聚合酶链反应检测细菌16SrRNA基因

根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性,设计合成所有细菌,革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌１３株,三对引物分别扩增的阳性率为１００％,倍比稀释法能检出细菌浓度为４ＣＦＵ．ｍｌ＾－１,同时检测临床样本４０份,阳性率为６７．５％,同期细菌培养阳性率为４５％,二者比较差异有显著性。     

聚合酶链反应检测革兰阴性细菌16SrRNA

寻找诊断细菌感染病原理炙敏感和有效的方法。方法 根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性，设计合成革兰阴性细菌的共同引物，采用聚合酶链反应检测已知的革兰阴性细菌９株，革兰阴性菌４株。结果 革兰阴性菌检测阳性率为１００％。采用倍比稀释法检出大肠杆菌的最低浓度为４ＣＦＵ／ｍｌ。     

16SrRNA基因聚合酶链反应快速检测烧伤脓毒症细菌病原体的研究

目的为早期诊断烧伤脓毒症，探索一种能迅速检测细菌感染的方法。方法按标准收集可疑脓毒症患者39人外周静脉血标本共41份。将每份标本一分为二分别行血培养和用细菌通用引物行16SrRNA基因聚合酶链反应检测，用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，比较两种方法在检测细菌病原体时的快速性和敏感性，分析血培养及药敏结果。结果16SrRNA基因PCR方法的阳性率（41．16％）是血培养阳性率（21．95％）的近两倍。P〈0．05。16SrRANA基因PCR方法出结果需4、5h，血培养需12～24h（多数需2、3d）。9例血培养阳性患者中，8例为单一铜绿假单孢菌感染，1例为单一溶血链球菌感染。结论16SrRNA基因PCR检测细菌感染的方法具有特异性、快速性、敏感性的优点。在该中心，使用抗生素治疗后，引起脓毒症的细菌主要为铜绿假单孢菌。该菌对目前常用广谱抗生素耐药。     

钩端螺旋体16SrRNA逆转录聚合酶链反应

用ＳｉＯ＿２－高盐吸附法提取钩体ＲＮＡ，以问号状钩体１６ＳｒＲＮＡ基因引物对问号状钩体ｌａｉ型Ｌａｉ株和双曲钩体ｐａｔｏｃ型ＰａｔｏｃⅠ株的ＲＮＡ进行逆转录聚合酶链反应扩增。结果表明，采用本法对ＲＮＡ和ＤＮＡ同时检测时，在琼脂糖凝胶电泳中，可使肉眼检测水平提高约１００倍。     

生殖支原体16SrRNA基因和MgPa基因TaqMan荧光聚合酶链反应检测的比较研究

目的  对生殖支原体（Mg）16SrRNA基因和MgPa基因TaqMan荧光聚合酶链反应（PCR）检测结果进行比较,选取敏感度更高的靶基因进行TaqMan荧光PCR检测。方法  选取Mg 16SrRNA基因和MgPa基因为靶基因,根据已报道文献设计合成特异性扩增引物和探针,对泌尿生殖道拭子标本进行TaqMan荧光PCR检测,对Mg不同靶基因TaqMan荧光PCR检测结果进行统计学分析。结果  Mg 16SrRNA基因TaqMan荧光PCR检测敏感性为90%,MgPa基因TaqMan荧光PCR检测敏感性为97.5%。结论  MgPa基因TaqMan荧光PCR敏感性要高于16SrRNA基因TaqMan荧光PCR。

     

聚合酶链反应检测细菌16S rRNA基因

根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性,设计合成所有细菌、革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌１３株,三对引物分别扩增的阳性率为１００％,倍比稀释法能检出细菌的最低浓度为４ＣＦＵ·ｍｌ－１,同时检测临床样本４０份,阳性率为６７５％（２７／４０）,同期细菌培养阳性率为４５％（１８／４０）,二者比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结果提示聚合酶链反应检测细菌１６ＳｒＲＮＡ基因具有高度的特异性和敏感性。     

半巢式聚合酶链反应在浆膜腔细菌感染诊断中的初步应用

目的观察革兰分型半巢式聚合酶链反应(PCR)在浆膜腔细菌感染诊断中的应用价值。方法对30例浆膜腔积液标本,以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物和一条革兰阴性菌特异性引物,以半巢式PCR方法进行检测,并同时作细菌培养。结果以通用引物对30例标本作第1次PCR,11例扩增出371bp长度的DNA片段,阳性率为36.7%;对阳性PCR产物再以革兰阴性菌特异性引物作第2次PCR,9例扩增出353bp的DNA片段即为革兰阴性菌。对此30例标本作细菌培养,阳性率为16.7%,低于PCR扩增法。5例标本细菌分离结果与半巢式PCR革兰分型结果相同。结论革兰分型半巢式PCR方法能够灵敏地检测细菌并作出革兰阴性、阳性分型,对于浆膜腔感染的早期诊断具有较好的应用价值。     

PCR-SSCP技术检测细菌16SrRNA基因以快速鉴定葡萄球菌

目的:利用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测细菌16SrRNA基因以快速鉴定葡萄球菌.方法:采用细菌共有的16 SrRNA基因的保守区引物作为通用引物,对葡萄球菌属常见的几种细菌进行PCR扩增,产物进行单链构象多态性分析.结果:采用一对引物的SSCP图谱各细菌之间难以区别;采用两对引物的SSCP图谱条带相对迁移率及条带之间的间距差异较大,可相互区别;金黄色葡萄球菌的标准株和临床株的图谱完全一致.结论:PCR-SSCP技术可方便快捷地检测葡萄球菌.     

16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎早期诊断中的应用

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎(BM)早期诊断中的应用价值.方法 收集40例2019年1月至2020年6月间,在昆明市儿童医院确诊为BM患者的CSF标本进行16SrRNA基因PCR检测,16SrRNA基因PCR检测阳性标本进行基因测序,测序结果通过NCBI BLAST进行序列比对和同源性分析,同时进行CSF细菌培养,将CSF 16SrRNA基因PCR检测结果与CSF培养结果进行比较.结果 40例患儿CSF中16例16SrRNA基因PCR检测阳性,阳性率40％;7例细菌培养阳性,阳性率17.5％,PCR检测法阳性率高于细菌培养法(χ2=4.93,P<0.05),以CSF培养为"金标准",PCR检测法的灵敏度为71.4％(5/7),特异度为66.7％(22/33);16SrRNA基因测序结果与CSF培养结果一致,且检测出CSF培养未检出的5种细菌;CSF培养时间为(61.21±12.62)h,PCR检测法所需时间为(7.09±0.45)h,两者之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 CSF中16SrRNA基因PCR检测法能提高BM患者CSF中病原菌的检出率,且能降低漏检率,具有特异、快速特点能及时为临床BM早期诊断提供可靠的病原学依据.     

多重半巢式聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA多聚酶基因

目的：探讨多重半巢式聚合酶链反应（msnPCR)在研究巨细胞病毒（CMV）DNA多聚酶基因（UL-54）中的应用价值。方法：从8例心肺移植患者血标本中提取DNA,以CMV-UL54为模板,自行设计6条特异性引物,建立msnPCR扩增系统。扩增产物在DNA测序仪上自动测序。结果：msnPCR能扩增出427bp和1052bp两条目的片段,扩增产物测序表面存在导致氨基酸改变的碱基有义突变。结论：msnPCR扩增结合测序,可检测CMV-UL54的7个功能区目片段中的碱基突变,msnPCR比普通PCR更加省时和经济。     

16SrRNA基因快速诊断败血症病原菌研究

目的通过合成所有细菌共有的16SrRNA基因高度保守区引物,进行PCR扩增,探讨败血症的快速诊断方法。方法用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因,以人类基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌为对照,检测该方法的特异性;采用倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测。结果对所测细菌株均获得920bp扩增产物,而与人基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌无交叉反应;PCR最低能检测1.5×106/L大肠杆菌DNA。结论PCR检测方法是一种极有应用价值的用于败血症早期诊断方法。     

聚合酶链反应测定巨细胞病毒在移植术后的临床价值

目的用聚合酶链反应（PCR）诊断移植受着术后巨细胞病毒（CMV）的感染状况，建立一种新的快速诊断巨细胞病毒感染的方法并初步用于移植爱着。方法应用酶链免疫吸附法（ELISA）及PCR法分别测定230例移植术患者血清中巨细胞抗体（CMV-Ab）及巨细胞抗原（CMV-Ag）。结果ELISA法测得IgG和IgM阳性率分别为99.35％和15．42％，而PCR测得抗原阳性率为9．45％，两组在统计学上无显著性差异（P〉0．05）。结论移植术后存在不同程度的CMV感染，临床上应用PCR技术检测对早期诊断移植术后受者CMV感染具有重要意义。     

16SrRNA基因检测在新生儿化脓性脑膜炎早期诊断中的应用

目的:探讨脑脊液中16SrRNA基因检测在新生儿化脓性脑膜炎早期诊断中的应用价值。方法:对疑似化脓性脑膜炎的40例患儿的脑脊液进行16SrRNA基因PCR检测,并同时做脑脊液常规、生化及细菌培养,将其结果进行比较。结果:40例患儿脑脊液16SrRNA基因PCR检测阳性率32.5%(13/40),脑脊液细菌培养阳性率0%(0/40)。根据脑脊液常规、生化检测参数临床诊断为化脓性脑膜炎的患者为12.5%(5/40)。16SrRNA基因PCR检测阳性率明显高于脑脊液培养和临床诊断(P<0.05)。结论:16SrRNA基因PCR检测方法特异性强、敏感性高,可为临床新生儿化脓性脑膜炎的早期诊断提供可靠的依据。     

聚合酶链反应用于人巨细胞病毒B基因编码区段的体外扩增

作者采用聚合酶链反应(PCR)成功地从含人巨细胞病毒B基因的重组质粒pBH_2DNA中扩增及分离了B基因编码区段及其产物糖蛋白52kd抗原编码区段。0.2μg的模板DNA经过30次循环,目的基因片段的扩增量达到10μg,足以用于酶谱分析及克隆的构建。     

16S rRNA基因多变区序列对不同种属钩端螺旋体的PCR扩增

从问号状钩体16S rRNA基因多变区V2和V4序列中设计了一对引物:PⅠ 5’GGGAAC CTA ATA CTG GAT GG;PⅡ 5’ACA TAG TTT CAA GTG GAG GC,并对不同种属钩体DNA进行了扩增。在55℃退火条件下,问号状钩体各群型具有相同大小的扩增产物(473bp)和KpnⅠ酶谱,双曲钩体有约280bp的扩增带,但不被KpnⅠ酶消化,而细丝体属钩体和其它对照DNA未见扩增。以~(32)P标记的lai型Lai株(强毒)扩增产物作探针行Southern杂交发现,问号状钩体各株扩增带均可被杂交,而双曲钩体扩增物无杂交。研究表明,该对引物可用于钩体的分类和检测。     

用PCR扩增16Sr RNA基因鉴定幽门螺杆菌的细胞壁缺陷型

目的：探讨幽门螺杆菌及其稳定L型的检测与鉴定方法。方法：用抗生素诱导、滤菌器过滤、非高渗透压培养基培养获得幽门螺杆菌稳定L型纯培养物,对幽门螺杆菌及其稳定L型进行16SrRNA基因的PCR扩增及序列测定。结果：幽门螺杆菌及其稳定L型的16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖电泳,在紫外检测仪下可见550 bp的DNA条带,测序结果经NCB I B last分析比对,基因同源性可达100%。结论：16SrRNA基因PCR检测可用于幽门螺杆菌L型及其他形态变异的菌种鉴定。     

PCR方法检测淋巴系肿瘤的基因标志：附67例分析

应用多聚酶链反应方法检测６７例淋巴系肿瘤的基因标志，以５例正常人和５例急性非淋巴细胞白血病为对照。结果表明ＩｇＨ基因重排只见于Ｂ细胞性肿瘤，具有Ｂ系特异性；ＴＣＲγ重排不仅见于Ｔ细胞，也可见于Ｂ细胞；