新维甲类化合物—R—81001对HL—60细胞的分化诱导作用

应用软琼脂集落形成法选出单克隆HL-60细胞系,系统地研究新维甲类化合物R81001的分化诱导作用。证明该药可使人早幼粒白血病细胞的NBT还原能力明显增强,呈浓度依赖性。形态学观察表明,在药物作用下细胞的核浆比例降低,核仁减少或消失.胞浆中嗜天青颗粒减少,出现特异性颗粒。多数细胞处于中或晚幼粒细胞阶段。非特异酯酶染色试验证明,R81001诱导HL-60细胞沿粒系统定向分化。     

氟伐他汀对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的诱导分化作用

目的:探讨氟伐他汀对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的分化诱导作用,为人类早幼粒细胞白血病的治疗提供理论依据。方法：体外培养HL-60细胞用20 μmol·L^-1氟伐他汀处理,观察细胞分化的形态学改变。20 μmol·L^-1氟伐他汀处理HL-60细胞72 h后测定硝基四氮唑蓝（NBT）还原能力,5 d后进行非特异性酯酶染色,计算分化细胞百分率。结果:经氟伐他汀处理的HL-60细胞,胞体较小,核/质比例降低,核呈扭曲折叠状或分叶状,细胞质内出现特异性颗粒及空泡样改变,部分细胞已分化为较成熟的细胞。用氟伐他汀处理的HL-60细胞NBT还原能力(A值)较对照组显著升高（P<0.01）,与阳性对照组全反式维甲酸（ATRA,10 μmol·L^-1）的作用大致相当。经20 μmol·L^-1氟伐他汀处理5 d的HL-60细胞,非特异性酯酶染色阳性细胞的百分比明显多于对照组(P<0.01),在作用液中加入氟化钠未能抑制该种阳性反应。结论:氟伐他汀可使HL-60细胞分化为较成熟的细胞,提示氟伐他汀可能成为治疗急性早幼粒细胞白血病的药物。     

中药安迪对HL-60细胞分化的诱导作用

目的　探讨安迪粉针剂 (Andi)对 HL- 60细胞分化的诱导作用 .方法　采用人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,分为不加任何药物的对照组 (C组 )、安迪粉针剂 (Andi)组、阳性对照药维甲酸 (RA)组和苦参 (KS)组 ,进行体外培养和诱导分化 ,观测细胞生长曲线、细胞形态、硝基蓝四氮唑(NBT)还原和吞噬能力等指标 .结果　 2 mg· L-1 Andi可显著地抑制 HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有 NBT还原能力和吞噬功能 ;Andi为 68.0 % ,RA为 61 .5% ,KS为 59.0 % ,C组还原能力仅6.0 % (P<0 .0 1 vs C) .其形态的改变和吞噬能力与阳性对照药维甲酸 (RA)和苦参 (KS)相似 ,分别为 52 .0 % ,45.5%和56.5% (P>0 .0 5) ;均明显高于空白对照组 .C组吞噬功能仅7.5% (P <0 .0 1 vs C)其 NBT还原能力与 KS相当 (P >0 .0 5) .结论　 Andi对 HL - 60细胞具有显著的诱导分化作用     

醋酸棉酚对白血病HL-60细胞凋亡及分化的影响

目的:通过醋酸棉酚(GAA)对经典白血病细胞系HL-60的研究,探索GAA治疗白血病的可能性. 方法: 用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度GAA促进HL-60细胞凋亡及诱导分化的作用. 结果: GAA在浓度》6 μmol/L时可显著抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量效应;在诱导分化浓度下(1, 4 μmol/L),GAA可促进HL-60细胞向成熟粒细胞分化(P《0.05). 结论: GAA对白血病细胞HL-60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

PBK/TOPK在TPA诱导的人HL-60细胞分化中的表达及意义

目的:研究PBK/TOPK在TPA(佛波酯)诱导白血病细胞HL-60的分化时的表达及意义.方法:细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪检测药物对HL-60细胞周期及细胞表面分化抗原CD11b,CD14,CD13和CD33表达的影响;用western Blot法检测PBK/TOPK在HL-60细胞分化前后表达的变化.结果:经5.1 nmol/L TPA处理72 h后,NBT阳性细胞数和CD11b,CD13,CD14表达是增加的,HL-60细胞体积缩小,核浆比例减低,核仁减少甚至消失,核形态扭曲折迭或分叶;PBK/TOPK在HL-60细胞向成熟分化后表达下调.结论:TPA能抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其向成熟单核、粒细胞分化,在此过程中,PBK/TOPK表达是下调的,但Pho-PBK/TOPK的表达是增加的.     

中药抗癌制剂对HL-60细胞的分化诱导研究

以人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,运用中药抗癌制剂对其进行体外培养和诱导分化 ,发现剂量在 2 0ul/ml时 ,可显著地抑制HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有NBT还原能力和吞噬功能。其形态的改变和吞噬能力与对照组维甲酸和中药苦参相似 (P >0 0 5 ) ;其NBT还原能力与苦参相当 (P >0 0 5 ) ,但稍低于维甲酸 (P <0 0 5 )。上述结果表明该制剂对HL - 60细胞具有较好的分化作用。     

参附注射液、高乌甲素注射液诱导白血病细胞株HL-60分化、凋亡的研究

[目的] 观察参附注射液及高乌甲素注射液诱导白血病细胞株 HL-60 分化、凋亡的作用,初步验证温阳法治疗肿瘤的理论.[方法] 采用人类急性白血病细胞株 HL-60 为模型,设参附注射液组 (终浓度分别为 12.5、25、50、100μL/mL),高乌甲素组 (终浓度分别为 25、50、100 μL/mL),亚砷酸钠对照组 (终浓度分别为 0.25、2、15 μmol/L) 及阴性对照组;检测细胞增殖、细胞形态、硝基四氮唑蓝 (NBT) 还原能力、细胞周期分布、凋亡率等指标.[结果] 参附注射液作用后 HL-60 细胞增殖受抑制,高乌甲素注射液对 HL-60 的生长无抑制作用;经药物处理 60 h 后 HL-60 细胞均出现程度不同以凋亡为主的形态改变;低浓度参附注射液 (12.5 μL/mL)、高乌甲素注射液(50μL/mL) 作用60 h 后 HL-60细胞NBT 还原能力增强,而其他浓度组NBT还原能力反未增强;药物处理 60 h后,100 μL/mL 高乌甲素液及 25.50 μL/mL 参附液流式细胞仪检测直方图上呈现亚二倍体凋亡峰,凋亡率呈不同程度增高.[结论] 参附注射液、高乌甲素注射液对人类急性白血病细胞株 HL-60 具有不同程度的诱导分化和凋亡的双重作用,为温阳法治疗肿瘤提供了一定的理论依据.     

抗CD44单克隆抗体A3D8对人白血病细胞系HL-60细胞增殖及分化的影响

目的 探讨抗CD44单克隆抗体A3D8对HL-60细胞增殖及分化的影响，寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点。方法 以AML细胞株HL-60为模型，通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、细胞周期和细胞因子表达，以及应用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验来研究抗CD44单克隆抗体A3D8对细胞增殖及分化的影响。结果 HL-60细胞高表达CD44；A3D8以浓度和时间依赖性方式抑制HL-60细胞生长。A3D8使HL-60细胞周期阻滞在G0／G1期，CD11b、CD14表面抗原阳性率明显增高，细胞体积增大，核／浆比例减小，核染色质聚集，NBT还原实验阴性，细胞表达粒细胞集落刺激因子mRNA，呈现向单核细胞系方向分化。结论 A3D8可抑制HL-60细胞增殖，并诱导其向单核系细胞分化，CD44有可能成为AML治疗的新途径。     

DADS诱导HL-60细胞分化中的信号传导相关蛋白

目的 研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人髓性白血病HL-60细胞分化过程中蛋白质组的差异表达.方法 运用蛋白质组学方法(双向凝胶电泳、质谱分析、生物信息学方法)分析鉴定DADS诱导HL-60细胞分化的差异表达蛋白质.结果 DADS作用HL-60细胞后,细胞形态发生明显变化,NBT还原能力明显增强.与未处理组比较,初步鉴定的差异蛋白质DJ-1蛋白在处理组中表达下调,其功能与转录调节有关.结论 DADS可能通过抑制DJ-1蛋白合成,活化PIAS蛋白抑制STATs转录因子的活性,进而抑制JAKs/STATs信号传导通路,诱导HL-60细胞分化.     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的：探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法：从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC，体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中，采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化，采用免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定。结果：诱导1h、2h、3h后有部分细胞表达神经干细胞标志蛋白nestin，且随诱导时间延长呈下降趋势；诱导5h后，大部分细胞具有典型神经元形态，表达神经元标志物，神经元特异性烯醇化酶(NSE)，少部分细胞呈星型胶质细胞状，表达胶质细胞标志物—胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论：骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞和星型胶质样细胞。     

大鼠全骨髓细胞诱导分化神经细胞的实验方法研究

目的：摸索从全骨髓诱导培养分化神经细胞的方法，并从形态学上观察其演变规律。方法：抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养．用光镜观察不同阶段的形态，荧光激活细胞计数仪(FACS)追踪由骨髓到神经元样细胞不同阶段nestin和Neuronal nuclei(NeuN)的表达趋势，给予定性、定量，以及免疫细胞化学鉴定。结果：骨髓细胞至10天开始分化，逐渐发育成为神经元样细胞。Nestin在15天时达到高峰为22．7％，NeuN于30天达到高峰为41．2％，而此时nestin阳性细胞为5．9％。免疫细胞化学鉴定出神经干细胞、神经元和胶质细胞，结论：建立了全骨髓细胞体外分离、培养的条件，具有简捷和高效的价值。     

不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响

目的:通过观察人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化诱导效率,探讨不同造血微环境对造血发生的影响.方法:本实验诱导人胚胎干细胞分化为造血细胞的方法采用两步法:先用细胞因子培养形成5 d的拟胚体,然后再模拟体内造血发生的微环境,分别用人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞诱导拟胚体10 d,通过流式细胞术检测细胞的flk,CD34和CD45表面抗原表达情况,观察3种基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响.结果:5 d拟胚体与卵黄囊基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别1.80%±0.56%,1.30%±0.14%,1.05%±0.63%;与胎肝基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达为flk,CD34,CD45百分率分别为34.0%±25.45%,38.4%±24.8%,72.6%±25.7%;与骨髓基质细胞接触培养10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为2.50%±1.48%,3.20%±0.56%,1.65%±0.21%;5 d拟胚体自发分化10 d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为0.30%±0.07%,0.65%±0.07%,0.15%±0.07%.与自发分化10 d比较,3种基质细胞与5 d拟胚体接触培养,均能够促进拟胚体向造血细胞的分化,且胎肝基质细胞诱导的效率显著优于其他两种基质细胞(P＜0.05).结论:与卵黄囊基质细胞和骨髓基质细胞比较,胎肝基质细胞更有利于诱导人胚胎干细胞向造血细胞的分化.     

丁酸对人肺癌细胞的生长,细胞周期和形态的影响

运用鉴别细胞群体生物学特性的常规方法和流式细胞光度术(FCM),我们研究了正了酸对人肺癌细胞(PLA-801D)的某些生物学作用。当培养液中含2或3mmol/L丁酸时,细胞分裂和增生受到明显抑制,群体倍增时间几乎延长1倍,细胞周期行进受阻,大多数细胞阻断在G1期,平皿集落形成率从23.9％降为1.9％,饱和密度从237.4万/ml降至48.8万/ml,细胞群体提前3d进入饱和状态。与此同时,细胞变扁平,几乎丧失叠堆生长能力,表面膜活动减弱,核形趋于规则,染色质颗粒分散变稀疏,细胞间粘着连接明显增多。以上发现提示丁酸可使PLA-801D肺癌细胞获得一些相对正常的生长特性和表型,显示丁酸对该细胞有一定程度的分化诱导作用和潜在的抗癌作用。     

Primary culture and identification of sinoatrial node cells from newborn rat

Objective To establish a reliable approach to primary culture and identification of sinoatrial node (SAN) cells.Methods The SAN cells were cultured from SAN tissue removed from neonatal Wistar rats and purified with differential attachment and 5’-bromodeoxyuridine (BrdU) treatment. The obtained cells were morphologically observed with inverted microscopy and transmission electron microscopy. Its action potential was recorded using electrophysiological methods.Results Three distinctly different cells were observed in the cultured SAN cells: spindle, triangle and irregular. Of these, the spindle cells comprised the greatest proportion, with their shape, structure and electrophysiological characteristics consistent with those of the pacemaker cells of SAN. The triangle cells were similar in features to the similarly shaped myocytes located in the atrial myocardium.Conclusions The culture method of differential attachment combined with BrdU treatment is a reliable approach to growing SAN cells. Of the cells cultured from SAN, the spindle cells appear to function as pacemaker cells.     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

三带喙库蚊细胞系的建立及其特征研究

从三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)初孵幼虫组织建立了一个细胞系(CT-188),细胞生长于改良199培养基中。蚊卵的表面消毒方法简化为仅以70％酒精消毒10min。组织块接种后10～11d,可形成原代单层。传代细胞接种后,可在30min内贴壁,在48h达到分裂高峰,36～84h为细胞的对数生长期。细胞类型以梭形细胞为主(约占95％),掺杂少数圆形及不规则细胞。细胞核学特征以二倍体(2n=6)为主(约占80％以上)。目前,细胞已传至34代,均冷冻保存于液氮(-196℃)中,且复苏成功。经鉴定本细胞系无病毒及支原体污染。     

穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：观察穿心莲内酯（Andro）对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法：取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组, MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25 μmol•L^-1) DMSO 、4H-Andro 及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度（IC50）;Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果：通过浓度筛选,Andro平均IC50为8 μmol•L^-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol•L^-1 Andro处理24 h后U87细胞增殖活性降低（P<0.01）,增殖抑制率达到50%;Andro处理96 h时,U87细胞增殖活性进一步降低（P<0.01）,增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8 μmol?L-1 Andro处理48 h后, U87细胞中NF-κB（即磷酸化p65）蛋白表达强度下降（P<0.01）。结论：Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。     

Stereological Analysis of Peritubular Cells in Aging Mouse Testes

Objective To analyse quantitative changes of testicular peritubular cells in aging mice, and meanwhile investigate age-related changes in both Sertoli cells and germ cells with stereology. Methods Thirty male Kunming mice were enrolled in this study. The aged mice (n=15) were 18 months old. The young mice (n=15) were 6 months old, as the control. Haematoxylin and eosin staining was used to observe histological changes. Pathological evaluation rules of assignment scores were made to evaluate. Stereology techniques were applied to quantitatively analyse histological structure of the testicular tissues. Results Compared with young group, pathologic assignment scores of aging group were significantly higher (P<0.05). Diameter of seminiferous tubules in aging mice was atrophied significantly (P<0.05). Germ cell numerical density and Sertoli cell volume density of aging group were reduced significantly compared with young group (P<0.05). No significant differences were found in peritubular cell parameters compared with young group (P>0.05). Conclusion The pathological assignment scores suggest a succession of changes on the testis with age. The stereological numbers demonstrate damaged Sertoli cells and decreased germ cells, which is indicative of spermatogenic disturbance. However, no significant quantity changes of peritubular cells is observed in aging mice.