丝裂霉素诱导人膀胱癌细胞凋亡的研究

为进一步探讨丝裂霉素膀胱内灌注治疗膀胱肿瘤的机制，研究丝裂霉素诱导人膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞凋亡的规律，形态学观察具有典型凋亡征象，胞浆浓缩，染色质凝集，核固缩，裂解及凋亡小体。凋亡指数与诱导时间呈正相关（Ｐ〈０．０１）；流失细胞仪ＤＮＡ直方图上出现特征性的亚二倍体（亚Ｇ１）峰，凋亡过程中伴Ｂｃｌ－２基因的下调，且与诱导时间呈负相关（Ｐ〈０．０１），提示丝裂霉素诱导癌细胞凋亡是腔内化疗的重要机制，降     

丝裂霉素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的研究

目的:研究丝裂霉素对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法:在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的丝裂霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果:在丝裂霉素作用下,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高,分别与对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05);同时,S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升。结论:丝裂霉素可诱导胆囊癌细胞发生凋亡,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制。     

丝裂霉素和表柔比星诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的体外实验研究

目的:探讨丝裂霉素和表柔比星诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的机制。方法:采用MTT法、流式细胞术以及光镜和透射电子显微镜技术,研究不同浓度的丝裂霉素和表柔比星对人膀胱癌T24细胞的抑制作用。结果:丝裂霉素和表柔比星均可抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,且两药的抑制效应均随着药物浓度的增大而增强。当浓度为100mg/L时,两药对T24细胞增殖的抑制率分别为90.1%、95.6%,G1期前出现明显的凋亡峰,可见胞内空泡形成、核染色质凝聚等典型细胞凋亡特征。结论:丝裂霉素和表柔比星具有抑制人膀胱癌T24细胞生长和诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的作用,此种作用与药物浓度呈依赖关系,亦可能是两药拮抗肿瘤的主要机制。     

阿霉素诱导人膀胱癌多重抗药性细胞凋亡的研究

目的：研究阿霉素诱导的细胞凋亡，探讨人膀胱癌多重抗药性机制。方法：用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、光镜及电镜、ＤＮＡ凝胶电泳和原位ＤＮＡ末端转移酶标记法，分别对耐药细胞株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及敏感细胞株ＢＩＵ－８７细胞进行了阿霉素诱导的细胞凋亡研究。结果：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞存活率明显高于ＢＩＵ－８７细胞，光镜及电镜观察到凋亡细胞形态学改变，凋亡细胞ＤＮＡ凝胶电泳出现ＤＮＡ断片，但并无典型的梯形改变，Ｂ     

羟基喜树碱诱导人T24膀胱癌细胞凋亡的研究

目的研究羟基喜树碱对膀胱癌细胞的作用,探讨其抑制膀胱癌的机制。方法将不同浓度的羟基喜树碱作用于人Ｔ２４膀胱癌细胞,利用流式细胞仪、透射电子显微镜、荧光染色技术及ＤＮＡ分析,对所作用的Ｔ２４细胞进行动态分析以及细胞形态变化的观察。结果０．００５ｍｇ／Ｌ的羟基喜树碱,主要是通过阻止Ｔ２４细胞由Ｓ期进入Ｇ２／Ｍ期,并不诱导人Ｔ２４膀胱癌细胞的凋亡;０．０１～０．１０ｍｇ／Ｌ时,凋亡的细胞数随着其浓度增加及作用时间的延长而增加。羟基喜树碱能够诱导人Ｔ２４膀胱癌细胞的凋亡。结论羟基喜树碱作用机制之一是诱导人Ｔ２４膀胱癌细胞的凋亡。     

转染Livin基因对膀胱癌细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡抑制基因Livin对膀胱癌细胞凋亡的影响.方法 采用脂质体转染法将Livin基因转入膀胱癌T24细胞系,经G418筛选后获得稳定表达Livin的亚克隆细胞系T24/Livin+及仅转染载体的T24/pcDNA3.1(+).用丝裂霉素C(MMC)分别作用于转染前后的膀胱癌细胞系,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测转染前后细胞生长抑制率,应用流式细胞仪(FCM)及吖啶橙(AO)染色检测细胞凋亡.结果 成功建立了稳定表达Livin的亚克隆细胞系T24/Livin+;经MMC作用24 h后,T24/pcDNA3.1(+)细胞与T24的细胞凋亡率分别为(21.4±2.3)%和(19.6±2.3)%,而T24/Livin+的细胞凋亡率则为(8.7±1.5)%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Livin基因提高了T24膀胱癌细胞的抗凋亡能力,特别是在膀胱癌化疗中显示出更强的抗凋亡能力.     

5-氟脲嘧啶、丝裂霉素和表阿霉素诱导人胃癌细胞凋亡的体外研究

目的了解5-氟脲嘧啶、丝裂霉素和表阿霉素分别及联合对人胃癌MGC－803细胞凋亡的诱导作用。方法用一定剂量的5-氟脲嘧啶。丝裂霉素和表阿霉素分别及三药联合与人胃癌细胞株MGC－803共同孵育12h后,应用光镜进行细胞形态学观察。细胞DNA经特异性荧光染色后,用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果人胃癌MGC－803细胞经5-氧脲嘧啶、丝裂霉素和表阿霉素作用后,出现典型的细胞凋亡形态学改变,定量分析凋亡细胞发生率分别为10．2％、9．1％和9．7％,而三药联合作用后凋亡细胞的发生率为21．4％。结论5-氟脲嘧啶、丝裂霉素和表阿霉素可诱导人胃癌细胞林凋亡,三药联用可提高凋亡细胞的发生率。     

醋酸棉酚诱导膀胱癌T24细胞凋亡的研究

目的　研究棉酚对膀胱癌T2 4 细胞的抑制作用和诱导凋亡作用 ,探讨其作用机制。方法　将不同浓度的醋酸棉酚作用于人T2 4 膀胱癌细胞 ,利用MTT法检测其有效作用浓度、瑞氏染色、流式细胞仪 ,观察T2 4 细胞的凋亡情况。结果　MTT法测得其IC50 值为 12 6.3 μmol·L-1,浓度为 5 0～ 3 0 0 μmol·L-1的棉酚具有诱导T2 4 细胞凋亡的作用 ,随着药物作用时间的延长凋亡率增加。结论　棉酚抗癌作用机制之一是诱导人T2 4 膀胱癌细胞凋亡     

顺铂通过诱导膀胱癌细胞自噬促进细胞凋亡

目的：研究自噬在顺铂引起膀胱癌细胞凋亡中的作用。方法：以膀胱癌细胞T24为细胞模型,利用透射电镜观察自噬泡形成,荧光显微镜观察转染绿色荧光蛋白和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白（green fluorescent protein and microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein,GFP-LC3）的质粒的荧光聚集情况。应用蛋白质免疫印迹检测LC3-Ⅱ的积累,检测顺铂能否诱导膀胱癌T24细胞发生自噬。此外,蛋白质免疫印迹还被用来检测自噬相关信号通路哺乳动物雷帕霉素受体（mammal target of rapamycin, mTOR）及其下游相对分子质量70 000的核糖体蛋白质S6激酶（70 000 ribosomal protein S6 kinase,P70S6K）的变化,以及凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的切割,之后利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法［ 3-( 4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-( 3-carboxymethoxyphenyl)-2-( 4-sulfophenyl)-2H- tetrazolium, inner salt,MTS］观察在自噬促进剂雷帕霉素（rapamycin）存在与否的情况下顺铂引起的膀胱癌细胞活力变化。本实验还使用了RNA干扰技术敲降LC3表达。结果：电子显微镜显示相比对照组,顺铂可以引起膀胱癌细胞出现大量自噬泡。荧光显微镜观察GFP-LC3聚集程度,顺铂组也明显高于对照组。蛋白质免疫印迹检测LC3的结果发现顺铂组的LC3-Ⅱ含量随时间延长和顺铂浓度增加而明显增加,尤其是在48 h时,50与100 μmol/L顺铂处理下LC3-Ⅱ/Actin（%）的灰度值分别升高了30和44,而mTOR/P70S6K的磷酸化也受到顺铂处理的抑制,在48 h,100 μmol/L顺铂处理下其磷酸化条带几乎完全被抑制。MTS结果发现顺铂可导致细胞活力的丢失,在50和100 μmol/L顺铂处理24 h时分别下降了12%和35%,而且用自噬促进剂雷帕霉素和顺铂联合处理组的细胞活力丢失大于单用顺铂处理的对照组（F=74.890,P<0.01）。RNA干扰实验显示,敲降自噬相关基因LC3,可减少顺铂引起的PARP剪切,细胞凋亡减少。结论：发现顺铂可以引起膀胱癌细胞T24发生自噬,并发现该自噬的作用能促进顺铂诱导的细胞凋亡。     

胸腺肽α1诱导膀胱癌细胞株BIU87凋亡的实验研究

目的研究胸腺肽α1诱导膀胱癌细胞株BIU87凋亡的作用及其机制。方法用50~400μg/ml胸腺肽α1作用BIU87细胞24~72 h后,MTT比色法检测细胞生长活性,单细胞凝胶电泳法和流式细胞仪分别检测BIU87细胞DNA损伤和凋亡作用。结果胸腺肽α1能显著抑制膀胱癌细胞株BIU87细胞的体外生长(P<0.01),呈时间与剂量依赖性;流式细胞仪检测显示不同浓度凋亡率分别为(4.69±0.60)%、(21.15±3.10)%、(33.15±2.40)%、(40.87±1.50)%、(48.47±1.02)%;单细胞凝胶电泳检测显示不同浓度DNA损伤比率分别为5%、20%、41%、62%、85%。结论胸腺肽α1通过抑制BIU87细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制膀胱癌细胞生长。     

EXPERIMENTAL STUDY ON APOPTOSIS OF GASTRIC CANCER CELLS INDUCED BY TRICHOSANTHIN

ffeSUItt Objectif Pour mvOr Si lbaptose se ndle au nzhanthe de cytotOxicitd de trichomnthinecontre les cellules de cancer M' N tw WueF et rm CObodri etahatutilde pour exPlore qualitatiest et quantitatinyt l'dtat mptOtique des cellules de cancer gastrique.ssulfots Dens le rechend in vitrO, qUand les ceuules de cancer ~que an7gu dtaicnt traitds por tri-chomnthine (0. 1ng/mI, 36h ), quelques changNts nZOndhaques twipo dhaptOse etaicnt ObServds. II yavait une aUgnZentatthe shamptive de l…     

塞来昔布对埃克替尼诱导肺腺癌细胞A549凋亡作用的影响

目的 研究埃克替尼与塞来昔布联合应用对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响以及对EGFR、COX-2表达的影响。方法 埃克替尼、塞来昔布单独或联合干预细胞48h后,倒置相差显微镜观察药物干预后细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞抑制率;HOECHEST33258荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡和药物作用周期;免疫荧光检测EGFR和COX-2蛋白表达情况。结果 埃克替尼联合塞来昔布,相比单药组明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆开始脱落;埃克替尼与塞来昔布对A549细胞增殖有明显抑制作用,并呈浓度及时间依赖性,二者联合作用时抑制作用更强（P〈0.05）;埃克替尼与塞来昔布均能诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高（P〈0.05）;联合用药与单独用药相比,可使细胞发生明显的G1期阻滞（P〈0.05）,进一步下调了EGFR和COX-2蛋白的表达（P〈0.05）。结论 埃克替尼与塞来昔布联合应用具有协同作用,机制可能与介导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR和COX-2信号途径有关。     

5-FU化疗诱导大肠癌细胞凋亡的疗效评价

评价5-FU对大肠癌化疗的疗效。方法通过流式细胞术测定化疗组和对照组患者癌细胞的凋亡指数(AI),S期细胞比率(SPF)以及抗凋亡基因bcl-2的表达。结果化疗组SPF、AI、bcl-2较对照组均有显著性提高,经单因素直线相关分析,AI和SPF、bcl-2呈正相关。结论5-FU是通过细胞凋亡而发挥作用的,化疗后AI、SPF和bcl-2均升高,它们可作为化疗疗效及预测预后的指标。     

细胞凋亡、肿瘤血管生成及PCNA在膀胱移行细胞癌的表达及其预后意义

目的探讨细胞凋亡、肿瘤血管生成及增殖细胞核抗原(PCNA)表达与膀胱移行细胞癌(简称膀胱癌)分级、分期及预后的关系。方法采用DNA末端标记法(TUNEL)和免疫组化法检测53例膀胱癌组织中细胞凋亡指数(AI)、微血管密度(MVD)、PCNA标记指数(PCNALI),分析其与膀胱癌分级、分期的关系。结果AI与PCNALI在膀胱癌不同分级之间均有显著性差异,MVD在Gl、G3间和G2、G3间差异有显著性;PCNAU在膀胱癌不同分期之间均有显著性差异,而AI与MvD均在T1、T3间和T2、T3间有显著性差异。在复发的膀胱癌中三项指标均高于未复发者。结论AI、MVD、PCNALI可作为评估膀胱癌恶性程度及预后的指标。     

应用非同位素 PCR-SSCP 检测膀胱癌组织中 p53 基因变异的初步研究

应用聚合酶链式反应—单链构像多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法检测了３９例膀胱移行上皮癌组织中ｐ５３基因的突变率为３０．８％，其中５、６、７、８外显子的突变率分别为７．７％、５．１％、５．１％、１２．８％；病理分级的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肿瘤组织中ｐ５３基因突变率分别为７．１％、３０．０％、５３．３％（Ｐ＜０．０５）。提示ｐ５３基因突变在膀胱肿瘤的衍变过程中可能起重要作用，可能是致其恶性程度提高的继发事件；ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法是一种快速、简单且安全的检测基因突变的方法，具有推广应用价值。     

外源性PTEN基因稳定转染对大肠癌LS1747细胞周期及凋亡的影响

目的 :研究外源性基因PTEN对人类大肠癌LS174 7细胞周期及凋亡的影响。方法 :以携带有PTEN基因的真核表达载体体外转染人类大肠腺癌细胞LS174 7,筛选阳性克隆的细胞并扩增培养 ,鉴定转染成功后采用流式细胞仪、透射电镜、DNA琼脂糖电泳 ,检测转染PTEN基因后LS174 7细胞的凋亡以及观察三种细胞生长曲线。结果 :流式细胞仪显示 ,细胞周期从G1期到S期发生抑制 ,并在G1期峰前出现 1个明显的凋亡峰。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带。转染空载体及未转染的LS174 7细胞未见凋亡表现。转染PTEN的LS174 7细胞与空白质粒载体转染的LS174 7细胞和LS174 7细胞的生长速度相比 ,后两者生长速度较快。结论 :将外源性PTEN基因导入LS174 7细胞后 ,可以抑制细胞周期 ,并可诱导细胞凋亡 ,这可能是PTEN基因抑制大肠癌细胞增殖的重要机制之一。     

膀胱癌组织端粒酶活性研究

采用端粒酶重复扩增（TRAP）－微孔板杂交法,对10例正常膀胱组织、6例膀胱炎症组织、45 膀胱癌组织和癌旁组织进行端粒酶活性测定。结果表明,正常膀胱组织无端粒酶活性,1例膀胱炎症组织端粒酶活性阳性。膀胱癌嘀 酶活性阳性率86．2％,癌旁组织阳性率为26．7％。端粒酶活性与膀胱癌分期级呈正相关,认为端粒酶活性与膀胱癌浸润发展密切相关,癌旁组织端粒酶活化提示肿瘤微浸润可能。     

紫杉醇诱导9L胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：通过体外实验探讨紫杉醇对恶性胶质瘤９Ｌ细胞株有否凋亡诱导作用。方法：在经ＭＴＴ比色法测试到紫杉醇对９Ｌ细胞具有细胞毒作用的前提下,进一步通过形态学观察,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪来检测其细胞毒作用是否与诱导细胞凋亡有关。结果：紫杉醇对９Ｌ细胞具显著细胞毒作用;０１μｍｏｌ／Ｌ紫杉醇作用下９Ｌ细胞分裂主要被阻滞在Ｇ２／Ｍ期,并在第７２ｈ出现凋亡细胞峰,此时培养细胞ＨＥ染色表现出典型的凋亡细胞形态特征,抽提其ＤＮＡ做琼脂糖凝胶电泳显示凋亡特有的ＤＮＡ“阶梯”。结论：紫杉醇具有抗胶质瘤作用,其机制与诱导细胞凋亡有关,通过进一步的体内实验,可为其最终广泛应用于临床脑胶质瘤病人提供充分的理论依据。     

丝裂霉素和T淋巴毒性细胞序贯治疗预防膀胱癌术后复发

目的丝裂霉素C(MMC)联合肿瘤抗原诱导T淋巴毒细胞(BT-BAK)膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的疗效观察。方法采用MMC和BT-BAK顺序灌注法治疗膀胱癌患者37例。动态观察灌注后血肿瘤因子-α(TNF-α)变化。结果31例Ta、T1、T2移行细胞癌患者中只有1例并发有鳞癌成分的T2患者于术后4个月复发鳞癌；6例T3患者，其中2例复发。总有效率达92％。灌注后血TNF-α水平较灌注前显著提高，差异有统计学意义。结论MMC联合肿瘤抗原诱导BT-BAK膀胱灌注，预防膀胱癌术后复发效果良好。动态观察血TNF-α水平对监测肿瘤复发具有一定意义。     

人参皂甙Rg3诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的形态学研究

目的：探讨人参皂甙Rg3对卵巢癌细胞株H08910的抑制作用。方法：用人参皂甙Rg3处理H08910细胞，通过倒置显微镜和电子显微镜观察细胞形态学改变。结果：在人参皂甙Rg3作用下，H08910细胞呈凋亡改变，形成凋亡小体。结论：人参皂甙Rg3能诱导卵巢癌细胞凋亡，抑制卵巢癌细胞增殖。