基因芯片技术及其应用

基因芯片技术是九十年代初随着人类基因组计划的发展而兴起的新兴技术,它通过缩微技术,同时分析成千上万个样本,将现在生命科学研究中许多不连续的分析过程集成于硅芯片或玻璃芯片等介质上,使这些分析过程连续化、微型化、集成化和自动化.由于典型的基因芯片是在介质表面有序地点阵排列DNA,因此又叫DNA微阵列(DNA microarray),将待测样本标记后同芯片进行杂交,通过检测杂交信号并进行计算机分析,从而判定待测标本中基因是否存在或存在多少.     

时间分辨荧光核酸杂交分析体系的建立及其初步应用

建立时间分辨荧光核酸杂交分析体系并应用于临床乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测。采用本室自制螯合剂异硫氰酸苯基—EDTA制备铕离子标记的链霉亲和素(Eu~(3+)—SA),抽提患者血清中的DNA,包被于聚苯乙烯微滴板中,与生物素化HBV DNA杂交后,以Eu(3+)—SA为检测物,应用时间分辨荧光技术检测血清样本     

基因芯片技术及其应用

基因芯片技术是九十年代初随着人类基因组计划的发展而兴起的新兴技术 ,它通过缩微技术 ,同时分析成千上万个样本 ,将现在生命科学研究中许多不连续的分析过程集成于硅芯片或玻璃芯片等介质上 ,使这些分析过程连续化、微型化、集成化和自动化。由于典型的基因芯片是在介质表面有序地点阵排列 DNA,因此又叫 DNA 微阵列 ( DNAmicroarray) ,将待测样本标记后同芯片进行杂交 ,通过检测杂交信号并进行计算机分析 ,从而判定待测标本中基因是否存在或存在多少。随着基因芯片技术的发展 ,又出现了以蛋白、组织和细胞等为材料的芯片 ,统称为生物…     

对献血者巨细胞病毒感染的研究

目的 了解献血中巨细胞病毒(HCMV)感染状况，并探索一种比较简便的检测方法。方法 用PCR法和DNA杂交法检测同一献血的白细胞及血清中的HCMV—DNA，并用ELISA法检测血清中的HCMV-IgM、IgG(测4个滴度)，连续2a共检测白细胞和血清样本各200人份。结果 PCR法检测白细胞中的HCMV-DNA阳性率分别为63％和70％，DNA杂交法检测的阳性率分别为42％和50％；PCR法检测血清中的HCMV-DNA的阳性率分别为49％和53％，DNA杂交法检测的阳性率分别为33％和39％；HCMV-IgM阳性率2a均为5％；HCMV-IgG阳性率分别为54％和58％。结论 HCMV-IgG抗体可作为HCMV感染的指标。     

妇科门诊就诊者HPV基因分型结果回顾分析

目的:探讨女性HPV DNA检测在宫颈癌防治方面的意义。方法:应用PCR-反向点杂交技术对468例妇科门诊就诊者基因分型检测。结果:468例样本中,HPV感染者165例,阳性率35.25%,HPV感染人次233人次。检测高危型HPV(16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,83)171人次,占感染总人次的73.39%;检出低危型HPV(6,11,42,43)62人次,占感染总人次26.61%。43例样本中包含了2～6种亚型的感染。结论:DNA杂交技术检测HPV基因分型,可一次检测多种亚型,有利于对HPV多重感染的诊断和宫颈癌的防治,可作为宫颈癌筛查的手段。     

DNA探针杂交快速检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌

目的建立一种早期快速检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的分子生物学方法。方法采用聚合酶链反应(PCR)合成肺炎链球菌和流感嗜血杆菌特异的DNA探针和细菌16SrRNA的通用探针,并用生物素标记DNA探针,分别与细菌、病毒和真菌DNA杂交。并将该方法评价临床样本的检测。结果聚合酶链反应分别扩增出263、351、370bp三种DNA探针,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌只与其对应的探针杂交,细菌通用探针和病毒、真菌间无交叉反应。该法可检测出1ng细菌DNA,100份痰标本利用该方法检测出11份肺炎链球菌和8份流感嗜血杆菌,其阳性率高于痰培养。结论该方法简便、快速、特异,具有较高的应用价值,可应用于临床检测。     

从血液和唾液中自动化提取人体DNA的探索与应用

目的 从样本获取方式、储存条件和DNA提取方法等方面探索快速、有效、低成本、无创伤、适合于大规模流行病学研究的基因组DNA来源样本.方法 对带有分离胶的血细胞、EDTA抗凝全血、分离血清后的凝固血细胞、新鲜唾液、-20℃保存1个月的唾液、2种唾液保护液作用的唾液样本和棉拭子获得的口腔黏膜上皮细胞样本进行DNA提取和检测,验证不同样本获得DNA的稳定性.随机抽取1人的2份质量控制合格的DNA样品,采用高通量测序技术对亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性位点进行分型检测.结果 带有分离胶的血细胞样本中,分离胶对血细胞DNA的提取效果影响明显,DNA样品合格率为37.7％(1130/3000).EDTA抗凝全血样本DNA提取效果良好,DNA浓度为(180.20±20.30)mg/L,D260/D280为1.90±0.10.分离血清后的凝固血细胞样本中DNA降解严重,提取的DNA浓度为28.91～34.53 mg/L.新鲜唾液和-20℃保存1个月的唾液样本经提取后得到的DNA浓度均合格,且差异无统计学意义(P>0.05).2种唾液保护液作用下的唾液样本提取得到的DNA浓度均合格,且差异无统计学意义(P>0.05).口腔黏膜上皮细胞样本提取的DNA浓度为(48.41±9.81)mg/L,低于唾液样本来源的DNA浓度.高通量测序结果显示,按照质量控制标准筛选的合格DNA样品可以实现体外目的基因片段的扩增和MTHFR C677T基因多态性位点的分型检测.结论 血液和唾液样本均是人体基因组DNA提取的良好来源,唾液样本成本低、采集无创伤且质量控制合格,是一种更有效的DNA来源样本.     

两种HBV-DNA定量测定方法的比较

目的考察实时荧光PCR定量法(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的准确性。方法通过对 56份血清进行HBV—DNA检测,其中包括一个10倍倍比稀释系列6份、阴性血清12份和阳性血清38份。比较两种方法的准确性及临床标本符合情况。结果微板核酸杂交定量法和实时荧光定量法的线性回归系统分别为0．977 和0．999。实时荧光定量法所检测的不同含量的样本批内变异系数均低于微板核酸杂交定量法。结论实时荧光定量法具有较好的灵敏度、特异性、重复性和线性,与微板核酸杂交定量法有良好的相关性。     

牛雄性DNA特异的限制性片段研究

牛基因组DNA经PstI酶解后,以与性别有关的雌性蛇的小卫星DNA组份一BKm序列(p184)为探针进行分子杂交,回收4.4kb牛雄性DNA片段,以pUC_(19)为载体亚克隆,重组质粒经菌落原位杂交和Southern blot分子杂交鉴定。将此雄性DNA片段检测牛基因组DNA,观察到由于性别的不同而出现不一样的杂交模式。实验结果表明,用来自牛雄性DNA特异的限制性片段的重组质粒作探针,Southern blot分子杂交方法可以鉴定牛的性别。     

核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌的实验研究

目的 构建一种用于检测金黄色葡萄球菌的核酸外切酶-压电石英DNA传感器新方法,同时对其重要影响因素进行探讨.方法 采用λ核酸外切酶处理金黄色葡萄球菌PCR产物,EB染色、电泳后于紫外灯下进行观察,对杂交温度、杂交时间和杂交响应性能等因素进行实验研究,进一步将构建的核酸外切酶-压电石英DNA传感器法用于金黄色葡萄球菌检测,并对其灵敏度和特异性进行研究.结果 λ核酸外切酶-压电石英DNA传感器法最适杂交温度为35℃,最适杂交时间为60 min,响应性能显著大于普通压电DNA传感器(P＜0.01),可以检测到1.0×104CFU/ml的金黄色葡萄球菌,特异性好.结论 利用核酸外切酶-压电石英DNA传感器检测金黄色葡萄球菌,具有杂交效率高、技术难度低、频率响应性能高等优点,有较好的应用前景.