0.05),A组为(323.23±29.56)mm3,B组为(692.73±142.56)mm3。A组肺转移率为22%,B组为70%,A组淋巴结转移率为15%,B组为50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移有一定抑制作用。     

同期输注供者地塞米松诱导脾细胞对肝移植大鼠免疫影响

OBJECTIVE: To study the immunological effects of simultaneous injection of apoptotic donor spleen cells induced by dexamethasone in rats with liver allotransplantation. METHODS: Four groups of rats were used in this study, each consisting of 10 SD rats and 10 Wistar rats with the former as the recipients and the latter as the donors for liver transplantation. In one of the groups, the recipient rats also received infusion of apoptotic spleen cells (5x10(7)) of the donors induced by an intraperitoneal injection of dexamethasone (at a daily dose of 3 mg/kg) for 3 days before liver transplantation, while in another, the recipient received untreated donor spleen cells. In the third group, the donor was treated with dexamethasone leaving the last group serving as the control group. The blood alanine transaminase (ALT), total bilirubin (TBil), pathological changes of the graft and survival time of the recipients were observed. RESULTS: The recipients with apoptotic donor spleen cell infusion had much higher ALT and TBil levels than those of the other 3 groups (P<0.05), exhibiting significantly shortened survival time and severer acute allograft rejection, as compared with the mild acute rejection in the control group (P<0.01). CONCLUSION: Simultaneous injection of apoptotic donor spleen cells induced by dexamethasone in rats with liver transplantation aggravates acute allograft rejection, one of the possible mechanisms of which may lie in the failure of timely removal of the apoptotic cells that release inflammatory factors.     

同期输注供者骨髓间充质干细胞对肝移植大鼠免疫的影响

目的 探讨肝移植同时输注供者骨髓间充质干细胞对受体肝移植免疫的影响.方法 实验分为空白对照组(A组)、移植组(B组)和输注供者骨髓间充质干细胞组(C组).A组SD大鼠5只,只行剖腹探查,B,C组Wistar和SD大鼠各10只.行Wistar-SD大鼠肝移植同时,C组提取供体骨髓间质干细胞同期输注给受者,B组给予输注生理盐水.观察术后第7天肝功能的变化、病理改变和受体生存期.结果 肝移植同时输注供者骨髓间充质干细胞,ALT,AST,TBIL,ALB较B组显著降低,生存期明显延长,病理改变仅呈急性轻度排斥反应,而单纯移植组呈急性重度排斥反应.结论 肝移植同时输注骨髓间充质干细胞促进受体对移植肝的免疫耐受.     

Reduced-size orthotopic liver transplantation with different grade steatotic grafts in rats

Objective To explore the survival time, pathological change and liver regeneration in different kinds of reduced-size liver transplantation in rats using steatotic grafts. Methods Macrovesicular and microvesicular steatotic rat liver models were established by feeding rats with a diet consisting of 79% standard chow, 20% lard and 1% cholesterol for different time periods. With modified two cuff vascular anastomoses and end-to-end sutures on the bile duct, reduced-size orthotopic rat liver transplantations were performed in an attempt to explore the ratio of graft weight to recipient body weight, recipient original liver weight and histological and electron-microscopic findings in comparison with whole rat liver transplantations. Results A one-week survival rates for the rats undergoing whole liver transplantation, and those in the 70% reduced-size orthotopic liver transplantation (ROLT) group, the 60%ROLT group and the 50%ROLT group (grade Ⅰ macrosteatotic grafts) were 91.67%, 75%, 75% and 25%. A 2-week survival rate was 83.33%, 75%, 58.33% and 0 respectively. And their graft recipient body weight (GRBW) values SD were 3.56%±0.36%, 2.53%±0.15%, 2.28%±0.12% and 1.83%±0.16%, respectively. In grade Ⅱ macrosteatotic grafts, the one-week survival rate for those undergoiong whole liver transplantation and those in the 70% ROLT group was 83.33% and 25%. In the microsteatosis grafts for whole liver transplantation, 70% ROLT, 60% ROLT and 50% ROLT, the one-week survival rate was 83.33%, 75%, 75% and 33.33%; and the 2-week survival rate was 75%, 66.67%, 66.67% and 0, respectively. The survival rate of the 50% ROLT group using grade Ⅰ macrosteatotic grafts or grafts mainly with microsteatosis was significantly different from that of other groups. While using macrosteatotic grafts in grade Ⅱ, the 1-week survival rate of the 70% ROLT group was very poor. Pathological findings after operation included liver regeneration and portal space with mild lymphocyte infiltration. Improvement in steatosis and dilation of the central vein and sinusoids was observed in some rats.Conclusions In the successful and long-term survival of rat reduced-size liver transplantation using grade Ⅰmacrosteatotic grafts or grafts with microsteatosis, the GRBW values should be over 2.28%±0.12%, and the value of graft-recipient liver weight should be over 60%. Steatotic livers in grade Ⅱ should not be used as grafts in ROLT. Steatosis was improved and even totally cured in some long-term survival rats.     

大鼠原位肝肾联合移植模型的建立

目的建立一种简易可靠的大鼠肝肾联合移植模型。方法SD大鼠作同品系异体移植的供受体。整块切取供鼠肝脏及肾脏,肝下下腔静脉在右肾静脉以下切断,肾动脉在根部切断;切除受体肝及右肾;供肝肝上下腔静脉用显微外科技术缝合,双袖套法吻合肾下下腔静脉及门静脉,右肾动脉采用显微外科技术与受体肾动脉吻合;用支架管重建胆道和输尿管。结果移植血管吻合时间短,受体手术时间短,手术成功率为73.3%,移植肝及肾功能良好。结论此模型是一种较为简易、可靠的大鼠肝肾联合移植模型。     

供体肝缺氧时间对肝移植大鼠生存率的影响

目的: 研究肝移植围手术期的缺氧损伤对肝移植大鼠生存率的影响.方法: SD大鼠随机分为4组,对照组:不进行低氧处理的原位肝移植组;A组:50只,供肝大鼠先进行10 min的低氧适应后在低氧处置下按传统的Kamada法行供肝切取;B组:40只,低氧处置同A组,但供肝切取按改进的取肝法,即不过度游离肝动脉,于灌肝后离断肝动脉.C组:15只,假手术组.观测各组大鼠手术后24 h和1 w的生存率.结果: 在低氧条件下,采用改进的快速取肝法手术的B组与采用常规的Kamada取肝法的A组大鼠相比,B组大鼠供肝切取时间显著缩短,一周生存率明显提高,但仍低于对照组的一周生存率.结论: 肝移植大鼠一周存活率与供肝的实际热缺血时间呈负相关.肝移植围手术期中各种因素引起的肝脏缺氧是导致供肝实际热缺血损伤的主要原因.     

热休克蛋白70对大鼠心脏停搏供体肝移植的保护作用

目的：采用心脏停搏供体大鼠原位肝移植模型,观察热休克蛋白70（HSP70）对心脏停搏后不同时间的供肝缺血再灌注损伤的影响。 方法：以缺血预处理方法诱导大鼠肝脏组织产生HSP70,以预处理(IP)与否及供体心脏停搏45 min或60 min的不同,将供体大鼠分为4组(IP-45,IP-60,C-45和C-60)。于肝移植术后1 h采血检测肝功能,术后1 h及7 d切取肝脏,观察肝脏病理学改变,并观察各组大鼠术后存活时间。结果：缺血预处理后24~48 h,肝组织HSP70表达明显增强;肝移植术后1 h,血清ALT和AST水平IP组明显低于对照(C)组（P<0.05）;术后7 d,IP组移植肝光学显微镜下肝小叶结构完好,汇管区有少量淋巴细胞浸润,C组移植肝则出现了较多的肝细胞坏死和气球样变。C-45和C-60组1周存活率分别为12.5%和0;而IP-45和IP-60组1周存活率分别为62.5%和37.5%。 结论：HSP70明显改善术后肝脏功能和减轻肝脏病理学改变,显著提高心脏停搏供体肝移植的存活率,HSP70对心脏停搏供体肝移植缺血再灌注损伤具有明显保护作用。     

U-74389G PRETREATMENT ATTENUATING WARM ISCHEMIA INJURY IN LIVER TRANSPLANTATION

Objective To investigate the protective role of lazaroid U-74389G pretreatment against warm ischemia injury of rat liver transplantation from non-heart-beating donors. Methods Rat othortopic liver transplantation was perfomed in 4 groups (N-45, N-60, pN-45 and pN-60 ), according to pretreatment with U-74389G or not, and the non-heart-beating time 45rain or 60rain before donor liver harvested. Survival rates, liver functions, MDA values and graft pathology of each group were compared. Results The one-week survival rates of Group N-45, N-60 , pN-45 and pN-60 were25% (2/8), 0% (0/8), 58.3% (7/12) and 33.3% ( 4/12 ), respectively. U-74389G pretreatment significantly increased survival rate of rat liver trans-plantation from non-heart-beating donors, but also improved liver functions and graft pathologies, as well as decreased MDA expression. Conclusion U-74389G pretreatment could attenuate warm ischemia reperfusion injury of rat liver transplantation from non-heart-beating donors.