CD11／CD18介导PMN－EC粘附在烧伤早期PMN损伤血管内皮细胞中的作用

将烧伤早期病人中性粒细胞（ＰＭＮ）与体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）孵育，观察内皮细胞的病理形态变化和检测培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量，以反映细胞损伤程度。并计数ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率。发现烧伤早期ＰＭＮ可使ＨＵＶＥＣ变形、细胞收缩、细胞间裂隙形成、胞浆出现小空泡、核固缩、部分内皮细胞从培养皿上脱落。培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量升高。预先用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８单抗（ｍＡｂ）和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ处理ＰＭＮ后，降低了ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率，ＨＵＶＥＣ损伤也明显减轻，尤其是二者联合应用时。结果提示：烧伤早期ＰＭＮ可引起ＥＣ损伤，损伤与ＣＤ１１／ＣＤ１８介导的ＰＭＮ－ＥＣ粘附相关，应用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ可部分阻断ＰＭＮ对ＥＣ的粘附和损伤。     

ICAM—1在缺氧—再氧化引起的白细胞与内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）是否介导缺氧－再氧化引起的中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）的粘附反应。方法血管内皮细胞（ＶＥＣ）经缺氧再氧化（Ｈ／Ｒ）处理后,加入ＰＭＮ,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结果ＶＥＣ经Ｈ／Ｒ处理后,ＰＭＮ与其粘附率增高１倍（Ｐ＜０．０１）,ＩＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）与ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ可明显降低粘附率的增高,Ｈ／Ｒ能增加ＶＥＣ的ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结论ＩＣＡＭ－１介导Ｈ／Ｒ后的ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附反应。     

内毒素条件下参与中性粒细胞－血管内皮细胞粘附过程的分子基础

利用抗中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）表面表达的粘附因子ＣＤ１８、内皮细胞白细胞粘附分子－１（ＥＬＡＭ－１）及细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）单克隆抗体作为阻断因素，用细胞微管吸吮技术所测得的ＰＭＮ－ＶＥＣ间单细胞粘附力作为观察指标，观察了内毒素刺激所致ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附性增加过程中上述三种粘附分子各自的功能特征。结果发现：ＣＤ１８的表达为ＰＭＮ快相增加粘附力的主要分子基础，而ＥＬＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１则为ＶＥＣ慢相增加粘附力的主要分子基础。     

L－精氨酸和N~G－甲基－L－精氨酸对血管内皮细胞释放EDRF的影响

通过培养的大鼠胸主动脉内皮细胞（ＣＥＣ）及胸主动脉环，利用生物分析法，探讨ＣＥＣ释放内皮源性舒张因子（ＥＤＲＦ／ＮＯ）的检测方法，影响ＥＤＲＦ／ＮＯ分泌的因素。发现单纯ＣＥＣ或经乙酰胆碱（Ａｃｈ）预处理的ＣＥＣ对去内皮血管环张力无明显影响；而经Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）或Ｌ－Ａｒｇ和Ａｃｈ预处理的ＣＥＣ可引起去内皮血管环产生明显舒张；ＮＧ－甲基－Ｌ－精氨酸和Ａｃｈ预处理的ＣＥＣ则引起去内皮血管环明显收缩。提示ＣＥＣ在基础状态和经Ａｃｈ预处理后，其合成和分泌ＥＤＲＦ／ＮＯ的能力很低或丧失，可能存在内源性ＥＤＲＦ／ＮＯ前体Ｌ－Ａｒｇ不足，供给外源性Ｌ－Ａｒｇ有增强ＣＥＣ合成和释放ＥＤＲＦ／ＮＯ的作用。在Ｌ－Ａｒｇ供给充足情况下，Ａｃｈ可进一步刺激ＣＥＣ释放ＥＤＲＦ／ＮＯ。     

应用差异显示法研究低密度脂蛋白诱导内皮细胞差异表达基因

目的 克隆、分离血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因素作用下差异表达的基因。了解动脉粥样硬化发生的分子机制。方法 培养血管内皮细胞系（ＥＣＶ３０４）在低密度脂蛋白（ＬＤＬ）的诱导下,用改进的差异显示－聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术分析表达水平明显差异的ｃＤＮＡ。对差异显示基因进行序列测定和同源比较。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ证实差异显示基因片段。结果 ＬＤＬ诱导ＥＣＶ３０４细胞出现 上调和下调表达的ｃＤＮ     

氧化高密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶活性的影响及药物干预

目的：研究氧化高密度脂蛋白（ｏｘＨＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）和血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）活性的影响及丙丁酚、１７－β－雌二醇（Ｅ２）和尼膜地平的干预作用。方法用试剂盒检测ＨＵＶＥＣ培养上清中ＮＯＳ和ＡＣＥ活性。结果ｏｘＨＤＬ对ＨＵＶＥＣ中ＮＯＳ的生成有明显抑制作用,并具有浓度和时间依赖效应。丙丁酚、Ｅ２和尼膜地平可减轻ｏｘＨＤＬ的抑制作用,与ｏｘＨＤＬ组相比,ＮＯ     

纤维蛋白原、极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1mRNA含量的影响

目的　拟建立逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量法,探讨纤维蛋白原（Ｆｇ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）、Ｉ型纤溶酶原灭活剂（ＰＡＩ－ｌ）ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　（ｌ）用异硫氰酸胍一步法（ＴＲＩｚｏｌ试剂）提取细胞总ＲＮＡ,用单管ＲＴ－ＰＣＲ 法、三对引物分别逆转录、扩增ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１ 及内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的特异性片段,扩增产物经２．０％ 琼脂糖凝胶电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相、计算各条带分子量并扫描其光密度值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｄｅｎｓｉｔｙ ｖａｌｕｅ,ＩＤＶ）,ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ的ＩＤＶ 用ＧＡＰＤＨ ｍ ＲＮＡ 的ＩＤＶ 进行校正,其相对表达量用各实验组与对照组比较的倍数表示。（２）以ＥＬＩＳＡ 法测定内皮细胞（ＥＣ）培养上清液（ＣＭ）中ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１总抗原的含量。（３）ＥＣ与不同浓度Ｆｇ（２,２０,２００,２０００ μｇ／ｍ ｌ）或ＶＬＤＬ（５,１０,２０,３０,４０ μｇ／ｍ ｌ）共同孵育１２ ｈ 或２４ ｈ 后,观察ＥＣｔ－ＰＡ 和ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ 水平及ＣＭ 中抗原含量的变化。（４     

G蛋白对血管紧张素Ⅱ抑制ECV304钙激活通道的调节效应

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）对人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ３０４大电导钙激活钾通道（ＢＫＣａ）的影响及Ｇ蛋白在此过程中的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝技术记录ＢＫＣａ的活动电流。结果 １０＾－７ｍｏｌ／ＬＡⅡ可抑制ＥＣＶ３０４细胞膜上ＢＫＣａ的活动,表现为电流幅值下降,开放概率减小,通道开放时间缩短,关闭时间延长;Ｇ蛋白稳定激动剂ＧＴＰγＳ可对抗ＡⅡ的抑制效应,Ｇ蛋白稳定抑制剂ＧＤＰβＳ则增强ＡⅡ的     

酶联免疫吸附试验检测HCV NS3-4A蛋白酶活性

目的 建立一种检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３－４Ａ丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法,用于筛选ＨＣＶ蛋白酶抑制剂。方法 将闰ｐＭＡＬ－ｃ２／ＮＳ３－４Ａ转化到大肠杆菌Ｋ１２ＴＢ１中,经ＩＰＴＧ诱导表达,亲和层析柱纯化后得到麦芽糖结合的ＮＳ３／ＮＳ３－４Ａ融合蛋白,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析其免疫学活性,并以酶联免疫吸附试验检测其生物学活性。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析并用考马     

静脉丙种球蛋白地小鼠病毒性心肌炎T细胞亚群,NK细胞及部 …

为探讨病毒性心肌炎（ＶＭＣ）免疫发病机理及静脉丙种球蛋白（ＩＶＩＧ）治疗ＶＭＣ的作用机理,将ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、ＩＶＩＧ保护组及ＩＶＩＧ治疗组,观察ＩＶＩＧ对小鼠脾脏Ｔ细胞亚群、ＮＫ细胞、ＩＬ－１、ＩＬ－２及外周血ＴＮＦ活性的影响。结果：与正常对照组比较,病毒模型组ＮＫＣ活性及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８均明显降低,ＩＬ－１、ＩＬ－２及ＴＮＦ活性明显升高,而ＩＶＩＩＧ保护组一     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。