两品系小鼠食物过敏模型的比较研究

【摘要】 目的 比较两种不同品系小鼠食物过敏模型的敏感性和肠道菌群变化的差异,旨在为食物过敏模型的建立提供依据。方法 分别对30只4~5周龄BALB/c和KM雌鼠用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏建立食物过敏模型，ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE水平；HE染色观察空肠组织形态；采用DGGE技术检测粪便菌群的变化。结果 （1）30只致敏的BALB/c小鼠中有27只血清OVA特异性IgE水平明显升高（P＜0.001），而30只致敏的KM小鼠中有21只，且BALB/c小鼠空肠绒毛炎症细胞浸润、上皮脱落及坏死比KM小鼠明显；（2)食物过敏造模后，BALB/c小鼠肠道菌群的改变明显（P＜0.001），而KM小鼠中仅有均匀度改变显著（P＜0.05）；（3）BALB/c小鼠和KM小鼠对照组肠道菌群的丰富度、Shannon指数及均匀度都有差异。结论 BALB/c小鼠对OVA的敏感性高于KM小鼠，不同品系小鼠肠道菌群结构不同，OVA处理后，BALB/c小鼠菌群的改变比KM小鼠更明显。     

两品系小鼠食物过敏模型的比较

目的 比较两种不同品系小鼠食物过敏模型的敏感性和肠道菌群变化的差异,旨在为食物过敏模型的建立提供依据.方法 分别对30只4～5周龄BALB/c和KM雌鼠用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏建立食物过敏模型,ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE水平;HE染色观察空肠组织形态;采用DGGE技术检测粪便菌群的变化.结果 （1）30只致敏的BALB/c小鼠中有27只血清OVA特异性IgE水平明显升高（P<0.001）,而30只致敏的KM小鼠中有21只,且BALB/c小鼠空肠绒毛炎症细胞浸润、上皮脱落及坏死比KM小鼠明显;（2）食物过敏造模后,BALB/c小鼠肠道菌群的改变明显（P<0.001）,而KM小鼠中仅有均匀度改变显著（P<0.05）;（3）BALB/c小鼠和KM小鼠对照组肠道菌群的丰富度、Shannon指数及均匀度都有差异.结论 BALB/c小鼠对OVA的敏感性高于KM小鼠,不同品系小鼠肠道菌群结构不同,OVA处理后,BALB/c小鼠菌群的改变比KM小鼠更明显.     

黄褐毛忍冬总皂苷对卵清蛋白致敏小鼠的抗过敏作用

目的:观察黄褐毛忍冬总皂苷(Ful)对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的抗过敏作用,为临床用于治疗食物过敏提供药理学依据.方法:建立BALB/c小鼠食物过敏模型,设过敏反应组(Se),Ful高(H)、中(M)、低(L)浓度组及生理盐水对照组(NS).ELISA测定血清中OVA特异性IgE水平、小肠黏液中总IgA及OVA特异性IgA水平;甲苯胺蓝染色观察空肠及肠系膜肥大细胞,HE染色观察空肠形态;足垫肿胀实验检测迟发型超敏反应.结果:OVA隔日激发3～4次后,Se,L,M组均有3/4以上小鼠出现急性腹泻.高浓度Ful可抑制过敏小鼠腹泻发生,减轻肥大细胞聚集和脱颗粒,降低OVA特异性IgE水平,缓解OVA介导的足垫肿胀反应,减轻小肠绒毛炎症.结论:高浓度Ful可同时缓解食物过敏小鼠IgE介导的及细胞介导的超敏反应.     

饮水中地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响

目的探讨水环境地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响。方法将20只Balb/c小鼠随机分为对照组和实验组,每组5只。
实验低剂量组灌喂含0.035 ng地塞米松磷酸钠的饮用水,中剂量组为0.225 ng、高剂量组为2.25 ng,对照组灌喂不含地塞米松磷
酸钠的饮用水。每日观察小鼠行为、皮毛、大便等的变化。灌喂第36 d 处死小鼠,取回盲部组织提取细菌基因组DNA,扩增
16S rDNA V6可变区,扩增产物变性凝胶梯度电泳（DGGE）后分析。切取DGGE图谱上的优势条带,扩增、纯化后克隆测序,其
序列BLAST比对分析。结果各实验组小鼠均出现性情暴躁、斗殴打架、咬断尾部等现象。DGGE图谱聚类分析表明各组小鼠
回盲部均具有较稳定的菌群;主成分分析表明各组的优势菌群存在一定差异;菌群多样性分析表明,与对照组相比,低剂量组菌
群的种类和数量明显增加（P<0.05）;中、高剂量组种类和数量显著增加（P<0.01）。16S rDNA V6区序列分析显示实验组和对照
组具有共有菌属15种、差异菌属2种,优势菌种类和比例发生了改变。对照组有乳杆菌属的细菌定植,而中、高剂量实验组乳杆
菌属的细菌消失,却出现志贺菌属的细菌。结论饮水地塞米松污染可影响小鼠神经系统,使小鼠肠道内细菌的种类、数量及优
势菌所占的比例发生改变,菌群多样性增加;抑制肠道益生菌的定植,利于肠道致病菌的入侵。
     

CPG寡核苷酸对卵清蛋白致敏幼鼠血清中Th1/Th2细胞因子及肥大细胞趋化蛋白1的影响

目的：利用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立幼鼠食物过敏模型,观察非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤寡核苷酸(CPG oligodeo-xynucleotide,CPG-ODN)对OVA致敏的干预作用。方法选用2～3周龄BALB/c雌性幼鼠40只建立幼鼠食物过敏模型,分为对照组、不同剂量OVA致敏组(20μg、50μg和100μg组)及CPG-ODN干预组(50μg OVA + CPG-ODN),每组8只。观察过敏症状并评分;眼球取血,检测血清中OVA-IgE、肥大细胞趋化蛋白1(mast cell chemotactic protein 1,mMCP-1)及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4的水平;空肠组织行病理学检测。结果除对照组外,致敏组小鼠均出现不同程度过敏症状,空肠表现为Ⅰ型变态反应病理特点,Th2细胞因子、OVA-IgE、mMCP-1水平升高,20μg、50μg致敏组Th1水平降低,50μg致敏组指标改变最显著;与致敏组相比,干预组小鼠过敏症状及病理改变明显减轻,Th2细胞因子、IgE及mMCP-1水平降低,Th1水平升高。结论用50μg OVA建立的BALB/c幼鼠食物过敏模型致敏效果最好,CPG-ODN通过改善Th1/Th2失衡状态,抑制幼鼠食物过敏反应。mMCP-1在过敏性疾病的发生、发展中起重要作用,有望成为食物过敏临床检测指标之一。     

新疆哈萨克族肥胖儿童菌群人源化动物模型的建立

目的 利用无菌小鼠建立新疆哈萨克族肥胖儿童菌群人源化（HFA）动物模型,为深入研究哈萨克族儿童肥胖的病理生理机制提供新的研究方式。方法 收集新疆哈萨克族7～13岁肥胖儿童新鲜粪便,男女各10例。20只3周龄无菌级C57BL/6J小鼠（雌雄各半）,按照性别进行分组并编号。小鼠灌胃接种哈萨克族肥胖儿童粪便菌悬液0.1 ml/次,隔日一次,共接种3次,且接种时遵循性别一致原则。于接种后第7天收集小鼠新鲜粪便标本,提取基因组DNA后,采用特异性引物对16S rRNA V3区进行PCR扩增,对扩增产物运用DGGE方法分离并鉴定,以了解HFA动物模型中肠道菌群的定植情况。结果 接种哈萨克族肥胖儿童肠道菌群后的无菌小鼠盲肠均减小为正常小鼠大小;HFA动物模型的PCR-DGGE指纹图谱显示各观察标本均形成复杂而多样的菌属条带。结论 本实验成功利用无菌C57BL/6J小鼠建立哈萨克族肥胖儿童HFA动物模型,该动物模型是探索哈萨克族儿童特征性肥胖与肠道菌群关系的新的选择方式。     

解毒祛瘀滋阴方调节肠道菌群治疗狼疮小鼠的研究

[目的] 探究肠道菌群在解毒祛瘀滋阴方治疗MRL/lpr狼疮小鼠过程中的作用。[方法] 将12周龄MRL/lpr小鼠随机分为模型组(0.9%氯化钠水溶液灌胃)、中药组(0.156 g·10 g-1解毒祛瘀滋阴方灌胃)和粪菌移植组(移植中药组小鼠的粪菌液)，以12周龄C57BL/6小鼠作为空白组。饲养6周后采集小鼠血清样本，采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测小鼠血清抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody，anti-dsDNA)、抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)表达水平；称量脾脏质量，计算脾脏指数；采用流式细胞术检测脾脏生发中心B细胞和浆细胞百分比；采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色分析肾脏病理变化。[结果] 与模型组比较，中药组和粪菌移植组的菌属Bacteroides和Sutterella丰度均显著上调(P＜0.05)，菌属Prevotella、Oscillospira、Ruminococcus、Odoribacter和Rikenella丰度均显著下调(P＜0.05)。此外，解毒祛瘀滋阴方和粪菌移植均能显著降低MRL/lpr小鼠血清anti-dsDNA、ANA和IL-6水平(P＜0.05，P＜0.01)，降低脾脏指数(P＜0.05)和脾脏浆细胞百分比(P＜0.05)，减少肾脏炎性细胞浸润。[结论] 解毒祛瘀滋阴方可通过调控肠道菌群，发挥治疗系统性红斑狼疮的作用。     

酪酸梭菌对食物过敏小鼠肠道屏障功能的影响

目的 探讨产丁酸的益生菌酪酸梭菌通过调节肠上皮细胞双孔钾通道Trek1的表达对过敏小鼠肠道屏障功能的影响.方法 建立小鼠食物过敏模型,ELISA法、流式细胞仪检测相关指标验证造模效果,尤斯室检测小肠组织通透性变化,Western blot及免疫荧光法检测Naive组、Saline组、SIT组、SIT/SB组、SB组、SIT/CB组、CB组、SIT/CB/Spadin组小鼠空肠组织中Trek1的表达;Transwell系统中使用T84细胞建立单层上皮细胞层,分别暴露于过敏介质,qRT-PCR和Western blot检测Trek1mRNA和蛋白的表达;分别使用生理盐水、SIT、SIT/SB、SB、SIT/CB、CB、SIT/CB/Spadin不同疗法对过敏小鼠进行治疗,了解小鼠肠道Trek1的表达情况、肠道屏障功能及过敏反应指标的变化情况.结果 相对于对照组,食物过敏小鼠小肠Trek1蛋白表达水平显著下降,肠黏膜通透性显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);T84细胞暴露于过敏介质后,Trek1 mRNA和蛋白的表达显著下降(P＜0.05),但预先加入p38抑制刺可以拮抗这种改变;SIT治疗、酪酸梭菌和丁酸钠单独应用均可以提高食物过敏小鼠肠道Trek1的表达,减轻过敏反应(P＜0.05),但SIT与酪酸梭菌或丁酸钠的联合应用效果更加显著(与SIT组相比P＜0.05),并且可以显著降低小肠黏膜通透性,改善肠道屏障功能(P＜0.05).结论 丁酸钠或者产丁酸的益生菌酪酸梭菌可以通过提高Trek1的表达来恢复过敏小鼠的肠道屏障功能,减轻过敏反应,并且加强SIT治疗的效果.     

过敏原在小儿迁延性慢性腹泻病中的检测分析

目的对小儿迁延性慢性腹泻病中检测过敏原值的变化,以明确和分析其发生的原因、临床表现、诊治及预后,为类似病例的防治提供参考。方法我院儿科2012年1月~2014年3月共收治101例原因不明迁延性慢性腹泻患儿,根据食物IgG过敏原特异性检测结果是否阳性分为两组,82例阳性患儿为过敏组,19例阴性患儿为非过敏组,比较两组临床表现及预后。结果两组患儿肠道菌群、便红细胞、便白细胞、便常规、便脂肪球、便潜血异常率比较差异无统计学意义(P>0.05)。血清总IgE水平、总蛋白、白蛋白、血中性粒细胞含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。过敏组食物IgG抗体阳性率明显高于非过敏组(P<0.05)。过敏组食物过敏原IgG抗体平均浓度为(5479±1280)mg/L,明显高于非过敏组(P<0.001)。过敏组总有效率为91.46%,非过敏组总有效率为52.63%(P<0.001)。结论食物过敏是导致小儿迁延性慢性腹泻的主要原因之一,其临床表现及相关指标与非食物过敏患儿相似,过敏原检测和回避过敏原诊断性治疗有助于明确诊断。     

五联悉生大鼠的人工构建和肠道粘膜菌群分析

用五联菌人工接种无菌大鼠培育悉生大鼠,建立肠道粘膜菌群分析方法,检测各肠段微生态状况。实验结果表明,五联菌定植状态好,厌氧菌定植数量大,细菌无肠外易位,人工接种及微生态分析方法稳定,重复性好。     

肠菌移植治疗炎症性肠病14例临床观察

目的 观察肠菌移植治疗炎症性肠病的安全性和有效性，评价对治疗后炎症指标、疾病评分及肠道菌群组成的影响。方法 选取2018年12月至2021年12月于医院肛肠科行肠菌移植治疗炎症性肠病的14例患者，比较治疗前后患者炎症指标、疾病评分及治疗效果，16s rDNA检测肠道菌群变化。结果 经肠菌移植后，第15周临床有效率为85.71%（13/15）；患者炎症指标、Mayo及疾病评分、肠道菌群多样性及相对丰度较前改善，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 肠菌移植治疗炎症性肠病疗效显著，不良反应少，安全性高，值得临床推广应用。     

粪菌移植:中西医诊疗思维的碰撞

粪菌移植(FMT)是将健康供者粪便中的功能菌群移植到患者胃肠道内,以期重建患者体内正常菌群的一种疾病治疗方式。西医以FMT方式治疗疾病的历史可追溯至20世纪50年代,经过数十年的探索,其疗效已在多种疾病中得到验证;而中医关于人粪入药的记载更可追溯至公元3世纪,相关理论在历代多部中医著作中均有记载。作为一种已经被写入指南的治疗方式,FMT在治疗难辨梭状芽孢杆菌感染中的作用已在美国、英国等部分国家和地区得到认可,且其临床适应证范围有进一步扩展的趋势。中西方医学两种截然不同的思维模式在应用FMT治疗疾病上产生了奇妙的碰撞。综合中西医医学实践中的菁华,探索更加规范、有效的FMT方式,既是以患者健康为中心的体现,也是中西医学相互促进的体现。     

宏基因组学和代谢组学在人类肠道微生态研究中的应用

人类胃肠道中寄居着庞大复杂的微生物,它们与人类健康和疾病有着密切的关系.采用宏基因组学研究技术分析肠道微生物,能在更高层次上揭示肠道菌群与宿主的关系,代谢组学相关技术能测量人体肠道生态系统某个时间点或整个时程的代谢动力学或代谢流.本文综述了宏基因组学和代谢组学相关技术在肠道菌群引起的人类疾病的可能应用.     

肠道菌群在慢性肝病和肝细胞癌中的作用及临床意义

肠道菌群是人体消化道内复杂、动态的微生态系统,生理条件下与宿主之间存在着平衡的共生关系。然而,在慢性肝病和肝癌等病理状态下,肠道菌群的组成和肠道通透性会发生显著变化,导致菌群失调和细菌易位。肠道细菌及其代谢产物一方面进入肝脏激活炎症相关信号通路,另一方面进入循环形成内毒素血症,共同促使慢性肝病和肝癌恶化进展。目前,针对肠道菌群治疗慢性肝病和肝癌的策略包括合理运用抗生素、益生菌或益生元,粪便微生物移植。本文就肠道菌群在慢性肝病和肝癌中的潜在作用及临床意义作一综述。     

肠易激综合征与肠道微生态关系的研究进展

肠易激综合征（Irritable Bowel Syndrome, IBS）是一种目前比较常见的功能性肠病,随着医学知识的不断更新,对IBS的研究也越来越深入,通过大量研究发现导致IBS的可能发病机制是复杂多样的,但其发病的确切原因目前却仍然尚不明了,尽管如此,仍有越来越多的研究显示肠道茵群失调与IBS的发病有较高的相关性,本文就目前IBS与肠道微生态关系的研究现状作一综述。     

高血压与肠道菌群相关性研究文献计量学分析

目的　分析评价2008—2017年SCI收录的高血压与肠道菌群相关性研究的文献情况,为进一步开展该领域的研究提供参考。方法　以Web of Science核心合集数据库为资料来源,选用Web of Science核心合集数据库中的高级检索,分别对高血压（hypertension）和肠道菌群（gut microbiota）的同义词、上下位类主题词采用布尔运算符“OR”组配,组间采用“AND”组配,字段标识符选择主题（TS）;检索年限：2008—2017年;检索日期：2017-11-01;对高血压与肠道菌群相关性研究文献资料进行描述性统计分析。结果　共纳入62篇文献。发文量从2015年开始逐年增多;Current Hypertension Reports发文最多（5篇）;Circulation的影响因子最高（19.309）;高被引文献（被引量≥9.02）有14篇;文献合作度7.29,文献合作率91.94%;发文量≥2篇的作者主要来自美国;有科研基金资助的文献48篇（77.42%）;本研究共涉及88个关键词,研究方向以心血管系统与心脏病学为主,研究内容主要集中于肠道菌群失调与高血压的相关性。结论　高血压与肠道菌群的相关性研究目前尚处于起步阶段,存在发文期刊分散、学术影响力小等不足,需对二者的因果关系、作用机制等关键问题继续探索、验证,在研究内容和研究质量上不断丰富和优化。     

仔猪肠道微生物研究进展

肠道菌群在哺乳动物及人类健康的作用正日益受到重视。仔猪的健康生长需要一个动态平衡的肠道微生态环境。然而,在猪的生命周期中,从食管到直肠的微生物分布与组成存在时间和空间的变化。健康的肠道菌群具有促进猪的营养代谢,维持肠黏膜屏障,调节免疫应答,抑制病原菌感染等功能。多种因素对猪肠道菌群的形成与稳定具有重要的作用,包括分娩方式（经过产道或剖宫产）、幼龄时期饮食（母乳或配方饲料）、抗生素或抗生素样分子的使用等。本文主要从仔猪肠道微生物组成与定植、功能、影响肠道微生物的因素等方面论述了仔猪肠道微生物与仔猪肠道健康的关系,从而加深肠道微生物对维护仔猪肠道健康作用的认识。     

粪菌移植通过改善肠黏膜屏障功能治疗硫酸葡聚糖诱导的小鼠结肠炎

目的 研究粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)对硫酸葡聚糖(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用.方法 将92只7周龄雌性C57 BL/6小鼠,按照随机数字表法分为4组,每组23只:对照组正常饮水,模型组饮用2％ DSS7d,在第8天时换成不含DSS的灭菌纯净水饮用7d,FMT预防组在饮用DSS建模的同时给予FMT灌胃处理,FMT治疗组在饮用7dDSS模型建成后进行FMT灌胃处理7d.记录各组小鼠体质量变化和疾病活动度,并收集每日粪便进行肠道菌群分析.在第7、14天末分别处死10只小鼠,采集血液标本进行TNF-α和D-乳酸测量,留取结肠组织分别进行HE染色、透射电镜观察,免疫组化染色检测紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin的表达.结果 FMT治疗组小鼠体质量、疾病活动程度和结肠长度较DSS诱导结肠炎小鼠模型组显著改善(P＜0.01).FMT治疗组血清D-乳酸和TNF-α水平较模型组明显降低(P ＜0.05,0.01).透射电镜可见FMT治疗组结肠上皮的损害及细胞间紧密连接结构和上皮完整性较模型组显著改善.FMT治疗及预防处理后ZO-1和Occludin的表达较模型组明显增高(P＜0.C5,P＜0.0I).FMT预防及治疗都能显著改善DSS引起的肠道菌群改变,促进乳杆菌属增殖而抑制拟杆菌属和颤螺菌属的生长.结论 FMT预防及治疗都能显著改善硫酸葡聚糖引起的肠道菌群改变,促进乳杆菌属增殖而抑制拟杆菌属和颤螺菌属的生长.     

长航人员肠道微生态平衡与疾病相关性研究进展

随着高通量测序技术的发展,越来越多的研究证实,肠道菌群与宿主共同进化,在维持机体免疫稳态中发挥重要作用。肠道菌群可以直接或通过代谢产物间接参与多种疾病的发生发展。研究人员根据肠道微生态与其他脏器间的相互关联,提出了“肠-脑轴”、“肠-肺轴”等学说,并在基础和临床研究领域得到广泛验证。长航人员容易发生肠道菌群紊乱,也经常出现其他健康问题。现阶段需积极开展相关研究,明确长航人员肠道菌群紊乱与健康状态的关系,探索合理的干预措施。维护肠道微生态平衡,对提高长航人员生活质量、预防疾病发生具有重要意义。