人胚胎组织低分子活性肽协同中药有效成份的抗白血病效应 …

目的：研究比较几种胚胎组织中低分子抗癌活性肽协同中药有效成份抑制白血病细胞增殖的作用。方法：采用噻唑蓝法（ＭＴＴ）,测定四种人胚胎活性肽协同三各中药多糖作用于Ｐ３８８白血病培养细胞的抑癌率。结果：不同的的胚胎组织低于活性肽对Ｐ３８８白血病细胞具有不同的抑制作用,其中胎脑肽抑癌率为７４．１６％,胎肝肽为７１．８１％,胎脾肽为４６．９６％,胎盘肽为４５．４９％。人胎肝、胎盘活性肽与中药有效成份的协同作     

苦参联合胎肝低分子抑瘤物抗白血病及其机制

目的 :探讨苦参 (SF)、胎肝低分子抑瘤物 (LMW NTS)联合用药对正常人骨髓粒 巨噬系造血祖细胞(CFU GM )和急性髓性白血病细胞的影响及其作用机制。方法 :采用CFU GM集落培养、细胞液体培养、Wrigh giemsa染色、3H TdR掺入实验、DNA片段凝胶电泳和RT PCR等方法 ,观察SF和LMW NTS联用对白血病的作用。结果 :SF和LMW NTS联用 ,明显提高抑制白血病细胞增殖的能力 ,促进白血病细胞的凋亡 ,诱导白血病细胞中原癌基因c Myc的下调 ,抑制正常造血祖细胞CFU GM的作用明显低于抑制白血病细胞的作用。结论 :联合用药抗白血病的效果 ,较单用苦参或胎肝低分子抑瘤物明显提高     

低分子肝素对不稳定型心绞痛D-二聚体和血管活性肽水平的影响

目的　研究低分子肝素 (LMWH)对于不稳定型心绞痛 (UAP)患者纤溶系统的活性以及冠状动脉舒缩状态的影响。方法　选择初发劳力型和恶化型心绞痛患者 ,入选前 48h内有一次以上的心绞痛发作 ,发作时心电图缺血性ST段下降≥ 1mm。把患者随机分为低分子肝素组和对照组。对照组使用硝酸甘油、硝苯吡啶、β-阻滞剂等 ;低分子肝素组在上述治疗的基础上加用低分子肝素钙 ,每日 2次 ,每次0 4ml,皮下注射 ,连续 7日。在治疗前后分别采集空腹静脉血 ,测定血浆D -二聚体、内皮素 (ET)和降钙素基因相关肽 (CGRP)的水平。结果　低分子肝素组治疗后血浆D -二聚体水平较治疗前显著升高 (P<0 0 1 ) ,与对照组治疗后相比亦有显著差异 (P <0 0 2 )。对照组治疗前后血浆D -二聚体无显著变化。低分子肝素组治疗后血浆ET水平较治疗前明显降低 (P <0 0 0 5 ) ,并且与对照组治疗后相比亦有显著下降 (P <0 0 5 )。两组治疗后CGRP都有轻度升高 ,但无统计学意义。结论　低分子肝素可促进纤溶系统的活性 ,溶解冠状动脉内血栓 ,同时还可调节机体血管活性肽水平 ,扩张冠状动脉     

新型人生长激素释放激素类似肽的生物学活性研究

目的 通过生长激素释放激素肽(GHRH)改构寻找新的人生长激素释放激素类似肽(hGHRH Analog).方法 以固相合成技术合成6种新型N端和(或)C端改构的GHRH类似肽Pro-Pro-hGHRH(1-44)、Pro-hGHRH(1-44)、1pro-GHRH(2-44)、Pro-Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys、Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys和1Pro-GHRH (2-44)-Gly-Gly-Cys.用C18反相高效液相色谱法和电喷雾质谱法检验其纯度和精确分子量.通过大鼠垂体刺激实验测定这些肽的鼠生长激素和其他垂体激素的释放值.结果 通过N端Pro-Pro-或Pro-延伸,1Pro-代换,和(或)C端Gly-Gly-Cys延伸获得的新型人GHRH类似肽活性有明显结构-功能关系:Pro-Pro-延伸＜Pro-延伸＜1Pro-代换;与标准的hGHRH(1-40)比较,1Pro-hGHRH(2-44)-Gly-Gly-Cys肽达到了相似的GH释放活性;其他垂体激素释放活性显示,6种新型类似肽均具有一定的垂体激素释放特异性.结论 这种GHRH肽结构改构获得具有一定生物学活性的新类似肽,为未来深入研究结构-活性关系,打下良好的基础.     

家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K 562选择性杀伤作用的研究

目的：利用脂多糖刺激家蝇胚胎细胞产生并提取抗菌蛋白,对比研究家蝇胚胎细胞抗菌蛋白和高三尖杉酯碱（HHT）对人髓样白血病细胞K562和正常人体细胞的抑制杀伤作用。方法采用含20mg/L脂多糖的无血清M3培养基作用于处于对数生长期的家蝇胚胎细胞16h,提取上清液中的抗菌蛋白,将抗菌蛋白配制为40、80、160、320和640μg/mL5个浓度组,采用MTT法测定各浓度抗菌蛋白对K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用。将处于对数生长期的K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞配制成相同浓度的HHT组、家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组,两种细胞均采用自身设置对照组。采用流式细胞术测定K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞3组药物的有效杀伤率。结果MTT法检测显示,5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均具有明显抑制作用,各浓度抗菌蛋白对人脐静脉血管内皮细胞均无抑制作用。对照组、HHT组及家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组对K562细胞的有效杀伤率分别为（28．16±2．14）％、（81．41±1．95）％和（82．90±3．03）％;对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率分别为（41．13±2．51）％、（82．20±2．57）％和（36．68±1．86）％。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽与常用的白血病化疗药物相比,优点在于能有效杀伤白血病细胞又不损伤正常人体细胞。     

人源分子佐剂C3d3促进人免疫活性细胞抗绒毛膜促性腺激素β亚基的免疫效应

目的探讨3个拷贝人源分子佐剂C3d(hC3d3)与绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原免疫原性的影响。方法用L-亮氨酸甲基酯(L- LME)或B细胞磁珠阴性分离试剂盒对人PBMC进行细胞分离纯化;实验分成B细胞、B T细胞、PBMC和Raji细胞4组。分别应用1、10及100 nmol／L不同浓度的hCGβ、hCGβ-hC3d3及美洲商陆(PWM)等抗原体外作用于以上细胞10～12 d,采用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞的增殖情况;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中抗hCGβ抗体的分泌水平;而酶联免疫斑点法(ELISpot)可测定各种抗原刺激后特异抗体分泌的细胞数量。结果与hCGβ相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性。应用100 nmol／L的不同抗原培养12 d后,取培养上清液进行ELISA检测,经hCGβ及PWM刺激后,上清液中均未检测到抗hCGβ特异性抗体;经hCGβ-hC3d3培养后则在B T细胞及PBMC组中见低水平抗hCGβ抗体。采用ELISpot法分析抗hCGβ特异性抗体生成细胞,经hCGβ刺激的细胞仅有数个散在的阳性细胞;而经hCGβ-hC3d3刺激后,阳性细胞明显增多(P<0．05)。结论hC3d3明显促进人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性。     

重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物联合低分子肝素治疗急性心肌梗死的疗效观察

目的 对比观察重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物(瑞通立)联合低分子肝素与联合普通肝素用于急性心肌梗死(AMI)溶栓治疗的疗效.方法 自2007年10月至2009年4月,共42例AMI患者随机分为两组接受瑞通立+普通肝素和瑞通立+低分子肝素溶栓治疗,每组分别21例,观察溶栓再通率、急性期死亡率及并发症.结果 溶栓后2小时瑞通立+低分子肝素组再通19例,再通率为90.47%;瑞通立+普通肝素再通18例,再通率为85.71%(p>0.05).瑞通立+低分子肝素组死亡1例,死亡率为5.26%;瑞通立+普通肝素死亡1例,死亡率为4.76%(p>0.05).瑞通立+低分子肝素组出血并发症1例,发生率为4.76%;瑞通立+普通肝素出血并发症2例,发生率为9.52%(p>0.05).两组共再通37例,再通率为88.09%;共死亡2例,死亡率为4.76%;出血并发症3例,发生率为7.14名.结论 瑞通立联合低分子肝素或联合普通肝素溶栓治疗AHI安全、有效,两组在再通率、死亡率、出血发生率的差异无统计学意义.     

人精液抗菌多肽29肽的分离纯化及活性研究分析

目的研究分析人精液抗菌多肽29肽的分离纯化及活性。方法对人精液先进行粗品提制,并进行冷冻保存,然后将冷冻的精液干粉进行溶解,分别进行阳离子交换柱进行层析、凝胶过滤等,将溶解的精液干粉进行洗脱,并用收集器收集洗脱峰,低温干燥冷冻保存,然后稀释进行抑菌试验,具有抑菌性的洗脱峰即为含抗菌肽的峰。之后,对含抗菌肽的提取物进行最低抑菌浓度、抗菌谱检测,采用琼脂糖弥散法对不同浓度29肽的抗菌活性的检测分析,并对其溶血活性予以检测。结果最低抑菌浓度、抗菌谱检测：杀菌活性整体要优于抗生素,对杀菌活性从低到高进行排序,结果为：大肠杆菌（10.5ug/mL）、绿脓杆菌（18.8ug/mL）、金黄色葡萄菌（20.9ug/mL）、酵母菌（37.1ug/mL）,以及白色念珠菌（41.8ug/mL）。琼脂糖弥散法对不同浓度29肽抗菌活性的检测分析：29肽对真菌均的抑制作用很强;对G＋的抑菌活性要大于对G-的抑菌活性,对绿脓杆菌的抑制活性相对最强,对酵母菌和白色念珠菌的抑制活性相对较弱。菌肽的溶血活性的检测：抗菌肽溶血活性均呈现阴性,说明29肽不具有溶血活性。结论抗菌肽的抗菌能力较之抗生素明显要强,29肽初步确定为一种新型的生物活性多肽,是具有很强的抗菌活性,且对真菌的抑制力很强,在条件允许的情况下,值得临床推广应用。     

家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562抑制作用的研究

目的研究家蝇胚胎细胞MDEC-07114抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562的抑制作用。方法利用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞MDEC-07114,提取抗菌蛋白,配制成40、80、160、320和640μg/ml 5个实验组,同时以人脐静脉血管内皮细胞作为正常对照组。采用MTT法测定不同浓度抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用,流式细胞术观察5种浓度抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562细胞周期及凋亡的影响。结果①MTT显示5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均有明显的抑制作用,而对人脐静脉血管内皮细胞无抑制作用。②流式细胞术显示对K562细胞S期的影响与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各浓度组均可引起K562细胞的G0/G1期百分比上升,细胞增殖指数PI降低。与阴性对照组相比,各浓度组引起的K562细胞细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞具有明显的抑制作用,而对人体正常细胞无抑制作用。家蝇胚胎细胞抗菌蛋白可阻滞K562细胞周期的正常发育。     

三种抗人细胞色素P450酶合成肽抗体的制备及应用研究

目的 制备兔抗人细胞色素P450酶142、3A4及4A11的特异性抗体,对其在药物代谢方面的应用进行研究.方法 ①利用生物信息学方法 分析CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11蛋白的序列,利用DNAstar软件中蛋白质的亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构指标选择多肽序列,应用Blast软件对所选序列进行同源性分析并合成多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP1A2、3A4及4A11抗体.抗体纯化后经酶联免疫吸附(ELISA)、免疫印迹(Western blot)鉴定其特异性;②通过制备大鼠给药模型利用Western blot评价上述抗体在药物代谢酶分析方面的作用.结果 获得抗CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11合成肽的抗体.Western blot结果 显示,三种抗体均可与其合成肽及天然CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11蛋白出现特异性反应,识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)分别为63 000、59 000及53 000.同时,Western blot结果 显示,所制备的抗体能识别药物诱导后大鼠天然CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11.结论 合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体.制备的抗体特异性良好,可应用于药物代谢酶方面的研究.     

低分子生物抗癌物质结合中药有效成分抗白血病的研究

Ｌ６１５可移植性白血病细胞经冻融，离心处理后，其上清液注入小鼠体内可诱导产生低分子生物抗癌活性物质。当其作用于Ｌ６１５白血病小鼠后，可使３３％的小鼠平均生存期由６ｄ延长到１５０ｄ，平均生命延长率达到２５２７．８％。用ＩＬ─２／ＬＡＫ细胞作用后的白血病小鼠，其平均生存期仅延长到１１ｄ。在上述基础上，分别将中药有效成份小蘖胺、黄芪多糖和当归多糖同低分子抗癌物质有机地配合作用于白血病小鼠后，有７５％的小鼠生存期达到了２７５ｄ，生命延长率提高了２０６１％。外周血及脏器组织未发现典型的白血病细胞侵润，骨髓细胞中１９号染色体上Ｂｊ白血病携带频率由对照组的４７．５％下降到０。此外，小蘖胺，黄芪多糖和当归多糖皆在不同程度上诱导小鼠脾脏细胞活化产生ＬＡＫ细胞。在体外实验中，其ＬＡＫ细胞对￣（１２５）Ｉ标记的白血病细胞的最大杀伤活性与ＩＬ－２在体外诱导产生的ＬＡＫ细胞活性相比较，可达到ＩＬ─２剂量提高２０倍时产生的杀伤效应。同时上述中药有效成分都在不同程度上使小鼠肝胆组织ＳＯＤ活性显著增强，阻遏了环磷酰胺对ＳＯＤ的抑制作用，逆转了环磷酰胺对正常脾脏免疫细胞的抑制和破坏作用。     

低分子量肝素对高龄不稳定型心绞痛患者凝血、纤溶和抗凝指标的影响

目的:分析低分子量肝素(LMWH)对高龄不稳定型心绞痛(UAP)患者凝血指标及疗效的影响.方法:UAP患者40例,年龄75～86岁.给予LMWH(Fraxiparine,商品名速避凝)0.4 mL,腹壁皮下注射,每12 h一次,疗程7 d.于用药前、末次用药后4 h和12 h分别抽血测定抗Xa因子活性、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆D-二聚体(D-Dimer)、血浆组织型纤溶酶原激活物(tPA)活性、血浆纤溶酶原激活物抑制物(PAI)及抗凝血酶血-Ⅲ(AT-Ⅲ).并且根据临床症状、硝酸甘油用量和ECG变化判定显效、有效或无效.结果:实验室检测结果显示,用药后PT、APTT轻度延长;血浆抗Xa活性显著增高(P＜0.05);D-Dimer含量在LMWH注射后显著降低(P＜0.05);t-PA活性较之用药前显著升高(P＜0.05).36例(87.5%)用药后症状明显改善,其中显效24例,有效12例.4例治疗无效者经PTCA治疗后症状改善.结论:LMWH治疗高龄UAP患者临床疗效显著、稳定,皮下注射,每12 h一次,可以获得持续的抗血栓效果,且不需要实验室监测.     

低分子肝素对COPD大鼠模型肺组织ICAM-1和MCP-1表达影响

目的观察低分子肝素(LMWH)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法将Wistar大鼠30只随机分为正常对照组、COPD模型组、LMWH干预组,每组10只。采用熏吸香烟加气管内注入脂多糖的方法建立COPD模型,LMWH干预组于COPD模型开始建立时皮下注射LMWH 150 U/kg,每天1次。观察各组肺组织病理改变、血气指标、肺泡灌洗液(BALF)的细胞计数及分类,应用免疫组化法测定肺组织ICAM-1、MCP-1的表达情况。结果所建COPD模型的病理学改变符合人类COPD的特点。与COPD模型组比较,LMWH干预组肺组织的病理改变轻,BALF中白细胞总数、中性粒细胞数百分比明显下降(F=146.77、106.63,q=10.29、12.42,P<0.01),肺组织ICAM-1、MCP-1的表达明显减弱(F=32.08、56.36,q=6.87、8.68,P<0.01)。结论ICAM-1和MCP-1参与了气道炎症的发生,LMWH可能通过抑制ICAM-1、MCP-1表达而减轻COPD气道炎症。