乙型肝炎动物模型的研究

目的建立树鼩和熊猴的乙肝动物模型.方法用含HBV的人血清接种给7批30只熊猴,6批233只树鼩,每周定期采血、定期肝组织活检.用改良赖氏法、ELISA、PCR、原位杂交、免疫组化分别检测血清ALT、HBV标志物、HBV-DNA及肝组织中HBsAg和HBV-DNA.结果树鼩接种人HBV(HHBV)后,90%呈急性感染,56%为可持续1年以上的慢性感染,33%持续2年2月,肝细胞内HBsAg阳性率达80%,熊猴接种HHBV后,血清HBV标志物呈一过性,个别猴肝细胞内HBAg呈弱阳性.结论熊猴对HHBV并不敏感,而树鼩对HHBV感染有较高的敏感性,有望成为HHBV的动物模型.     

人乙型肝炎病毒在树鼩中传代感染的研究

用人乙型肝炎病毒(HHBV·)感染树鼩(Tree shrews)后,取其HBsAg及(或)HBeAg阳性的树齣血清传代感染另一批树鼩;18只树鼩分四批感染至第四代,经检测发现17只树鼩血清或肝细胞中HBV标志物阳性(94.4%);血清转氨酶(SGPT)升高,肝组织有不同程度的炎症变化。此结果表明HHBV能够在树鼩间连续传代复制,为人乙型肝炎病毒感染树鼩动物模型的建立提供又一佐证。     

用原位杂交对HBV和AFB_1与树鼩肝癌发生关系的研究

用生物素标记的HBV DNA探针对经83～158周实验的55只树鼩肝组织的福尔马林固定、石蜡包埋的切片进行原位杂交研究。有45只树鼩接种过HHBV,在肝细胞检出HBV DNA的有30只,另15只肝内HBV DNA阴性。这55只树鼩,有41只摄入了AFB_1,其中肝HBV DNA阳性的A组22只有10只发生PLC;19只HBV DNA阴性的B组,只发现2例PLC。两组差别显著(P<0.05)。未接触过AFB_1的14只树鼩中,肝内HBVDNA阳性的8只(C组),有1例出现PLC;而HBV DNA阴性的6只(D组)无PLC发生。结果表明:HHBV和AFB_1在PLC发生中起协同作用,支持了HHBV感染与PLC存在病因学关系的观点。     

熊猴实验感染人乙型肝炎病毒的研究

本项研究选用七只熊猴,均无人乙型肝炎病毒的自然感染,经下肢静脉接种急、慢性乙肝病人血清后,每2～4周采血1次,进行肝功能检测和采用RPHA法、ELISA法、SPRIA法、斑点杂交及电镜进行多项HBV血清学标志物和病毒颗粒检测,通过不同时期的肝活检进行光、电镜动态病理学观察,使用组化、免疫组化和原位杂交等法检测肝细胞内的HBsAg、HBcAg和HBV-DNA。结果表明各猴血清中均检出HBsAg、抗-HBs、抗HBc、HBV-DNA、Dane颗粒及球形颗粒,伴SGPT持续异常升高,七只猴各2～4次肝活检所见的动态病理学改变,均与乙肝病人急性至慢性病变的演变规律相同,并在肝细胞内检出HBsAg、HBcAg和HBV-DNA。此外,用接种人HBV后的阳性猴血传代接种给健康熊猴获得感染成功。     

供乙肝疫苗质检用的新动物模型——乙肝疫苗预防树鼩感染HBV的研究

接种乙肝疫苗的10只树鼩,9只血清出现抗-HBs。注射含HBV的人血清后,其中只有1只血清出现短暂的HBsAg,保护率为88.88％;其血清抗-HBc始终阴性。未接种乙肝疫苗的10只对照树鼩注射HBV人血清后,5只血清HBsAg阳性;8只抗-HBc阳性。接种疫苗组HBV感染率显著低于对照组(p<0.01)。实验前所有树鼩血清HBsAg、抗-HBs及抗-HBc均阴性。实验结果表明:1)乙肝疫苗能阻断树鼩感染HBV,进一步确证树鼩能感染HBV,是用于研究HBV的有用的动物模型;2)树鼩可能代替黑猩猩进行乙肝疫苗安全性和免疫保护效果鉴定之用。     

血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者肝内HBV DNA原位杂交分析

本文采用原位杂交及免疫组化方法对23例血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者的HBV感染状态进行了研究。发现肝内乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),HBsAg,HBcAg的检出率分别为43.48％、38.89％.16.67％;肝内有HBV感染依据者占65.22％,表明半数以上的血清HBV标志或HBsAg阴性患者肝内仍然存在HBV复制或基因表达。含HBV DNA的肝细胞及表达HBsAg,HBcAg的肝细胞大多毗邻灶状坏死和(或)碎屑样坏死灶,提示HBV复制及其产物表达与患者的慢性化、活动性坏死性炎症密切相关。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系。方法检测76例慢性乙型肝患者血清及肝组织外周血HBsAg，如BeAg和HBV DNA水平，常规病理和肝组织内的HBsAg，HBcAg。结果外周血中HBeAg阳性的患者中有91．49％HBV DNA阳性，而在如BeAg阴性的患者中，有58．62％的患者HBV DNA阳性，只有慢性乙型肝炎轻度患者的血清HBV DNA水平与其他各组差异有显著性（P〈0．05），而其余各组之间HBV DNA的复制水平均无明显差异，中度以上的血清HBV DNA多呈高水平分布。所有样本肝组织的HBsAg均为阳性，从肝组织不同HBsAg表达强度下，HBcAg表达的趋势来看，HBcAg有随着HBV DNA量的增加而表达增强的趋势。结论患者血清HBV DNA水平的变化可以反映HBV的复制水平而不能反应肝脏损伤程度。同时肝组织内的HBsAg检测更适合于低水平HBV感染的患者。     

实验感染乙型肝炎病毒的树鼩血清HBsAg及抗-HBs的表现类型

57只实验树鼩接种HBV后,用分子杂交技术、电镜及肝组织免疫酶标方法检测,有39只证实已获感染.这39只动物血清HBsAg及抗-HBs(PHA)表现有6种形式,与人感染HBV后的表现形式相似.表明树鼩是可用于HBV实验感染研究的较好的动物.     

一例熊猴感染乙型肝炎病毒四年的血清学及肝组织光、电镜观察报告

文献报道,可用黑猩猩、猕猴、长臂猿、树鼩等灵长类动物作为乙型肝炎研究的动物模型。目前认为对乙型肝炎病毒(HBV)比较敏感的动物是黑猩猩,但是黑猩猩来源极少,价格昂贵,难于满足需要。为此,探讨发现更理想的动物,具有重要现实意义。我们在实验中发现1只熊猴的血清中存在人HBV的核心抗体,且在注射乙肝病人血清攻毒后该熊猴血清出现HBV表面抗体,肝活检发现肝细胞内存在乙肝表面抗原及乙肝病理变化,肝功能异常,谷丙转氨酶显著升高,此现象持续4年41天。熊猴感染乙型肝炎病毒实验的报告,在国内外文献中尚未见报道。材料和方法     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。