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相似文献
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1.
惭型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响。方法 利用计算机辅助设计针对乙型肝炎病毒C基因的三个单一核酶构建Rz1核酶自剪切转录载体(pGEMRz1),观察单一核酶(Rz1)对靶RNA的切割作用及乙型肝炎病毒观察单一核酶(Rz1)对靶RNA的切割作用及乙型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响。结果 核酶自剪切转录载体体2上转录后,在顺式核酶发生自剪切后可将目的核酶正确地释放出来,计算机设计的单一核酶体外可剪  相似文献   

2.
目的:确定人工设计的梅核Rx199对原癌基因K-ras mRNA的体外切割活性,为K-ras特异性核酶的体内应用提供依据。方法:利用DNA重组技术构建K-ras外显子1及核酶Rz199的体外转录质粒,以T7RNA聚合酶进行转录获得核酶Rz199对其靶RNA分子进行切割。结果:K-ras体外转录体为254nt的RNA分子,能被核酶Rz199切割成大小分别为90,164nt的2个片段。结论:梅核Ra1  相似文献   

3.
核酶对乙型肝炎病毒基因表达的抑制作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 探讨核酶在细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的作用。方法 计算机设计针对C基因的三个切点的核酶Rz1,Rz2,Rz3,合成核酶基因并将三个核酶基因两两组合克隆入pGEM7zf(一)质粒中,经体外转 录后切割靶RNA;选择Rz2和Rz3串联的双位点核酶基因构建入逆转录病毒载体pBBS212中,重组质粒转染2.2.15细胞,ELISA方法惭型肝炎病毒基因表达的抑制作用。结果 三种不同组合的核酶均可有  相似文献   

4.
目的:探讨多位点核酶对乙型肝炎病毒(HBV)信使核糖核酸(mRNA)的切割作用,以及保守碱基突变后对切割活性的影响。方法:利用计算机辅助设计针对HBV C区基因的多位点核酶及保守碱基突变的双位点核酶,构建多位点核酶及双位点突变核酶的自剪切载体(pGEMRz123,pGEMmRz12),观察核酶及突变核酶对RNA的切割作用。结果:构建后的多位点串联核酶及突变核酶的自剪切转录载体在体外转录后,其顺式核酶可发生自剪切,并可将目的的核酶释放出来。多位点核酶对HBV mRNA有明确的切割作用,而保守碱基突变后对HBV mRNA则无切割作用。结果 :抗HBV多位点酶在体外可明确切割HBV靶RNA,突变后的核酶无切割活性,保守碱基为核酶保持活性所必需。  相似文献   

5.
血管内皮生长因子165核酶的合成及其体外活性   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨抗血管内皮生长因子165(VEGF165)核酶的设计合成及其生物学活性。方法 利用计算机辅助设计针对VEGF165的锤头状核酶,构建核酶的自剪切转录载体pGEMRz212,体外转录合成核酶Rz212及其相应的底物VEGF165mRNA,在无细胞体系中观察核酶对靶RNA的切割作用。结果 构建的自剪切转录载体在转录的过程中发生了自身剪切,并释放出目的核酶Rz212,该核酶具有切割VEGF165 mRNA的作用。结论 计算机辅助设计的VEGF165锤头状核酶体外可有效切割靶RNA,具有较高的生物活性。  相似文献   

6.
c—myc基因特异核酶的设计及其对靶mRNA的切割   总被引:3,自引:0,他引:3  
杨庆源  葛学铭 《医学争鸣》1998,19(3):310-313
目的:针对c-myc基因第二外显子部分序列设计核酶,探讨生理温度下核酶的切割活性,方法:计算机模拟分析c-myc基因第二外显子部分二级结构,选择核酶切位点,设计核酶,分别构建c-myc基因第二外显子部分序列和核酶体外转录载体并经双脱氧末端终止法测定核酶序列正确无误,体外转录核酶和靶RNA分子,生理温度下测定核酶切割活性,结果:所设计的核酶可有效地切割靶mRNA分子。结论:所设计的核酶在生理温度下具  相似文献   

7.
丁型肝炎病毒基因组核酶的反式剪切活性   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 观察丁型肝炎病毒2种基因组核酶(HDV genomic ribozyme,g Bz)是否存在式剪切活性。方法 合成g。.Rz74、g.Rz55的CDNA,克隆人质粒pGEM-4Z,体外转录获取核酶RNA,同时从质粒Rz277B上转嫌出同源性底物RNA,以β-32p-UTP标志,再将核酶与底物按比例混合,在一定条件下观察是否出现的剪切作用,结果 启动反应30min后,可以观察到的切产物,90m  相似文献   

8.
目的: 设计合成血管内皮生长因子多位点核酶,探讨其对靶RNA的切割作用.方法: 利用计算机辅助设计针对VEGF165的3个单位点核酶 (Rz1, Rz2, Rz3) 和联合型多位点核酶 (Rz123),构建其自剪切转录载体,观察多位点核酶对靶RNA的切割作用.结果: 构建的多位点核酶自剪切转录载体在体外转录中,顺式核酶发生了自身剪切,并释放出正确的目的核酶,多位点核酶可切割靶RNA,且效率高于单一核酶,其切割效率分别为 (37±10)% (Rz1), (51±8)% (Rz2 ), (68±15)% (Rz3) 和(88±11)% (Rz123).结论: 抗血管内皮生长因子多位点核酶体外可联合切割靶RNA,具有较高的生物活性.  相似文献   

9.
抗HBVC基因核酶自剪切转录载体的构建   总被引:4,自引:1,他引:3  
建连奇 《医学争鸣》1997,18(4):376-377
抗HBVC基因核酶自剪切转录载体的构建*连建奇1周永兴1金由辛2(1第四军医大学唐都医院传染科西安7100382中国科学院上海生物化学研究所)关键词乙型肝炎病毒C基因核酶自剪切中图号R575.1核酶(Rz)是一类具有酶特异性的RNA分子,它能够序列特...  相似文献   

10.
抗肿瘤多药抗性核酶转录质粒的构建及其体外切割研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 探讨体外核酶对肿瘤多药抗性相关基因mdrl mRNA的锤头状核酶(ribozyme),并构建抗mdrl-ribozyme和靶分子的体外转录质粒,进行体外切割实验。结果 发现抗mdr1-ribozyme能较好地切割mdrl-mRNA。结论 抗肿瘤多药性核酶的体外研究为基体内应用提供了参考,ribozyme有可能成为逆转肿瘤多药抗性的新药物。  相似文献   

11.
目的:构建特异性切割人组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP-1)的锤头状核酶的真核表达载体并在体外进行活性鉴定,为应用于瘢痕基因治疗奠定基础.方法:设计并合成针对人组织TIMP-1 mRNA的锤头状核酶基因Rz182、Rz358和Rz412及相应的点突变核酶基因,将核酶基因克隆于可在体内高表达核酶的载体pBSKneoU6中,制备嵌合于U6 snRNA分子的核酶基因克隆.逆转录聚合酶链式反应获得全长TIMP-1 mRNA基因片段并克隆至T载体.体外转录法大量制备以α-32P UTP 标记的核酶及靶RNA,进行体外切割实验.结果:核酶基因克隆制备正确,在体外成功转录出嵌合于U6 snRNA的核酶和靶RNA. 37℃的生理温度下,U6Rz182和U6Rz358成功切割了靶RNA,U6Rz182切割效率为49.23%,Km=29.7 nmol/L,Kcat=0.32 min-1.U6Rz358切割效率为55.21%.Km=39.6 nmol/L,Kcat=0.21 min-1.U6Rz412及突变核酶均未显示切割活性.结论:本研究中制备的U6Rz182和U6Rz358有良好的特异催化切割活性,有望在瘢痕成纤维细胞内抑制人TIMP-1的表达,成为新的抗瘢痕核酸药物.  相似文献   

12.
Rasisaprotooncogeneencodingguaninenucleotidebindingprotein,ras--p21islocatedinthe.innerplasmamembraneandtransductssignalfromreceptortyrosinekinasetoraff.Ras--pZIproteinparticipatesintheregulationofcellgrowthanddifferentiation[lj.Mutationofras,Ki--rasinparticular,playsanimportantroleincellmalignanttransforming.ThemutantrateofKi--rasinhumanpancreaticadenocarcinomaisashighas95%['].So,blockingrasexpressionshouldbeapotentialmethodforcancertherapy.RibozymeisasmallcatalyticRNAmolecule.Recently,it…  相似文献   

13.
目的:构建针对乙型肝炎病毒(HBV)C区基因(2029-31及2063-65位点)的双位点核酶的真核表达载体,观察其在细胞内对HBV基因表达抑制作用。方法:利用亚克隆从质粒pGEMRz123切下EcoR-BamHI片段,双粘端克隆于真核质粒pBBS212中,将该质粒与p1.2Ⅱ(含HBV全序列)共转染HHCC细胞(人肝癌细胞株)。观察该核酶对HBV基因表达的抑制作用。结果:在HHCC细胞中P1.2  相似文献   

14.
15.
抗c—erbB—2 ribozyme的计算机设计   总被引:5,自引:2,他引:3  
设计能特异性切割人癌基因c-erbB-2mRNA的核酶。概据Symonx的“猛士锤头结构”,以人癌基因c-erbB-2mRNA为靶RNA,用计算机对其可能为核酶切割的位点进行分析以寻找最佳切点。对底物及核酶的二级结构进行预测。  相似文献   

16.
Dozensofstudieshavedemonstratedthattheab normalexpressionofmajorhistocompatibilitycomplex(MHC)Ⅱmoleculeswasassociatedwithmanydis eases ,suchasrheumaticarthritis ,immunohepatitis ,autoimmunediseaseofcentralneuralsystem[1- 3] .Morerecently ,anti nucleicacidofMHCⅡmoleculeswasshowntoinhibittheexpressionofMHCⅡmolecules,buttheinhibitoryeffectivenesswaslessthan 30 % .Therearecodominanceandmultipleal leleforMHCⅡmoleculeswhichleadtotheircompli catedpolmorphism ,soitisdifficulttorepressexpres si…  相似文献   

17.
以U1小核核糖核酸为靶向基因构建HCV特异性嵌合体核酶   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:以人类U1小核核糖核酸为载体,构建特异性嵌合体核酶,以期用于HCV感染的基因治疗。 方法:将HCV特异性核酶序列设计为引物序列一部分,以人类U1小核核糖核酸为模板,经PCR法及2次克隆得到嵌合体,使核酶序列替代U1结构中第3个茎-环。 结果:经测序证实新建质粒中确实有核酶序列且替代了第3个茎-环。 结论:以U1小核核糖核酸为靶向基因可以构建出HCV特异的U1嵌合体核酶。  相似文献   

18.
目的 探讨体外核酶对肿瘤多药抗性相关基因mdr1靶RNA分子的切割作用及其影响因素。方法 利用计算机软件设计能特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶(ribozyme),并构建抗mdr1-ribozyme和靶分子的体外转录质粒,进行体外切割实验。结果 发现抗mdr1-ribozyme能较好地切割mdr1 mRNA。 结论 抗肿瘤多药抗性核酶的体外研究为其体内应用提供了参考,ribozyme有可能成为逆转肿瘤多药抗性的新药物。  相似文献   

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