乳腺癌相关成纤维细胞对MCF7细胞调控效应的研究

目的 研究乳腺癌相关成纤维细胞(CAFs)对MCF7细胞的调控效应,探讨肿瘤微环境在乳腺癌发展中的作用.方法 采用I型胶原酶法分离并培养CAFs.DCFHDA法进行活性氧自由基(ROS)检测.应用鸡胚卵黄囊尿囊膜进行血管生成实验.结果 共培养乳腺癌MCF7细胞和CAFs能促进二者增殖,并可促进ROS生成.在共培养体系中加入过氧化物酶能抑制ROS生成.另外,共培养能明显促进乳腺癌细胞新生血管的生成,而在CAFs中过表达过氧化物酶能显著抑制该过程.结论 CAFs对乳腺癌MCF7细胞的 ROS表达具有调节作用,并可促进肿瘤新血管生成.     

ADMA对人单核/巨噬细胞MCP-1及LOX-1表达的影响

目的 通过观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对单核细胞转化为巨噬细胞过程中分泌单核细胞趋化蛋白-1及植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1的影响,探讨ADMA在单核细胞转化为巨噬细胞过程中的作用.方法 分别用ADMA、ADMA及L-精氨酸孵育单核细胞48h,酶联免疫吸附法测定上清液中单核细胞趋化蛋白-1的含量,Western blotting测定细胞中植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1的蛋白表达量,逆转录聚合酶链反应法测定单核细胞趋化蛋白-1及植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达.结果 ADMA能够促进单核细胞中单核细胞趋化蛋白-1的分泌(p＜0.01),以及上调单核/巨噬细胞中植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1蛋白的表达(P＜0.05),增加单核/巨噬细胞中单核细胞趋化蛋白1 mRNA(P＜0.01)及植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1 mRNA的表达(p＜0.05),而L-精氨酸能抑制ADMA的作用(p＜0.05).结论 ADMA能够增加单核细胞向巨噬细胞转化过程中单核细胞趋化蛋白-1及植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1的表达,并且这种作用能被L-精氨酸所抑制.     

单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞在宫颈鳞癌癌变中的研究

目的 观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞(M(α))在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组织中的表达,研究其与宫颈鳞癌临床病理参数的关系.方法 采用SP免疫组化法检测20例正常宫颈组织,60例CIN,40例宫颈鳞癌组织中MCP-1和巨噬细胞的表达.采用SPSS14.0统计软件对结果进行统计学分析.结果 (1)与CINⅢ组相比,正常宫颈组MCP-1阳性评分升高(P＜0.05),CINⅠ、CINⅡ、宫颈癌组中的MCP-1阳性评分升高(P＜0.01);并且MCP-1阳性评分与宫颈鳞癌临床分期、浸润深度、血管转移、淋巴转移均呈正相关(P＜0.01),但与分化呈负相关(P＜0.01).(2)与正常宫颈组比较,巨噬细胞在CINⅠ、CINⅡ中的表达降低(P＜0.05),在CINⅢ中的表达明显降低(P＜0.01).与CINⅢ组相比,巨噬细胞在CINⅠ、CINⅡ、宫颈鳞癌组的表达明显升高(P＜0.01).与CINⅡ组相比,巨噬细胞在宫颈癌组的表达明显升高(P＜0.01).并且巨噬细胞与宫颈鳞癌临床分期、浸润深度、淋巴转移均呈正相关(P＜0.01),与血管转移呈正相关(P＜0.05)、但与分化呈负相关(P＜0.0l).(3)在宫颈临床病理分期中,经Spearma相关性分析,MCP-1与巨噬细胞存在正相关(r=0.560,P=0.00).结论 MCP-1和巨噬细胞的异常表达与宫颈鳞癌的发生、发展相关.癌组织中浸润的MCP-1和巨噬细胞可以促进肿瘤血管、淋巴管的形成和肿瘤的浸润转移.     

IL-6在人单核细胞和脂肪细胞共培养体系中水平的相关变化

目的:研究人单核/巨噬细胞系THP-1与人原代脂肪细胞共培养体系中白细胞介素(IL-6)分泌水平的变化,以探讨炎症和肥胖的相关性。方法:建立THP-1与人原代脂肪细胞共培养体系,并用JNK抑制剂干预共培养体系24h后,用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定单核细胞组、脂肪细胞组、共培养组及共培养加JNK抑制剂组上清中IL-6的水平。结果:共培养组较单核细胞组、脂肪细胞组IL-6水平升高(P<0.05),共培养加入JNK抑制剂后,IL-6水平有所下降(P=0.114)。结论:人单核/巨噬细胞系THP-1与人原代脂肪细胞共培养促进炎症因子IL-6的释放,选择性阻断炎症介导的信号传导途径,IL-6的释放减少,对症使用抗炎介质及JNK抑制剂有望成为肥胖治疗的新靶点。     

体外共培养体系中胆管癌细胞对人脐静脉内皮细胞b-FGF和VEGF表达的影响

目的 探讨体外共培养体系中胆管癌细胞(QBC939)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立胆管癌QBC939细胞与HUVEC体外共培养体系,采用CCK-8法检测共培养不同时相HUVEC的增殖;ELISA检测共培养上清液中b-FGF含量;qRT-PCR和Western blot检测共培养不同时相点HUVEC细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达.结果 共培养后12、24、48 h和72 h,HUVEC增殖较对照组显著增高(P＜0.01).与0h组比较,共培养12、24、48 h上清液中b-FGF含量显著增高(P＜0.05).共培养12 h时VEGF mRNA表达显著增加,并持续至72 h(P＜0.01),VEGF蛋白表达在共培养12h后显著增高,24、48、72 h时与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胆管癌QBC939细胞可促进血管内皮细胞增殖、增加b-FGF分泌和VEGF表达.b-FGF和VEGF表达增加与肿瘤血管新生,以及肿瘤的生长和转移可能具有相关性.     

整合素β3mRNA在乳腺癌中表达的临床意义

目的 研究乳腺癌中整合素β3mRNA的表达及其与肿瘤血管生成、生长方式、浸润转移和预后的关系.方法 应用原位杂交和免疫组织化学S-P法检测102例乳腺癌中整合素β3mRNA和CD34的表达.结果 整合素β3mRNA在乳腺癌中阳性表达率为48%,在乳腺癌中有腋窝淋巴结转移组61.8%,无腋窝淋巴结转移组31.9%,两者差别有统计学意义(P＜0.05).CD34阳性血管数作为MVD.整合素β3mRNA阴性表达组的MVD值为(17.35±5.67),整合素β3mRNA阳性表达组的MVD值为(20.37±7.30),两者差别有统计学意义(P＜0.05);CD34阴性表达组的MVD值为(17.14±5.78),CD34阳性表达组的MVD值为(21.27±7.14),两者差别有统计学意义(P＜0.05).结论 浸润性癌中的整合素β3mRNA的表达与腋淋巴结转移成正相关,与患者的年龄、肿瘤大小、ER、PR无相关性;在乳腺癌组织中MVD表达与整合素β3mRNA表达成正相关.     

小干扰RNA干扰核因子κB信号通路对内毒素刺激巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α的影响

目的 探讨小于扰RNA(siRNA)抑制核因子κB(NF-κB)信号通路对细菌脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 人单核细胞白血病THP-1细胞经氟波酯诱导为巨噬细胞后分2组,分别感染应用分子克隆技术构建的针对NF-κB P65的siRNA逆转录病毒质粒(siRNA病毒组)及乱序(Scramble)对照序列逆转录病毒质粒(Scramble病毒组).用终浓度50μg/ml的LPS持续刺激2组巨噬细胞,分别应用RT-PCR技术检测LPS刺激不同时间巨噬细胞NF-κB P65 mRNA和TNF-α mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB P65蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞培养上清液TNF-α含量.结果 LPS刺激12和24 h,siRNA病毒组巨噬细胞NF-κB P65 mRNA表达水平(0.97±0.02,0.89±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.01±0.03,0.97±0.01,均P＜0.05);LPS刺激24和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达水平(0.95±0.04,0.94±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.07±0.06,1.03±0.05,均P＜0.05).LPS刺激4、8、12和24 h的各时点,siRNA病毒组TNF-α mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(0.92±0.02比0.98 ±-0.01,0.86±0.02比1.00±0.01,0.79±0.03比1.01±0.01,0.78±0.03比1.02±0.01,均P＜0.05).LPS刺激2、4、8、24、36、48、54和72 h的各时点,siRNA病毒组巨噬细胞培养上清液TNF-α含量均明显低于Sramble病毒组(均P＜0.01).结论 针对NF-κB P65的siRNA可抑制NF-κB信号通路的功能活性,进而抑制内毒素刺激引起的巨噬细胞活化和TNF-α释放,提示RNA干扰技术在急性肺损伤早期过度炎症反应的防治中具有潜在应用价值.     

人胚神经干细胞体外免疫原性测定

目的:探讨人胚神经干细胞体外免疫原性情况.方法:取孕14周流产人胚侧脑室下区细胞,进行分离、培养、鉴定.提取人胚神经干细胞和正常人外周血单核细胞中的RNA,采用RT-PCR法反转录,扩增,电泳,观察目的条带.根据外周血单核细胞培养分4组:阴性对照组以外周血单核细胞单独培养,实验组为B、C组分别以103ml-1、105ml-1神经干细胞加入外周血单核细胞中共培养,阳性对照组将植物血凝素以0.1 mg/L加入外周血单核细胞中共培养.用MTT比色法测定刺激后外周血单核细胞增殖能力.结果:RNA反转录后电泳条带显示神经干细胞表达HLA-A、HLA-DRA,MTT比色法细胞活力测定显示:B组、C组D(490 nm)分别为0.4450±0.0265、0.5675±0.0781,C组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),B组、C组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:人胚侧脑室下区的神经干细胞在体外有一定的免疫原性,可促进外周血单核细胞增殖,移植时需注意免疫排斥问题.     

肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤血管生成和转移的研究进展

巨噬细胞起源于血液单核细胞,在不同的刺激因素作用下,巨噬细胞可分化为经典激活的巨噬细胞(M1型)和选择性激活的巨噬细胞(M2型).现在认为,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)具有M2型巨噬细胞表型.TAM在肿瘤中大量浸润被认为是肿瘤患者预后不良的重要标志.TAM通过多种...     

巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素αvβ3表达的影响

目的建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制.方法实验分4组ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304.将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体αvβ3表达的变化.结果ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P＜0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体αvβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P＜0.01).结论ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体αvβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成.     

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的　观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法　采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果　 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论　NDGA可抑制血管生成 ,对肿瘤及其它病理情况下的抗血管生成治疗可能具有重要的应用价值     

益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞VEGF及MMP2表达的影响

目的观察益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2表达的效应。方法制备接种肿瘤细胞的绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）模型,采用血清药理学方法制备益气养阴方含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与9．0g／L氯化钠注射液（normal saline,NS）血清组对照。另外,用U14子宫颈癌细胞悬液经肌肉接种小鼠,观察小鼠实体瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对VEGF和MMP2在肿瘤细胞中的表达进行研究。结果益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与NS组比较差异具有显著性。益气养阴方组肺部转移结节较模型组明显减少,VEGF和MMP2的表达均明显低于对照组,差异有显著性。结论益气养阴方对肿瘤血管形成有明显抑制作用,降低VEGF和MMP2的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。     

重组血管生成抑制因子r—K4K5的分离纯化与功能鉴定

目的 分离纯化r-K4K5,探讨r-K4K5对牛毛血管内皮（BCE）细胞、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC-A1生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r-K4K5,BCE细胞在含r-K4K5的DMEM中培养24、48、72h后分别计数;孵化7d的鸡胚加r-K4K5后继续孵育72h,观察新生血管生成;已经接种入SPC-A1肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠（Balb/c,nu/nu）,瘤旁注射r-K4K5继续饲养,观察肿瘤生长变化。结果 r-K4K5抑制BCE细胞增殖,48～72h作用明显;r-K4K5处理的CAM组中直径小于50um的小血管明显减少;高剂量r-K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r-K4K5能够抑制BCE细胞增殖,抑制鸡胚CAM新生血管生成,抑制实验性人SPC-A1肺腺瘤生长。     

人参皂甙Rg3抑制肿瘤新生血管形成的研究

目的 :探讨人参皂甙 Rg3抗肿瘤生长的作用机制。方法 :利用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)观察 Rg3作用后肿瘤新生血管的生长情况 ,并采用 L ewis肺癌模型进一步探讨 Rg3在体内对肿瘤生长及肿瘤新生血管形成的影响。结果 :Rg3浓度为 0 .1和 0 .5 mm ol/L时 ,CAM血管生长抑制指数分别达 (6 2 .4± 9.3) %和 (4 5 .6± 5 .7) % ,与对照组相比差异非常显著 (P<0 .0 1)。对 L ewis肺癌荷瘤小鼠分别以 5、10、2 0 mg/kg的剂量隔日灌胃一次给予 Rg3,连续 10次 ,2 0 d后观察到 3组的肿瘤瘤质量分别为 (1.77± 0 .2 1)、(1.5 8± 0 .17)及 (1.2 2± 0 .2 9) g,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1) ,生长抑制率分别为 2 3.0 4%、31.30 %和 47.10 % ,同时观察到 Rg3组的新生血管数也明显减少。 结论 :人参皂甙 Rg3可明显抑制 L ewis肺癌的生长 ,其抑瘤作用部分是因为抑制了肿瘤诱导的新生血管形成     

人大肠癌鸡胚尿囊膜移植模型的建立及血管生成特征的观察

目的 研究人大肠癌腺癌细胞株HT-29鸡胚尿囊膜移植模型建立的方法,观察和分析其血管生成的特征.方法 将不同浓度的人大肠癌腺癌细胞株HT-29接种于鸡胚尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM),观察影响大肠癌鸡胚移植模型瘤体成活的因素、瘤体生长特征和血管生成情况.结果 建立了人大肠癌CAM移植模型.移植模型瘤体易于生长,具有较强的血管生成作用.结论 该模型易于复制,能动态观察大肠癌的血管生成过程,可用于大肠癌的生物学行为、药物筛选等领域的研究.     

微环境下肿瘤相关巨噬细胞极化对乳腺癌进展作用*

乳腺癌是女性最为常见、死亡率最高的恶性肿瘤之一。医学技术的进步一定程度上提高了乳腺癌患者的存活率,但后期化疗产生的耐药导致很多患者在短期内复发或转移。肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME ）中肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages,TAMs）对癌细胞的多重影响作用是当前研究的热点。TAMs具有高度可塑性,不同刺激后可极化为经典活化的促炎性巨噬细胞（M1型）和替代活化的免疫抑制巨噬细胞（M2型）,M1和M2型巨噬细胞是TAMs功能表现的两个极端。M2型TAMs和乳腺癌的生长、耐药及预后密切相关,探索促进巨噬细胞向M2方向极化的机制有助于发现乳腺癌新的免疫治疗靶点,选择性控制TAMs亚型转换可能有助于加强化疗效果。本文对极化巨噬细胞的主要功能及其作用机制进行阐述,旨在为乳腺癌的免疫治疗提供新的策略。     

白藜芦醇与半边旗二萜类化合物5F对活体血管生成的影响

目的:观察白藜芦醇(Res)、半边旗二萜类化合物5F(以下简称5F)对活体血管生成的影响。方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验,检测Res和5F对活体血管生成的影响。结果:与对照组相比,Res用药组(11.4μg/egg、45.7μg/egg)的血管生成抑制率分别为(32.2±3.6)%、(53.7±4.2)%,5F用药组(8.3μg/egg、33.2μg/egg)血管生成抑制率分别为(19.7±4.0)%、(36.5±3.0)%。结论:Res和5F可抑制活体血管生成,对肿瘤和其他病理情况下的抗血管治疗可能具有重要应用价值。     

一种新的检测鸡胚尿囊膜血管生成的方法

目的：建立一种利用高铁氰化钾法检测鸡胚尿囊膜（CAM）血管生成的方法.方法：分离发育期鸡胚尿囊膜并将其匀浆,加入高铁氰化钾溶液,用紫外分光光度计测量A值,通过标准品计算样品中血红蛋白的含量.结果：采用该方法测定了发育7及9d的鸡胚尿囊膜血红蛋白含量,以及中等强度静磁场对不同发育阶段新生血管的抑制效应,而且与体视显微镜结果一致.结论：高铁氰化钾法是一种实用的可定量检测鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的实验方法.