人骨生物衍生材料制备的实验研究

目的探索人脱蛋白骨及脱钙骨的制备方法,并以HA陶瓷为对照,对制得的骨生物衍生材料的形貌特征、组成成份等进行分析。为研究其用作骨组织工程的支架材料的可行性打下基础。方法通过物理或化学的方法,对人骨经去抗原、脱细胞、脱蛋白、脱钙等处理制备人骨生物衍生支架材料。结果骨生物衍生材料（脱蛋白骨、脱钙骨）具有原骨组织天然的三维网状孔隙系统;脱蛋白骨的主要成份为羟基磷灰石,脱钙骨的主要成份为胶原,其Ca、P含量几乎为零。结论本实验通过对人股骨脱细胞、脱脂肪、脱蛋白和脱钙等处理,建立了骨生物衍生材料（脱蛋白骨、脱钙骨）的制备方法,为进一步研究其在骨组织工程中大应用打下基础。     

超声波辅助脱钙技术用于猪脱钙骨基质制备的效果评价

目的以猪后腿骨干骺端为对象,考察超声波技术在脱钙骨基质制备过程中的作用。方法 6月龄公猪后腿骨清洗切片,分别用传统脱钙制备法和超声波辅助脱钙制备法进行脱钙骨基质的制备,超声波功率:220 W,频率:25 kHz。超声波处理时间:0～6h。以脱钙骨的脱钙率考察超声波对脱钙效果的影响;利用Micro-CT和显微镜观察脱钙骨的大体三维结构;测量其孔隙率和孔径大小;利用物性测试仪测量脱钙骨的压缩模量以表征其力学性能。结果脱钙骨脱钙率的测量结果显示,与传统脱钙法相比,超声波辅助脱钙制备法仅需6 h就可使脱钙率达到100%,脱钙时间可缩短45.5%;且制备的脱钙骨具有良好的孔隙率和互相连通的孔径结构,孔隙率达到85%以上,孔径大小为(348.18±64.86)μm,与传统制备方法无显著差异;并具有良好的力学性能,在脱除90%以上的钙后脱钙骨的压缩模量仍可达到(6.42±0.83)N/mm2。结论超声波辅助脱钙技术可以有效提高脱钙骨基质的制备效率,且制备效果良好。     

环孢素A对脱钙骨基质植入物钙离子的影响

目的　探讨环孢素A对脱钙骨基质植入物钙离子的影响。方法　用 40只新西兰大白兔 ,分 4组 ,每只植入 6块脱钙骨制备物 (同种或异种脱钙骨 )。然后 ,分别肌注含环孢素A的实验液或对照液。记录植入物钙离子含量。结果　第 4周时 ,同种脱钙骨实验组植入物的钙含量较对照组增加了 3 4% ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。异种脱钙骨实验组植入物的钙含量较对照组增加了 3倍 ,有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　环孢素A能使同种脱钙骨植入物钙含量的峰值提前 1周出现 ,能增加异种脱钙骨植入物的钙含量。     

同种脱钙骨粉和骨块移植的实验观察

为证实不同形式的脱钙骨基质(DBM)及未脱钙骨的成骨作用进行了本实验。我们采用家兔39只,分为四组:(1)脱钙骨粉组;(2)脱钙骨块组;(3)未脱钙组;(4)空白组。将兔尺骨干造成1cm缺损后植入上述不同DBM及未脱钙骨,定期行X线及组织学观察。实验结果显示两种形式的DBM,在第8—10周标本的骨愈合率为70—80％,二者无明显差别。但未脱钙骨组在第8—10周标本只有部份连接。空白组在第10周无骨连接。以上结果表明DBM的成骨效应较未脱钙骨为优。骨粉制备简单,使用保存方便,可塑性强,作为骨移植材料填充骨腔是可行的。     

骨及钙化组织脱钙法的比较

目的：探讨骨及钙化组织的脱钙方法。方法采用三种不同方法处理相同的骨及钙化组织,甲组先将骨及钙化组织切成薄片,用甲酸氯化铝脱钙固定液彻底脱钙,流水冲洗,碳酸铝饱和溶液中和酸;乙组先用甲酸氯化铝脱钙固定液处理大块骨及钙化组织至彻底脱钙,再将骨及钙化组织切成薄片,碳酸铝饱和溶液中和酸;丙组按传统方法脱钙。三组组织脱钙后均常规制作HE切片,并行CD68和TTF-1免疫组化检测,比较三种方法的脱钙时间、HE染色和免疫组化检测结果。结果甲组脱钙时间短、切片完整、组织结构清晰、染色对比鲜明、长期保存不易褪色、免疫组化阳性信号正常,各项结果均优于乙组和丙组。结论甲酸氯化铝脱钙固定液处理骨及钙化组织,脱钙时间短,切片质量、染色质量、免疫组化质量好,切片长期保存不易褪色,值得推广。     

人工骨成骨模型免疫组织化学染色方法的构建

目的以大鼠单纯胫骨骨折后加入骨粉复合物为模型,观察乙二胺四乙酸(EDTA)-2Na脱钙和混合酸脱钙后免疫组织化学检测的效果。方法将骨粉复合物放置于大鼠左侧胫骨的骨块缺损中建立人工骨成骨模型,将模型分为两组(每组标本10例),实验组用EDTA-2Na脱钙,对照组采取混合酸脱钙后分别观察两组的免疫组织化学检测效果。结果EDTA脱钙组骨小梁结构保存完整,阳性表达较多。混合酸脱钙后,骨结构破坏较多,抗原破坏较严重,阳性表达明显减少。结论EDTA脱钙优于传统的脱钙方法,更适合于骨组织脱钙和免疫组织学化制片。     

脱钙骨制作标准的探讨

本文报告用Perkin—Elmer 2280型原子吸收分光光度仪对不同脱钙时间的免骨皮质及脱钙液中的钙量进行测定,求出其线性回归方程。结果显示:脱钙时间与脱钙量之间在一定条件下存在着正相关。作者认为:线性回归方程可用于指导各种脱钙骨的制作。     

常温储存的人同种异体骨制备

目的：探讨常温储存的人同种异体骨制备流程。方法：遵循供体选择标准，无菌条件下取骨经脱脂、脱钙等处理，制备新鲜骨、脱钙骨基质(DBM)、表面脱钙骨、半脱钙骨，封装常温储存备用。结果：临床应用常温储存人同种骨植骨10例，成活良好。结论：常温骨库制备人同种骨流程可靠、实用。     

人骨髓基质干细胞体外三维立体培养的实验研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)在部分脱钙骨三维支架上立体培养的可行性。方法：将自人骨髓中分离出的骨髓基质干细胞进行培养、扩增,接种于多孔的部分脱钙骨支架上,通过荧光活性染料DiI标记和扫描电镜观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的生长和粘附情况,并测量hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率。结果：hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率为(99.1±1)%;DiI标记的细胞于接种后第2、4、7天激光共聚焦检测,见支架空隙中细胞逐渐增多;电镜观察,接种7天后,电镜下见细胞覆盖了部分脱钙骨表面;自部分脱钙骨中份切开,横断面电镜观察见断面中充满细胞。结论：hBMSCs在部分脱钙骨支架的三维立体环境中生长良好,是一种较好的体外培养方法。     

脱钙骨治疗良性骨肿瘤及瘤样病变骨缺损

目的 :分析脱钙骨治疗良性骨肿瘤及瘤样病变的方法及疗效。方法 :对 93例良性肿瘤及瘤样病变患者病灶清除后遗留的骨缺损 ,以脱钙骨进行充填。结果 :脱钙骨植入后4周 ,骨缺损处已有新骨生成 ,8周以后成骨作用显著 ,密度逐渐均匀 ,1 0～ 1 2周密度接近正常骨组织。结论 :脱钙骨具有良好的生物相容性和诱导成骨作用。脱钙骨利于储存 ,使用方便 ,疗效可靠 ,是值得推荐的理想的植骨材料。     

同种异体表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的实验研究

目的：观察表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力,寻找自体骨移植的理想替代材料。方法：用表面脱钙骨基质明脱修复大鼠颅骨８ｍｍ的圆形缺损,同自体骨、骨基质明胶移植对比,术后不同时间行Ｘ线、组织学检查。结果：表面脱钙骨基质明胶骨骨基质明胶诱导成骨能力相似,但完全被新骨替时间较长。结论：表面脱钙骨基质明胶是修复大面积或节段性骨缺损的理想材料。     

微孔同种异体表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的实验研究

目的 :观察微孔制备对表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的影响。方法 :用有微孔和无微孔表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨直径为 8mm的环形骨缺损 ,术后不同时间行组织学和X线检查。结果 :有微孔制备的表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力优于无微孔的表面脱钙骨基质明胶。结论 :微孔制备能提高脱钙骨基质明胶的诱导成骨能力     

甲酸梯密度骨脱钙法在透射电镜样品制备中的应用

电镜标本骨脱钙的经典方法用钙螯合剂乙二胺四乙酸（EDTA）,其最大优点是即使长时间脱钙,在电镜下依然能够看到标本保持很好的细致结构[1]。甲酸一般用于光镜标本的脱钙[2],而不用于电镜标本的骨脱钙。笔者从1981年试验用不同浓度甲酸作为电镜标本的骨脱钙剂,处理得当也可取得与EDTA脱钙剂接近一致的效果。     

微孔同种异体表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的实验研究

目的：观察微孔制备对表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的影响。方法：用有微孔和无微孔表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨直径为8mm的环形骨缺损,术后不同时间行组织学和X线检查。结果：有微孔制备的表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力优于无微孔的表面脱钙骨基质明胶。结论：微孔制备能提高脱钙骨基质明胶的诱成骨能力。     

室温、恒温与微波骨组织脱钙实验方法的比较

为了探求简单、便捷、快速、有效的骨组织脱钙法,比较室温、恒温与微波三种脱钙实验方法的效果,选择同一新西兰兔双侧桡骨,选取A、B、C 3种脱钙液,分别于室温、37℃恒温水浴、10%(相对微波发射能量)微波、30%(相对微温发射能量)微波条件下进行脱钙,两种微波脱钙温控在37℃。每小时更换一次脱钙液,分别收集脱钙液,至脱钙终点,将每个脱钙骨标本的全部脱钙液,用原子吸收分光光度计测量钙脱出量,并将脱钙骨标本常规处理切片进行光镜观察。比较3种脱钙液分别在4种脱钙条件下,脱钙骨标本到达脱钙终点的时间、钙脱出量、光镜观片效果。结果,A、B、C 3种脱钙液分别在4种脱钙条件下,①到达终点的时间:室温组与恒温、10%微波、30%微波组之间的差异有统计学意义(P<0.05);恒温组、10%微波、30%微波组间的差异无统计学意义(P>0.05);②终点钙脱出量:用原子分光光度计测得钙脱出量为56.43～66.51mg/100mg标本骨,每种脱钙液室温组、恒温组、10%微波、30%微波组间进行比较无统计学意义(P>0.05)。恒温脱钙法与微波脱钙法到达脱钙终点的时间是室温脱钙法的1/12～1/6;三种脱钙法脱钙效果无差异,脱钙后切片光镜观片三者清晰度均满意,但恒温脱钙法较微波脱钙法操作简单,设备要求不高。     

带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复大段骨缺损的实验研究

目的　探讨带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复大段骨缺损的效果。方法　以兔桡骨中段 15mm的大段骨缺损为模型 ,通过X线lane评分、组织学观察、电镜扫描 ,评价术后 4、8、12、16周时带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复骨缺损的效果。结果　带血供的骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复效果明显好于单纯脱钙骨组 ,前者在Lane评分 (P <0 .0 5 )、组织学观察等方面均优于后者。结论　带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复大段骨缺损效果优于单纯脱钙骨。     

胚胎骨骨诱导活性的实验研究

制备人胎骨全脱钙与部分脱钙骨基质明胶（简称ＢＭＧ），并分别做成颗粒（直径０．５～１ｃｍ）和粉末（直径＜２５０μｍ），同时制备少许未脱钙的胎骨颗粒，植入大鼠双侧后肢的股肌陷窝内，猪骨ＢＭＧ作为对照。通过组织学切片来比较各组植入物的诱导成骨活性。结果显示：（１）胎骨ＢＭＧ成骨过程早且量多，免疫排斥反应低；（２）未脱钙的胚胎骨无诱导成骨活性；（３）猪骨ＢＭＧ有一定的成骨能力，但时间较晚，量少，早期有明显的免疫反应；（４）全脱钙和部分脱钙胎骨的诱导成骨活性接近（Ｐ＞０．０５）；（５）粉末脱钙胎骨ＢＭＧ的诱导成骨活性降低；（６）酒精消毒ＢＭＧ效果可行     

同种异体表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的实验研究

目的 :观察表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力 ,寻找自体骨移植的理想替代材料。方法 :用表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨 8mm的圆形缺损 ,同自体骨、骨基质明胶移植对比 ,术后不同时间行X线、组织学检查。结果 :表面脱钙骨基质明胶同骨基质明胶诱导成骨能力相似 ,但完全被新骨替代时间较长。结论 :表面脱钙骨基质明胶是修复大面积或节段性骨缺损的理想材料。     

一种可用于免疫组化的快速脱钙法

经典的骨或骨化组织脱钙,主要是用盐酸、硫酸或硝酸等强酸为主要成分配制成脱钙液,用此种脱钙液来脱去组织中的钙盐.而HAS脱钙液脱钙效果优良[1],可用于免疫组化研究.但HAS脱钙液脱钙时间相对较长,不能满足现代临床病理诊断需要.     

骨组织脱钙过程中脱钙量的观察

目的观察3种脱钙液在脱钙过程中不同时段和终点钙的脱出量。方法取6月龄健康新西兰兔双侧桡骨,用3种脱钙液分别在室温和微波条件下进行脱钙,每小时末更换一次脱钙液、用电子天平称重,分别收集脱钙液,用原子分光光度仪分别测定钙含量。结果3种脱钙液在室温和微波脱钙过程中,钙累计脱出率逐渐增加,3小时后钙脱出率减小,骨脱钙后的重量比脱钙前减少40%-48%;不同时间段脱钙率:第1小时脱钙率最高,随着时间的增加每小时脱钙率逐渐减少,接近终点时曲线变平稳。终点钙脱出量为54-69mg/100mg标本骨,组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论脱钙过程中钙脱出量呈规律性变化:随着脱钙时间的延长逐渐增加,与时间呈正相关;第1小时钙脱出率最高,随后每小时钙脱出率逐渐较少。