柴芩承气汤对急性胰腺炎大鼠腺泡细胞外分泌功能的影响

目的研究柴芩承气汤(CQCQ-D)对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺腺泡细胞外分泌功能和腺泡细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)变化的影响。方法SD大鼠灌喂CQCQ-D以制备柴芩承气汤含药血清(CQCQ-S);SD大鼠分为AP组和假手术组,分离胰腺腺泡细胞并与CQCQ-S共同孵育,观测腺泡细胞淀粉酶分泌水平和[Ca2 ]i变化。结果AP大鼠腺泡细胞淀粉酶分泌水平较假手术组降低(P<0.01),CQCQ-S使AP大鼠腺泡细胞淀粉酶分泌水平进一步降低(P<0.05);[Ca2 ]i随AP病程延长而升高(P<0.05),CQCQ-S可抑制AP大鼠腺泡细胞内[Ca2 ]i升高(P<0.05)。结论CQCQ-D对AP大鼠的胰腺腺泡细胞的外分泌功能和腺泡细胞内钙超载有抑制作用。     

柴芩承气汤减轻急性胰腺炎大鼠胰腺钙超载的机制研究

目的：观察柴芩承气汤（Chaiqinchengqi decoction,CQCQD）对急性胰腺炎大鼠胰腺组织肌浆网钙ATP酶（sarcoendoplasmic reticulum Ca2＋-ATPase,SERCA）mRNA表达的影响。方法：30只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组及CQCQD组。采用蛙皮素腹腔注射法建立急性胰腺炎大鼠模型。逆转录聚合酶链式反应检测胰腺组织SERCA1和SERCA2 mRNA表达的变化;激光共聚焦显微镜检测腺泡细胞内钙离子浓度,并比较各组大鼠胰腺组织病理变化。结果：SERCA1 mRNA在正常胰腺和急性胰腺炎胰腺腺泡细胞均不表达。模型组与正常对照组比较,腺泡细胞SERCA2 mRNA表达下调,表达率为0.536（P=0.001）;CQCQD组与模型组比较,腺泡细胞SERCA2 mRNA的表达上调,表达率为1.803（P=0.035）。模型组大鼠细胞内钙离子的荧光强度高于正常对照组及CQCQD组（P〈0.05）;CQCQD组大鼠胰腺组织的病理评分低于模型组（P〈0.05）。结论：CQCQD可以通过上调SERCA2 mRNA表达,减缓胰腺细胞内钙超载,减轻胰腺组织的病理改变。     

柴芩承气汤对急性胰腺炎大鼠肠道平滑肌细胞三磷酸肌醇的影响

目的探讨柴芩承气汤（CQCQD）对急性坏死性胰腺炎大鼠肠道平滑肌细胞三磷酸肌醇浓度的影响。方法将30只SD大鼠随机分成对照组、急性坏死性胰腺炎（ANP）组及CQCQD组,采用8%左旋精氨酸腹腔注射制作AP大鼠模型。CQCQD组管喂CQCQD,于6h取血清检测乙酰胆碱（Ach）、胆囊收缩素-8（CCK-8）及5-羟基色氨酸（5-HTP）水平,胰腺组织做病理检查,结肠检测平滑肌细胞内三磷酸肌醇（IP3）及Ca2＋浓度变化。结果CQCQD组胰腺病理评分（4±0.7）低于ANP组（7±1.1）（P〈0.05）。CQCQD组血清CCK-8浓度（31.5±6.2）ng/mL低于对照组（44.0±8.1）ng/mL和ANP组（46.0±7.6）ng/mL（P〈0.05）;ANP组血清Ach浓度（236.1±23.6）ng/mL低于对照组（310.0±26.1）ng/mL和CQCQD组（298.5±24.7）ng/mL（P〈0.05）;ANP组肠道平滑肌细胞IP3（16.3±1.1）pg/mL及钙离子浓度（[Ca2＋]i）（108.0±15.5）低于对照组肠道平滑肌细胞IP3（21.9±1.3）pg/mL及[Ca2＋]i（141.2±20.2）和CQCQD组肠道平滑肌细胞IP3（21.6±1.7）pg/mL及[Ca2＋]i（138.8±16.3）（P〈0.05）。结论 ANP存在血清Ach及平滑肌细胞内IP3水平降低,CQCQD可促进ANP大鼠血清Ach水平及平滑肌细胞IP3浓度升高,促进肠道平滑肌细胞钙库释放[Ca2＋]i,但具体作用机制尚需进一步研究。     

柴芩承气汤对急性胰腺炎小鼠血清胆囊收缩素-8水平及胰腺腺泡钙超载的影响

目的 探讨柴芩承气汤(CQCQD)对急性胰腺炎(AP)小鼠血清胆囊收缩素(CCK)-8及胰腺腺泡细胞内钙离子浓度的影响.方法 将24只小鼠随机分成对照组、AP组、CQCQD组及siRNA组（n=6）.后3组采用腹腔内注射8％左旋精氨酸溶液(4 g/kg)制作AP小鼠模型.对照组注射相同剂量的生理盐水.造模成功后,CQC...     

三七总皂甙对大鼠急性胰腺炎腺泡细胞钙超载的调节

目的 探讨三七总皂甙（PNS）对急性重症胰腺炎（SAP）大鼠胰腺腺泡细胞的保护作用及其机制.方法 30只SD大鼠分为假手术组（SO组）、急性重症胰腺炎（SAP）、三七总皂甙预处理组（PNS组）.采用经肠壁逆行胰胆管注射法建立大鼠急性重症胰腺炎模型,SO组进腹后仅翻动胰腺和十二指肠后关腹,不注入牛磺胆酸钠.其中PNS组模型建立后立即予以腹腔注射三七总皂甙（50 mg/mL血塞通注射液（0.1 mL/100 g）,假手术组（SO组）、急性重症胰腺炎（SAP）组建模后注射生理盐水（0.1 mL/100g）.建模4h后检测大鼠血清淀粉酶AMS、胰腺病理学变化了解胰腺炎的发病阶段.处死大鼠后取胰腺组织,采用钙荧光指示剂Fluo-3-AM作用腺泡细胞,在荧光显微镜下观察胰腺腺泡细胞荧光强度.使用流式细胞仪定量分析、计算出单个腺泡细胞内荧光强度（fluorescent intensity,FI）的平均值,荧光强度值可以表示细胞内钙离子的浓度.结果 PNS和SAP两组大鼠血清AMS水平均显著增高（P＜0.05）,SAP组大鼠血清AMS水平显著高过PNS组（P＜0.05）.PNS和SAP两组大鼠胰腺组织病理学评分水平均显著增高（P＜0.05）.PNS组大鼠胰腺组织病理学评分显著低于SAP组（P＜0.05）.通过流式细胞仪检测钙离子浓度提示：SO组、SAP组、PNS组三组胰腺细胞内[Ca2＋]i的荧光强度具有统计学差异.SAP组和PNS组较SO组大鼠胰腺细胞内[Ca2＋]i的荧光强度均有显著升高（P＜0.05）.与SAP组相比,PNS组大鼠胰腺细胞内[Ca2＋]i的荧光强度均有显著降低（P＜0.05）.结论 SAP的发生与细胞钙超载有关,并且钙超载程度越高,SAP的病情越重.PNS可以减轻胰腺细胞内钙超载,可以减轻胰腺组织病理学改变。     

柴芩承气汤对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺核因子-κB活化的影响

目的：通过观察柴芩承气汤（Chaiqin Chengqi Decoction,CQCQD）对急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）大鼠的作用,探讨其治疗机制。方法：将30只SD大鼠随机分成3组：假手术（sham-operated,SO）组、ANP组和CQCQD治疗组。大鼠胆总管内逆向泵入3.5%牛胆酸溶液制备ANP模型。6h后分别行腹腔静脉采血送检,取胰腺组织做病理切片;酶标记免疫吸附测定法检测血浆肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）;HE染色光学显微镜观察胰腺组织病理情况;免疫组织化学染色SP法检测胰腺核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的活化。结果：ANP组白细胞（white blood cell,WBC）计数和血清淀粉酶（amylase,AMY）值较SO组明显升高（P〈0.05,P〈0.01）,CQCQD组血清WBC计数和AMY水平均较ANP组有所下降（P〈0.05）。ANP组的水肿、炎症浸润、出血、坏死和总积分情况较SO组严重（P〈0.01）;CQCQD组的水肿、炎症浸润、出血和总积分水平均较ANP组降低（P〈0.05）。CQCQD组胰腺NF-κB p65阳性细胞的积分光密度（integraloptical density,IOD）值低于ANP组（P〈0.05）。结论：CQCQD可减少血清TNF-α及IL-6含量,降低胰腺NF-κB的活性,减轻胰腺病理损害。     

大承气汤诱导实验性急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的研究

目的：观察大承气汤对实验性急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法：36只雄性SD大鼠随机分入12h和24h时间点假手术组、模型组和治疗组,每组6只;其中24只逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠建立急性胰腺炎模型,12只为假手术组。治疗组予大承气汤喷雾干燥颗粒20g/kg灌胃治疗一次,模型组和假手术组给予等量的生理盐水。给药后12h和24h,断头处死取血及胰腺组织,检测胰腺组织中一氧化氮（nitric oxide,NO）含量和诱生型一氧化氮合成酶（inducible NOsynthetase,i NOS）的活性,原位缺口末端标记法检测胰腺组织细胞凋亡率,并观察胰腺组织病理积分。结果：与模型组比较,治疗组两个时间点的血清淀粉酶活性显著降低（P〈0.05）,胰腺组织内NO含量和i NOS活性明显升高（P〈0.05）;治疗组大鼠的胰腺腺泡细胞凋亡指数增加,伴随胰腺组织病理学积分的降低（P〈0.05）。结论：大承气汤可诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡而改善胰腺病理改变,其机制可能与增加胰腺组织NO含量有关。     

P物质对大鼠垂体前叶细胞内Ca2+浓度的影响

目的研究P物质（SP）对大鼠垂体前叶（AP）培养细胞内Ca^2＋的影响,进而阐述SP的作用机制。方法原代培养成年雌性S-D大鼠的AP细胞48h后,加入不同浓度的SP孵育30min,采用Fura-2/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的AP细胞,结合阳离子测定系统检测AP细胞[Ca^2＋]i。结果孵育时间为30min时,SP使AP细胞内Ca^2＋的水平增加,且呈剂量依赖性。结论Fura-2/AM结合阳离子测定系统可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度,SP通过SPR产生的生物学效应可通过第二信使Ca^2＋来完成,在SP对生殖轴（下丘脑-垂体前叶-卵巢/睾丸）调控的理论中进一步证明了第二信使转导途径的作用。     

一种改进的简便经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法

目的:探索一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法,并探讨其对细胞功能的影响.方法:16只SD大鼠随机分成改进方法组和内灌注方法组,戊巴比妥腹腔麻醉后,其中8只按改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中,37℃,CO2孵箱中孵育30 min,过滤获得细胞悬液, Hanks液(不含钙离子)清洗后获得胰腺腺泡细胞,另外8只采用内灌注方法获取胰腺腺泡细胞,然后进行细胞计数、活力测定、纯化鉴定和细胞内钙离子测定.结果:改进方法所获得的胰腺腺泡数量[(5.0±0.7)×106]、纯度[(78±6)%]与内灌注方法所获得的胰腺腺泡数量[(4.7±0.9)×106]、纯度[(79±7)%]比较无统计学意义(P＞0.05),而细胞活力[(93±4)%]显著高于内灌注方法[(84±3)%](P＜0.05),细胞内钙离子浓度(3.62±0.54)显著低于内灌注方法(5.31±0.37)组(P＜0.05).结论:改进方法是一种稳定高效且对细胞活力及功能影响较小的胰腺腺泡细胞分离提纯方法.     

WIN 55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的检测WIN55，212—2对培养的大鼠三叉神经节神经元细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响并探讨其机制。方法以Fura一2／AM为钙探针，用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca^2＋]i的变化。结果WIN55，2122（0．01～10μmol／L）可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i，EC50为0．47μmol／L；用大麻素Ⅰ型受体（CBI受体）阻断剂AM251孵育后，发现10μmol／L的AM251可明显抑制10μmol／L WIN55。212—2对三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i的作用（P〈0．01）。结论WIN55，212—2可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca^2＋]i，该作用可能是由CBI受体所介导。     

胰腺腺泡细胞钙超负荷在诱发大鼠由水肿性向坏死性胰腺炎转变中 …

OBJECTIVE: To investigate the potential of pancreatic acinar cell calcium overload in the conversion of acute edematous pancreatitis (AEP) to necrotizing pancreatitis (ANP). METHODS: Ninety-six Sprague-Dawley rats were randomized in three experimental groups. Sham-operated control (Group I) AEP (Group II) was induced by pancreatic duct ligation and intravenous injection of bombesin (100 micrograms/kg) and secretin (10 micrograms/kg). ANP (Group III) was induced same as group II but with a large dose of dextran 110,000(500 mg/kg) intravenously. Pancreatic acinar cell Ca2+ overload was studied using fluorescent probe Fura2. Cytosolic free Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in isolated pancreatic acinar cells and Ca(2+)-ATPase activity in pancreatic cell plasma membranes were determined 1, 3, 6, 9 h respectively after treatment. RESULTS: The results showed that pancreatic acinar cell [Ca2+]i was elevated at 1 h[(213 +/- 19) nmol/L, P < 0.05] and increased to (464 +/- 29) nmol/L at 6 h(P < 0.05) in rats with ANP, pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity decreased significantly from (29.8 +/- 0.4) nmol.min-1.mgp-1 at 1 h to (18.6 +/- 0.5) nmol.min-1.mgp-1 at 9 h in rats with ANP (P < 0.05). CONCLUSIONS: In ischemia-induced conversion of AEP to ANP, there exists Ca2+ overload in the pancreatic acinar cells. The decreased pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity may be an important reason for acinar cell Ca2+ overload in the development of acute pancreatitis.     

柴芩承气汤对急性胰腺炎大鼠肺泡巨噬细胞PERK基因表达的影响

目的 探讨柴芩承气汤(Chai Qin Cheng Qi decoction,CQCQD)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠肺泡巨噬细胞内质网双链RNA依赖蛋白激酶样ER激酶(PKR-like ER kinase,PERK)mRNA表达的影响.方法 将30只SD大鼠随机分成对照组、AP组及CQCQD组(n=10).AP组采用20%L-精氨酸腹腔注射(2.5 g·kg-1·1h-1×2)制作;CQCQD组分别于第0、2、4 h用CQCQD按0.2 mL/100 g灌胃,对照组采用生理盐水代替CQCQD灌胃,容积及方法与CQCQD组同.于6 h收集胰腺组织行病理检查,肺泡巨噬细胞检测PERK的mRNA表达,血清检测大鼠血清IL-6及TNF-α水平.结果 AP组胰腺组织病理评分(8.8±0.5)分,高于对照组(1.0±0.3)分及CQCQD组(5.4±0.6)分(P<0.05);CQCQD组血清IL-6及TNF-α(48.3±10.7 pg/mL,35.1±14.5 pg/mL)高于对照组(35.1±10.6 pg/mL,21.3±14.2 pg/mL,P<0.05),但低于AP组血清(67.5±13.1 pg/mL,52.1±13.7 pg/mL,P<0.05).与对照组比较,AP组巨噬细胞PERK mRNA表达上调,CQCQD灌胃可下调其表达(P<0.05).结论 CQCQD减少炎性因子释放可能与下调巨噬细胞内质网PERK mRNA表达有关.     

老年大鼠脑细胞内钙的变化

目的:观察老年大鼠脑细胞内钙浓度([Ca2 ]i)的变化.方法:以Fura/AM为荧光指示剂,采用荧光分光光度计测定急性分离大鼠脑[Ca2 ]i.结果:静息状态下老年大鼠脑[Ca2 ]i及对高钾除极化的反应均明显低于青年对照组(P＜0.01),但其增强作用在老年大鼠与青年大鼠间无明显差异(P＞0.05).结论:老年大鼠静息脑[Ca2 ]i降低,但在相同情况下老年大鼠脑细胞内钙超载更加明显,从而较青年大鼠更易发生脑细胞的损害.     

蛋白激酶C调节的1,4,5-三磷酸肌醇受体磷酸化在胆囊收缩素介导的胃窦平滑肌细胞钙动员中的作用

目的研究八肽胆囊收缩素（CCK-8）对大鼠胃窦平滑肌细胞（SMC）胞内钙释放和胞外钙内流的作用及对其具体相关机制的探讨。方法（1）多导生理记录仪记录大鼠离体胃窦肌条在不同条件下的收缩活动;（2）免疫印迹法和免疫沉淀法检测胃窦SMC的三型1,4,5-三磷酸肌醇受体（InsP3113）及其磷酸化水平;（3）Fura-2／AM标记胃窦SMC,观察CCK-8S对胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响;（4）全细胞膜片钳检测胃窦SMC的L-型电压门控钙通道电流（ICa-L）的变化情况。结果（1）CCK-8S作用下胃窦肌条收缩幅值和频率改变明显[增长率分别为（62±13）％和（58±17）％,均P〈0．01],可被CCK-A受体拮抗剂和钙泵抑制剂所阻断;（2）蛋白激酶C（PKC）上调InsP3R3磷酸化水平,抑制CCK-8S介导的内钙释放;（3）CCK-8S引起的[Ca^2＋]i显著升高[从（69±7）mol／L升至（472±36）nmol／L,P〈0．01]分别可被CCK-A受体或胞内钙泵抑制剂和PKC激动剂所阻断;去除外钙或给予L-型钙通道阻滞剂时CCK-8S仍可引起[Ca^2＋]i升高;（4）CCK-8S显著增强胃窦SMC的IICa-t。[从（-56±7）pA升至（-89±6）pA,P〈0．01],可分别被ICa-L阻滞剂、胞内钙泵抑制剂和钙依赖性氯通道阻滞剂所阻断。结论CCK-8S引起的大鼠胃窦SMC的[Ca^2＋]i升高依赖于PKC介导的InsP3R3磷酸化作用调节下的细胞内钙离子释放。胞内钙释放可激活ICl-Ca,引起细胞膜去极化而活化ICa-L引起胞外钙内流,最终引起SMC收缩效应。     

抑制线粒体钙单向转运体对大鼠急性胰腺炎氧化应激的作用研究

目的 探讨抑制线粒体钙单向转运体（MCU）减弱线粒体钙超载对雨蛙肽诱导的大鼠急性胰腺炎（AP）及胰腺氧化应激的影响。方法 将32只雄性SD大鼠分为对照组、急性胰腺炎组（AP组）、急性胰腺炎+钌红干预组（AP+RR组）、钌红组（RR组）,每组8只。模型复制24 h后处置大鼠,检测各组大鼠血清淀粉酶（Amy）、脂肪酶（Lipase）、白细胞介素6（IL-6）水平,HE染色观察胰腺组织病理改变;倒置荧光显微镜下观察腺泡细胞活性氧（ROS）、线粒体内Ca²⁺、胞内游离Ca²⁺荧光强度;检测胰腺组织还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量;Western blotting检测胰腺组织MCU、沉默信息调节因子3（SIRT3）、MnSOD蛋白的表达;透射电镜观察腺泡细胞超微结构。结果 各组大鼠胰腺HE评分和血清Amy、Lipase、IL-6水平比较,经方差分析,差异有统计学意义（P <0.05）,AP组较对照组高（P <0.05）。AP组MCU相对表达量,线粒体内Ca²⁺、胞内游离Ca²⁺浓度高于对照组、RR组（P <0.05）,AP+RR干预组低于AP组（P <0.05）。AP组MnSOD、SIRT3、GSH低于对照组（P <0.05）,ROS、MDA高于对照组（P <0.05）,与AP组比较,AP+RR干预组ROS、MDA低于AP组（P <0.05）,MnSOD、SIRT3、GSH高于AP组（P <0.05）。结论 抑制MCU可减弱腺泡钙超载,同时可能通过调节SIRT3/MnSOD途径改善雨蛙肽诱导的AP氧化应激,但对胰腺组织病理学和生化指标无明显改变。