羊软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定

目的 从羊肋软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定.方法 选择羊肋软骨为原料经脱脂、脱钙后,用盐酸胍去除蛋白多糖,经胃蛋白酶消化、氯化钠盐析等步骤,提取纯化蛋白,然后进行鉴定.结果 4mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖,用胃蛋白酶的限制性酶解结果满意;氯化钠盐析浓度为3mol/L时最佳.SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的蛋白与sigma公司的Ⅱ型胶原蛋白一致.Ⅱ型胶原蛋白最大吸收峰为212 nm.结论 从羊肋软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高,且符合Ⅱ型胶原蛋白的特征.     

Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化和鉴定

1　材料和方法1.1　材料　胃蛋白酶及 型胶原蛋白 (C )标准品购自美国Sigma公司 . Mr14 .4～ 97.4× 10 3低分子标准蛋白购自上海丽珠东风生化技术有限公司 .CS- 90 0 0薄层扫描仪购自日本岛津公司 .1:Protein marker;2 :C (Sigma) 2 g·L- 1 ;3 :C (Sigma) 1g·L- 1 ;4:C 1g· L- 1 ;5 :C 0 .5 g·L- 1 ;6:C 0 .2 5 g·L- 1 ;7:0 .12 5 g· L - 1 .图 1　 SDS- PAGE分析经 DEAE- 5 2纤维素柱层析纯化的 C 1.2　方法　新鲜牛软骨剥去骨膜 ,在液氮冷冻下磨成粉 ,称质量 ,用 10倍体积的 4 mol· L- 1 盐酸胍 - 0 .0 5 mmol· L…     

可溶性猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取与鉴定

目的 从猪膝关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定.方法 选择猪膝关节软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶两步消化、氯化钠盐析、超纯水透析、离心浓缩等方法提取纯化Ⅱ型胶原蛋白;采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析对提取的Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定;利用冻干的方法计算提取的浓度.结果 SDS-PAGE电泳结果...     

鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定

目的探讨可溶性Ⅱ型胶原蛋白（CⅡ）的提纯方法。方法以雏鸡胸软骨为原材料,酸性条件下经胃蛋白酶消化,离心后,应用DEAE-Sephadex A-50进行离子交换层析,透析,盐析,得到纯化的CⅡ。结果自提的CⅡ样品与CⅡ标准品采用SDS-PAGE电泳显示条带一致。结论本法提纯CⅡ具有材料丰富,操作简便,重复性好等优点。     

应用高浓度Ⅱ型胶原蛋白构建组织工程软骨支架

目的构建有利于种子细胞黏附、增殖和分化的软骨组织工程海绵支架。方法依据天然软骨主要成分,提取透明软骨Ⅱ型胶原蛋白,将提取的胶原蛋白通过高速离心进行浓缩,真空冷冻干燥制得海绵支架材料,应用化学交联剂EDC/NHS进行化学交联,对支架采用组织化学染色、体外降解实验、扫描电镜和接种细胞静态培养的方法进行相关检测。结果支架具有良好的孔隙结构,孔径40～130μm,孔隙率在90%以上,细胞在支架上增殖、分化良好。结论构建的高浓度Ⅱ型胶原蛋白海绵支架具有良好的生物相容性,有较好的应用前景。     

Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较

目的对Ⅱ型胶原蛋白（ＣⅡ－Ａ）和弗氏完全佐剂（Ａ－Ａ）大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。方法分别采用Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型，利用排水法对大鼠足部体积进行测定，并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。结果从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变，但ＣⅡ－Ａ大鼠与Ａ－Ａ大鼠比较，滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显，关节炎持续时间也较长，更接近于人的类风湿性关节炎。结论ＣⅡ－Ａ大鼠模型与Ａ－Ａ相比是研究ＲＡ较为理想的动物模型。     

消化酶在口服Ⅱ型胶原蛋白治疗类风湿性关节炎中的作用

目的:观察消化酶在体内和体外对天然Ⅱ型胶原蛋白(native type Ⅱ collagen,N-C Ⅱ)和变性Ⅱ型胶原蛋白(denatured type Ⅱcollagen,D-C Ⅱ)的酶解作用,探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ)治疗类风湿性关节炎的机制.方法:在体外将胃蛋白酶、胰蛋白酶和...     

Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测

目的:探讨Ⅱ型胶原蛋白(collagen protein type Ⅱ, CⅡ)抗体产生规律,制备CⅡ抗血清.方法:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔,每隔10 d收集血清,以改良间接ELISA法检测抗CⅡ抗体效价.结果:鸡CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天抗体效价为1∶ 3 200,第20天升至1∶ 204 800;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别达到1∶ 409 600和1∶ 819 200.猪CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天血清中未能检测出抗体,第20天血清抗体效价为1∶ 3 200;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别为1∶ 51 200和1∶ 102 400.结论:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔后,经一定潜伏期血清中出现抗体,可以获得高效价抗CⅡ抗体血清.抗体产生情况符合机体初次及再次免疫应答的有关规律,但血清抗体产生的潜伏期和效价与不同种属来源的胶原蛋白有关.     

Ⅱ型胶原微量提取与纯化

Ⅱ型胶原是关节软骨中主要细胞外间质之一,多种风湿性疾病的发生与Ⅱ型胶原异常有关。现已知类风湿关节炎发病与Ⅱ型胶原自身免疫反应有关,用Ⅱ型胶原免疫某些动物可诱导出多关节炎。然而口服Ⅱ型胶原可通过诱导免疫耐受来治疗类风湿关节炎,因此Ⅱ型胶原的提取是研究Ⅱ型胶原的重要步骤。虽然Ⅱ型胶原在人体含量较多,但临床取材可获得的数量有限,为此我们探讨了Ⅱ型胶原的微量提取和纯化方法。1　Ⅱ型胶原的提取与纯化方法　　真空干燥,4℃,获得Ⅱ型胶原(平均每2.5克关节软骨可获Ⅱ型胶原10ｍｇ)2　Ⅱ型胶原鉴定2.1　紫外分光光度计鉴定提取…