TBBPA-DHEE暴露对斑马鱼的神经毒性及机制研究

目的: 研究四溴双酚A双（2-羟基乙基）醚［TBBPA bis（2-hydroxyetyl） ether,TBBPA-DHEE］对斑马鱼胚胎的神经系统影响及其机制。方法: 将斑马鱼胚胎随机分为5组,分别为空白对照组、二甲基亚砜组、TBBPA-DHEE不同剂量组（0.086、0.860、8.600 mg/L）,暴露5 d,观察其死亡率、孵化率、畸形率、心跳频率及体长;通过行为学实验分析胚胎自主运动情况及明暗刺激下仔鱼的游泳距离及累计持续移动时间;采用试剂盒检测仔鱼体内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活力及丙二醛含量,检测Ca²⁺与γ-氨基丁酸含量;采用实时荧光定量PCR法测定Ca²⁺信号通路相关mRNA表达。结果: （1） TBBPA-DHEE暴露显著增加斑马鱼胚胎/仔鱼的死亡率和畸形率;抑制其孵化;导致斑马鱼心跳频率和体长显著下降。(2） TBBPA-DHEE暴露显著降低斑马鱼胚胎自主运动次数;0.860和8.600 mg/L TBBPA DHEE暴露显著降低黑暗条件下仔鱼游泳距离及累计持续移动时间。（3） TBBPA-DHEE暴露显著升高斑马鱼仔鱼体内SOD、GPx活力及丙二醛含量,诱导Ca²⁺含量上升且显著抑制γ-氨基丁酸含量。（4） TBBPA-DHEE暴露显著上调Ca²⁺信号通路中Cacna1ab、Atp2a1、Atp2a1l、Camk1ga、Ppp3ca、Plcd3a和Prkca mRNA表达。结论: TBBPA-DHEE可对斑马鱼胚胎产生神经毒性,可能通过增强内源抗氧化酶活性、诱导Ca²⁺信号通路相关mRNA表达等起作用。     

细辛脑对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响

目的：研究细辛脑对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响。方法以受精后3h（hpf）斑马鱼胚胎为实验模型,分别暴露于不同浓度（25、50、100、200和400μmol/L）细辛脑溶液中,以不加细辛脑为对照组,每隔24 h更换1次细辛脑溶液,分别在24、48、72和96 hpf等时间点用显微镜观察班马鱼胚胎发育形态,记录24 hpf胚胎自主抽动次数,48 hpf心率、畸形率和死亡率,72和96 hpf孵化率和死亡率,利用RT-qPCR检测96 hpf斑马鱼胚胎Sepn1基因表达情况,采用Noldus斑马鱼幼鱼行为视频跟踪系统评价细辛脑暴露对幼鱼运动行为的影响。结果细辛脑各实验组斑马鱼胚胎自主抽动次数随浓度增加而降低,100、200和400μmol/L组与对照组相比有极显著性统计学差异（P＜0.01）;细辛脑各实验组斑马鱼48 hpf心率显著降低,与对照组相比均有显著统计学差异（P＜0.01）;72和96 hpf斑马鱼幼鱼出现了脊柱弯曲、心包水肿、卵黄囊水肿等畸形形态;与对照组相比,100、200和400μmol/L组96 hpf孵化率均下降,具有显著性统计学差异（P＜0.01）;与对照组相比,400μmol/L组死亡率降低,有统计学差异（P＜0.05）;随着细辛脑浓度增加,96 hpf斑马鱼幼鱼运动速度和距离明显减小,200和400μmol/L组与对照组相比均有统计学差异（P＜0.05）;同时200和400μmol/L浓度组活跃度降低,与对照组相比具有显著差异（P＜0.01）;96 hpf时,细辛脑各浓度组胚胎Sepn1基因表达下降,其中100μmol/L组与对照组相比有统计学差异（P＜0.05）,而200和400μmol/L组与对照组相比差异更显著（P＜0.01）。结论细辛脑对斑马鱼胚胎和幼鱼有致畸作用,并且影响其运动行为,建议婴幼儿慎用细辛脑。     

莪术醇对人胃癌细胞凋亡、MMP2、NO影响的初步探讨

目的初步探讨莪术醇（Curcumol）对人胃腺癌细胞（SGC-7901细胞）凋亡、基质金属蛋白酶（MMP2）、一氧化氮（NO）的影响。方法将莪术醇溶于无水乙醇中,初始浓度为9 mg/mL,设实验1、2、3、4、5组,莪术醇的浓度分别是7.5、15、30、60、120μg/mL,并以含1%无水乙醇的培养液为对照组。采用台盼蓝（Trypan blue）、噻唑蓝（MTT）法检测SGC-7901细胞的活性及莪术醇对SGC-7901细胞抑制增殖的影响;用流式细胞仪（FACSCalibur）检测莪术醇对SGC-7901细胞的凋亡率;用蛋白质印迹法检测莪术醇作用于SGC-7901细胞后,其MMP2的表达情况;NO试剂盒检测莪术醇作用SGC-7901细胞后的细胞培养液上清的NO含量。结果 30μg/mL的莪术醇在药物浓度与抑制肿瘤生长方面效果较佳,与对照组比较,其抑制肿瘤细胞增殖差异有统计学意义（P〈0.05）;莪术醇实验组能促进细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;莪术醇实验组作用细胞后,其MMP2蛋白表达明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;实验研究表明,随着莪术醇实验组浓度的增加,其细胞培养液上清中的NO含量逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 30μg/mL的莪术醇浓度是最佳药效组,它能显著抑制SGC-7901细胞的增殖,明显促进肿瘤的细胞凋亡,显著抑制MMP2的表达,降低细胞培养液上清中的NO含量,从而发挥系列抗肿瘤作用。本研究从细胞分子水平探讨莪术醇治疗胃癌可能存在的部分机制,为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与试验依据。     

吉非替尼对斑马鱼胚胎发育及肿瘤耐药基因表达的影响

目的 研究吉非替尼对斑马鱼早期胚胎发育及abcb4肿瘤耐药基因表达的影响.方法 实验动物采用斑马鱼,实验分为吉非替尼组、阿霉素和吉非替尼的混合液组、空白对照组.将吉非替尼稀释成不同浓度梯度的药液,分别处理受精后0.5～1.5 h(0.5～1.5 hpf)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率及畸形率变化.统计各浓度不同时间点的胚胎死亡率,计算出IC50的数值;统计48 hpf和72 hpf的胚胎孵化率及120 hpf的畸形率;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量.结果 计算出吉非替尼在斑马鱼胚胎中的IC50为16.18 μmol/L.与对照组比较,高剂量吉非替尼(≥20 μmol/L)显著抑制胚胎的孵化,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应;吉非替尼组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平变化不显著,而阿霉素和吉非替尼的混合液组的abcb4基因的mRNA水平有明显变化(P＜0.05).结论 吉非替尼对斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平无明显影响(P＞0.05),但是吉非替尼能逆转易耐药药物阿霉素的耐药作用,提示使用斑马鱼可以构建肿瘤耐药模型.     

莪术醇联合氟尿嘧啶对裸鼠胃癌移植瘤生长、增殖细胞核抗原和P27表达的影响

目的  观察莪术醇联合氟尿嘧啶对胃癌裸鼠皮下移植瘤的影响。方法  将人胃癌细胞株BGC823接种于裸鼠皮下建立荷瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分为对照组、莪术醇组、氟尿嘧啶组、联合用药组（莪术醇联合氟尿嘧啶）,记录各组的肿瘤体积和瘤重。应用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和免疫组织化学法检测各组肿瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）、P27的表达。结果  对照组肿瘤体积和重量比其他3组升高（P <0.05）;联合用药组肿瘤体积和重量低于莪术醇组（P <0.05）;联合用药组肿瘤体积和重量与氟尿嘧啶组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。各实验组肿瘤组织中PCNA的表达均低于对照组（P <0.05）;与莪术醇组和氟尿嘧啶组比较,联合用药组PCNA的表达降低（P <0.05）。各实验组移植瘤组织中P27的表达均高于对照组（P <0.05）;与莪术醇组比较,联合用药组P27的表达增强（P <0.05）;与氟尿嘧啶组比较,联合用药组P27 mRNA的相对表达有升高趋势,但差异无统计学意义（P >0.05）。与莪术醇组和氟尿嘧啶组比较,联合用药组P27蛋白阳性率升高（P <0.05）。结论  莪术醇联合氟尿嘧啶能抑制胃癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与调节PCNA、P27基因有关。

     

2,4-二氯苯氧乙酸对斑马鱼造血干细胞的影响

目的 观察2,4-二氯苯氧乙酸对斑马鱼胚胎的急性毒性和造血干细胞发育的影响。方法 野生型斑马鱼胚胎暴露于2,4-D水溶液中,RT-PCR测定2,4-D暴露后斑马鱼胚胎cmyb基因表达水平,cmyb探针原位杂交和cmyb： eGFP转基因鱼系观察2,4-D暴露后斑马鱼胚胎造血干细胞的发育水平。 结果 急性毒性试验显示,5、10mg/L 2,4-D组胚胎的死亡率随着暴露时间延长,胚胎死亡率维持在8%,而20mg/L 2,4-D组胚胎的死亡率随着暴露时间延长,胚胎死亡率逐渐上升,至96h时胚胎全部死亡。受精后48、72h暴露组胚胎孵化率随着暴露浓度增加而减少,并呈现一定的剂量效应关系,受精72h的LC50为16.3mg/L,95%的可信区间为（13.2mg/L,21.3mg/L）。与对照组相比,受精后48h 10mg/L 2,4-D组（t=13.11,P<0.001）和受精后72h 10mg/L 2,4-D（t=7.176,P<0.001）组胚胎造血干细胞数量减少,受精后48h 10mg/L 2,4-D组胚胎的造血干细胞标记基因cmyb(t=28.98,P<0.001)和原始红系祖细胞标记性基因gata1(t=13.60,P<0.001)表达量明显降低。结论 2,4-D可能通过影响cmyb基因的表达导致斑马鱼胚胎造血干细胞发育毒性。     

莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的研究莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法用MTT法测定莪术醇对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测莪术醇对SGC7—901细胞周期和细胞凋亡的影响。结果10、30、100μg／mL莪术醇均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;莪术醇能使S和G2／M期肿瘤细胞比例减少,G0／G1期肿瘤细胞比例增加,其中100μg／mL浓度的莪术醇作用最强（F=88．14,P〈0．01）;莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,其中100μg/mL浓度的莪术醇凋亡作用最强（F=34．14,P〈0．01）。结论莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,     

米索前列醇不同给药方式对剖宫产产后出血的影响

目的探讨米索前列醇不同给药方式对剖宫产产后出血的影响。方法回顾性分析2011年11月-2012年11月在我院住院分娩的168例剖宫产产妇的临床资料,观察直肠给药（直肠组）与口服给药（口服组）产妇产后出血量及不良反应情况。结果直肠组产妇产后2h出血量明显低于口服组（P〈0.05）;两组产妇产后24h出血量比较无显著差异（P〉0.05）;两组产妇产后出血发生率比较无显著差异（P〉0.05）;口服组不良反应发生率明显高于直肠组（P〈0.05）。结论米索前列醇治疗剖宫产产后出血安全、有效,经直肠给药疗效更佳。     

体外受精时程和胚胎培养方式对小鼠早期胚胎发育潜能的影响

目的 探讨体外受精时程、培养基体积以及单胚胎或多胚胎培养对小鼠早期胚胎发育潜能的影响。方法 根据体外受精时间长短的不同，将受精时程分为2组，一组精子和卵子共孵育的时间为2h（A组），另一组精子和卵子共孵育的时间为18h（B组）；根据培养基体积及培养胚胎数目的不同，将胚胎培养方式分为6组：100μl培养基＋1枚胚胎（组1），100μl培养基＋3枚胚胎（组2），50μl培养基＋1枚胚胎（组3），50μl培养基＋3枚胚胎（组4），20μl培养基＋1枚胚胎（组5），20μl培养基＋3枚胚胎（组6）。结果 ①A组的优质胚胎率和囊胚形成率均明显高于B组（P〈0.05）；②组6的优质胚胎率和囊胚形成率显著高于组1、组2和组3（P〈0.01），组4的囊胚形成率明显高于组1和组2（P〈0.05），组5的囊胚形成率明显高于组1、组2和组3（分别为P〈0.01，P〈0.05）。结论 缩短受精时间、减少培养基体积以及多胚胎群体培养有利于小鼠早期胚胎的发育。     

慢性疲劳综合征患者自主神经功能昼夜节律特点研究

目的：探讨慢性疲劳综合征（CFS）的心率（HR）、心率变异性（HRV）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和皮肤交感反应（SSR）等自主神经功能的昼夜节律特点。方法：9例符合美国疾病控制中心1994年诊断标准的CFS受试者和10例年龄、性别和体重相当的健康受试者纳入研究。受试者先进入时间医学测试室适应1天,于第二天清晨8：00开始进行24 h动态检测HR、HRV、SBP、DBP和SSR。结果：①CFS受试者24 hHR的节律振幅缩小（P〉0.05）,随时相变化的趋势与健康组不同（P〈0.05）,HRV的SDNN、SDANN较健康组显著减小（P〈0.05）。②CFS受试者24 h SBP随时相变化的趋势与健康组不同（P〈0.05）。③CFS受试者上下肢SSR、在每个检测时间点的均值、24 h均值、随时相的变化趋势与健康组未见显著性差异（P〉0.05）。结论：CFS可能存在心率超日节律,其原因可能是迷走神经对心率调控的时域变异性和自主神经调控的整体心率变异性显著降低。     

乌饭树叶不同萃取物改善大鼠精神疲劳作用的研究

目的：比较不同萃取方法获得的乌饭树叶萃取物改善大鼠精神疲劳的效果。方法：将84只SD大鼠分为正常对照组（Ⅰ组）、阴性对照组（Ⅱ组）、红景天苷阳性对照组（Ⅲ组）、水萃取物组（Ⅳ组）、氯仿萃取物组（Ⅴ组）、乙酸乙酯萃取物组（Ⅵ组）及正丁醇萃取物组（Ⅶ组）,每组12只,测定大鼠自发活动度、空间记忆力及负重游泳时间。结果：与阴性对照组比较,阳性对照组及各萃取物组的自发活动次数均显著增多（P〈0.05）,阳性对照组、水及氯仿萃取物组的空间记忆能力得到显著改善（P〈0.01）,阳性对照组及水萃取物组的负重游泳时间显著延长（P〈0.05）。结论：乌饭树叶醇提物的水相萃取物含有较多抗精神疲劳活性成分,可显著改善大鼠精神疲劳。     

替罗非班对ST段抬高AMI患者PCI后心肌灌注及心肌损伤的影响

目的：观察使用替罗非班对ST段抬高心肌梗死患者（AMI）冠状动脉介入术（PCI）后心肌灌注及心肌损伤的影响。方法：首次因急性ST段抬高AMI行急诊PCI治疗的76例患者,随机分为对照组38例,试验组（替罗非班）38例。试验组于PCI术前开始给予盐酸替罗非班,观察对照组和试验组PCI术后15min校正的TIMI帧数计数（CTFC）和进行冠状动脉血流速度测定,并比较发病就诊时,PCI术后6h,12h的cTnT,CK-MB水平;记录住院期间主要心血管事件（MACE）发生率。结果：试验组CTFC和冠状动脉血流速度同对照组比较明显改善（P〈0.05）,两组患者术前cTnT和CK-MB水平相比无统计学差异,在术后6h及12h试验组cTnT和CK-MB水平均较对照组明显降低（P〈0.05）。试验组患者中发生1例顽固性心肌缺血;而对照组新发心肌梗死和顽固性心肌缺血各有1例。结论：在ST段抬高AMI行PCI治疗时应用替罗非班,可明显改善心肌再灌注,减少心肌损伤的发生,同时改善PCI术后患者MACE发生率。     

大鼠左心室插管术的改进方法及心气虚证模型大鼠左心功能指标的测定

目的:观察采用改进的大鼠左心室插管术制作心气虚证大鼠模型的可行性。方法:40只雄性SD大鼠随机分成2组,空白对照组和模型组。采用控食、负重强迫游泳及大剂量普萘洛尔等复合因素建立SD大鼠心气虚证模型,RM6240BD多道生物信号采集处理系统检测心功能相关指标。结果:①经改进大鼠左心室插管术,成功率明显提高。②与空白对照组比较,模型组大鼠最大心室内压、左心室收缩压(LVSP)、平均心室内压、心率(HR)等指标均降低(P<0.01),左心室内压最大上升速率(+dp/dtma)x、左心室内压最大下降速率(-dp/dtma)x及t-dp/dtmax均升高(P<0.05,P<0.01)。结论:大鼠左心室插管术的改进方法成功率提高,心气虚证模型大鼠心功能指标改变明显。     

复方扶芳藤合剂对心衰患者的心功能及生活质量的影响

目的：观察复方扶芳藤合剂对慢性心力衰竭（CHF）患者的心功能和生活质量的影响。方法：将72例CHF患者随机分为对照组和观察组,对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗基础上加用复方扶芳藤合剂,疗程1个月,观察两组治疗前后（NYHA）心功能分级、6min步行试验（6MWT）距离和心率变化,记录治疗前后Lee氏心衰计分、明尼苏达心衰生活质量调查表评分（MLHF）。结果：观察组心功能分级疗效总有效率、Lee氏心衰疗效总有效率优于对照组（P＜0．05）;治疗后心率和生活质量评分均低于对照组（P〈0．05）;治疗后6MWT距离高于对照组（P〈0．05）。结论：在常规西医治疗基础上联合应用复方扶芳藤合剂可以进一步改善慢性心力衰竭患者的心功能和生活质量。     

红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤保护作用的机制。方法：32只昆明种雄性小鼠按体质量随机分为正常对照组、红景天苷组、运动组及红景天苷＋运动组。红景天苷组及红景天苷牟运动组小鼠予红景天苷180mg／（kg·d）灌胃给药,正常对照组及运动组予相同体积[0．02mL／（g·d）]蒸馏水灌胃,连续灌胃15d。末次给药后30min,运动组及红景天苷＋运动组小鼠无负重游泳120min。游泳后立即取材,全自动生化仪检测血浆乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）及肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase—myocardial band isoenzyme,CK—MB）活性;采用试剂盒检测肝组织匀浆中过氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH—Px）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;电子显微镜观察心肌和骨骼肌超微结构变化。结果：与不运动比较,长时间运动可明显提高小鼠血浆LDH、CK、CK—MB活性（P〈0．01,P〈0．05）,而红景天苷可降低小鼠血浆CK及CK—MB活性（P〈0．05,P〈0．01）;红景天苷与长时间运动有交互作用,红景天苷可拮抗长时间运动导致的血浆LDH、CK及CK—MB活性升高（P〈0．05）。与不运动比较,长时间运动可显著降低小鼠血浆SOD及GSH—Px活性（P〈0．01）,升高小鼠血浆MDA含量（P〈0．01）;红景天苷可明显升高小鼠血浆SOD及GSH—Px活性（P〈0．01,P〈0．05）,显著降低小鼠血浆MDA含量（P〈0．01）;红景天苷可拮抗长时间运动导致的小鼠血浆SOD活性降低（P〈0．05）。电子显微镜结果表明长时间耐力运动后骨骼肌和心肌出现明显的损伤,运动组小鼠骨骼肌及心肌超微结构损伤较红景天苷＋运动组明显。结论：红景天苷对运动所导致的氧化损伤具有一定的保护作用。     

胍流对高脂血症大鼠肠系膜微循环的影响

目的：研究药物肤流对高脂血症大鼠肠系膜微循环血流状态的影响。方法：Wistar大鼠随机分为对照组、高脂血症组和服流组，每组8只。对照组大鼠给予基础饲料喂养；高脂血症大鼠给予高脂肪饲料喂养，时间为16周；胍流组大鼠给予高脂饲料喂养的同时，灌胃给予肤流，共16周。在第16周末观察大鼠肠系膜微循环状态，测定肠系膜微静脉内白细胞粘附率、平均血流速度。结果：与对照组比较，高脂大鼠肠系膜微静脉血管内白细胞粘附率明显升高（P〈0．01），微静脉血流平均速度明显降低（P〈0．05）；而胍流组大鼠白细胞粘附率相对于高脂组明显降低（P〈0．05），血流速度明显升高（P〈0．05）。结论：脓流能够有效地减少高脂血症大鼠肠系膜微静脉血管内白细胞粘附数量，提高微静脉内血流速度。     

血栓通联合硝酸酯类药物治疗冠心病心绞痛的疗效观察

目的：观察血栓通联合硝酸甘油治疗冠心病心绞痛的临床疗效。方法：选择冠心病心绞痛患者100例,随机分为治疗组（50例）和对照组（50例）。对照组患者仅应用硝酸甘油注射液10mg,每日一次;治疗组患者在应用硝酸甘油的同时加用注射用血栓通500mg,每日一次静点;两组疗程均为3周。观察两组患者的临床症状疗效、心电图疗效和血液流变学指标。结果：治疗组患者的临床症状疗效和心电图疗效总有效率分别为96．00％和80．00％,均明显高于对照组（P〈0．05,P〈0．01）,治疗组患者血液流变学血指标的改善情况明显优于对照组（P〈0．05）。结论：血栓通与硝酸酯类静脉制剂联合治疗冠心病心绞痛疗效显著。     

磷酸肌酸钠用于心脏瓣膜置换患者的临床观察

目的观察磷酸肌酸钠对心脏瓣膜置换患者血流动力学、心肌肌钙蛋白I（CTnI）、心脏复跳方式和血管活性药使用情况的影响。方法择期体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）下行心脏瓣膜置换患者40例,年龄32～60岁,美国麻醉医师协会（American Society of Anesthesiologists,ASA）分级Ⅱ～Ⅲ级,随机分为两组（n=20）：对照组（A组）和磷酸肌酸钠组（B组）,B组在入室后和心脏停搏液中给予磷酸肌酸钠,A组给予等量生理盐水。分别于麻醉前即刻（T1）、转机前即刻（T2）、停机后即刻（T3）、手术结束（T4）各时点记录平均动脉压（MAP）和心率（HR）。于给予磷酸肌酸钠前即刻（T0）,T3、T4和术后24h（T5）抽静脉血测CTnI含量。同时记录心脏复跳方式及血管活性药使用情况。结果两组间MAP和HR在T1～T4各时点无明显差别,组内CTnI在T3～5各时点较T0明显升高（P〈0.01）。与A组相比,B组CTnI在T3～T5各时点明显降低（P〈0.01）,心脏自动复跳率明显升高（P〈0.05）,术毕多巴胺用量大于6μg/（kg.min）者明显减少（P〈0.05）。结论磷酸肌酸钠对心脏瓣膜置换患者有良好的心肌保护作用。