黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、蛋白多糖基因(ACAN)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~75mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞Col Ⅱ和ACAN mRNA的表达量均较对照组显著增加。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,促进软骨细胞ColⅡ及ACAN mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

跌打通痹膏对兔膝骨关节炎关节软骨MMP-13、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的：观察跌打通痹膏对兔膝骨性关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、Ⅱ型胶原mRNA （COL-Ⅱ mRNA）表达的影响。方法选用65只新西兰兔随机分成正常对照组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组13只。模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组采用改良Hulth造模法,正常组、假手术组不予处理,模型组、跌打通痹膏组、骨痛贴组分别用胶带、跌打通痹膏、骨痛贴膏贴敷4周,观察治疗后各组实验兔关节软骨改变情况,并检测关节软骨中 MMP-13、COL-Ⅱ mRNA的表达。结果（1）组织学关节软骨评分：跌打通痹膏组评分较模型组低（P<0.05）。（2）MMP-13mRNA检测：模型组MMP-13表达较正常对照组显著提高（P<0.01),跌打通痹膏组MMP-13 mRNA表达较模型组降低（P<0.01)。（3）COL-ⅡmRNA检测：跌打通痹膏组COL-Ⅱ表达较模型组升高（P<0.01）。结论跌打通痹膏能通过降低Ⅱ型胶原降解,抑制MMP-13 mRNA表达,从而有效保护膝骨关节炎模型兔关节软骨,延缓关节软骨退变。     

高选择性非甾体抗炎药塞来昔布对大鼠骨关节炎关节软骨的影响

目的探讨长期应用高选择性NSAIDs（塞来昔布）对大鼠骨关节炎关节软骨代谢的影响。方法采用左侧跟腱切除术诱发wistar大鼠同侧膝关节骨关节炎（OA），分4组，每日给赛来昔布24mg／kg（CE组）、布洛芬72mg／kg（IBP组）、吲哚美辛9mg／kg（IN组）及生理盐水（NS组）。观察3、6及9个月后关节软骨组织学、蛋白多糖（PG）含量、Ⅱ型胶原表达及软骨细胞超微结构的变化。结果CE、NS组软骨表现为OA的渐进过程，CE组改变较NS组轻；IN组软骨损害明显重于NS组；IBP组介于两者之间。CE明显增加OA软骨基质PG含量；IBP的短、中期应用对PG的含量无明显影响，其长期应用减少PG含量；IN明显减少PG含量。CE、IBP促进OA软骨细胞Ⅱ型胶原的表达，IN抑制Ⅱ型胶原的表达。电镜观察：CE组、NS组的软骨细胞表现类似，但CE组可见发达的粗面内质网、高尔基复合体；IBP组：细胞周晕逐渐消失，核染色质结构模糊；IN组：软骨细胞的电子密度明显增加、溶解性坏死多见。结论塞来昔布可抑制大鼠OA关节软骨的退变，对退变的关节软骨可能有一定的修复作用。     

益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠关节软骨退变的防治作用

目的：研究益气化瘀方对膝骨关节炎大鼠模型关节软骨退变的防治作用及其机制。 方法：1月龄SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组和益气化瘀方组,每组各30只。模型组,益气化瘀方组大鼠通过肩关节离断术＋直立位诱导法建立大鼠膝骨关节炎模型。益气化瘀方组大鼠分别于5、7、9月龄（即造模术后4、6、8月）开始用药,连续用药1个月。3组大鼠分别于6、8、10月龄（即造模术后5、7、9月）处死,每次10只。处死后取大鼠膝关节,行番红O／固绿染色观察关节形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测各组关节软骨内Ⅱ型胶原基因（type Ⅱ collagen gene,Col2A1）、聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）以及金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达的情况。 结果：模型组关节软骨结构破坏严重,而益气化瘀方组大鼠关节软骨退变较模型组明显减轻。实时荧光定量PCR结果显示,益气化瘀方组6和10月龄大鼠膝关节软骨Col2A1、Agc1以及TIMP-1 mRNA表达量高于模型组（P〈0．01,P〈0．05）,MMP-13 mRNA表达与模型组比较差异无统计学意义;益气化瘀方组8月龄大鼠Agcl mRNA表达明显高于模型组（P〈0。01）,MMP-13 mRNA表达明显低于模型组（P〈0．01）。 结论：益气化瘀方可通过促进软骨合成聚集蛋白聚糖与Ⅱ型胶原,延缓膝骨关节炎大鼠关节软骨的退变。     

关节软骨细胞线粒体功能障碍与软骨退变的关系

目的:探求骨关节炎患者软骨细胞中线粒体功能状况及线粒体功能与软骨退变的关系.方法:收集2012年4月至10月在北京大学第一医院因骨关节炎(osteoarthritis,OA)行膝关节置换术患者的关节软骨10例.根据Outerbridge分级对所取软骨组织进行透射电子显微镜观察.获取正常及OA软骨细胞,用透射电子显微镜观察2组软骨细胞线粒体形态.定量检测正常及OA软骨细胞线粒体呼吸链复合体酶1,2,2+3,4及ATP合酶活力,用JC-1法检测2组软骨细胞线粒体膜电位.获取10例正常软骨细胞并将其分为正常对照组和鱼藤酮处理组,比较2组细胞线粒体超微结构、线粒体膜电位、细胞凋亡及Ⅱ型胶原含量.结果:软骨组织块及软骨细胞电子显微镜均发现病变的软骨细胞线粒体发生肿胀,外膜破裂,嵴破坏、消失.OA软骨细胞线粒体膜电位下降,红绿荧光比为1.50,较正常细胞(2.58)低.OA软骨细胞呼吸链复合酶1,2,2+3,4及ATPase活力都较正常组低,但差异无统计学意义(P =0.109,0.197,0.098,0.169,0.145).鱼藤酮处理的细胞线粒体出现类似于OA软骨细胞的形态变化.JC-1法示正常软骨细胞红绿荧光比为2.58;鱼藤酮组细胞为1.78.细胞凋亡检测示正常软骨细胞凋亡率为4.38％,鱼藤酮组细胞为7.53％.正常软骨细胞Ⅱ型胶原含量为(72.9±24.3) μg/L,鱼藤酮组为(44.63±7.11)μg/L,较正常组低(P =0.044).结论:OA软骨细胞中存在线粒体功能障碍,破坏软骨细胞线粒体功能会导致软骨细胞凋亡率增加,分泌Ⅱ型胶原的能力下降,从而促进软骨退变.     

强力霉素对OA模型软骨中Ⅱ型胶原和MMP-13表达的影响

目的：通过观察强力霉素对兔膝关节制动骨关节炎模型软骨Ⅱ型胶原含量和基质金属蛋白酶-13表达的影响,探讨其对骨关节炎的治疗作用及其作用机制。方法：健康成年新西兰大白兔18只,随机分为正常组、对照组和给药组,每组各6只。对照组和治疗组兔左下肢以石膏固定于伸直位4周,然后治疗组每日给予口服强力霉素治疗。4周后同时处死,观察股骨内髁关节面的病理改变,并检测软骨Ⅱ型胶原含量和基质金属蛋白酶-13水平。结果：治疗组关节软骨增生性反应较对照组明显减轻。Mankin评分和Ⅱ型胶原含量增高（P〈0．01）,基质金属蛋白酶-13表达减少（P〈0．01）。治疗组与对照组和正常组三组之间相互比较均有显著统计学差异。结论：强力霉素可增高Ⅱ型胶原含量,改善软骨结构,其作用与强力霉素抑制软骨基质金属蛋白酶-13的表达有关。     

骨炎定含药血清对人骨关节炎软骨细胞保护作用的机理探讨

[目的]观察骨炎定含药血清对人骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原(collage Ⅱ)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。[方法]SD大鼠10只,给予骨炎定2.4 g·kg-1·d-1灌胃,空白对照组给予等容积生理盐水灌胃,连续1个月,采血得含药血清和空白血清;从髋关节炎行关节置换术中获取离体股骨头关节软骨,进行软骨细胞分离培养;治疗组加入骨炎定含药血清,空白对照组加入空白血清,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测含药血清对软骨细胞增殖的影响,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测含药血清对软骨细胞iNOS和collage Ⅱ信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。[结果]骨炎定含药血清可促进软骨细胞增殖,降低iNOS mRNA的表达,增强collage ⅡmRNA的表达,与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。[结论]补肾益气活血方剂骨炎定治疗骨性关节炎的疗效可能与其促进软骨细胞增殖,抑制iNOS表达,增强Ⅱ型胶原表达,保护软骨细胞的作用有关。     

同种异体组织工程化软骨组织的生化分析

目的 以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异。方法 以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹部皮下。按不同时间段取材,Western-blot、MTT比色法分析测定其GAG和Ⅱ型胶原含量,并与正常关节软骨组织比较。结果 新生软骨中GAG的含量比正常关节软骨显著下降(P<0.01),而Ⅱ型胶原含量与正常关节软骨无显著性差异。结论 胚胎来源的同种异体组织工程化软骨与正常关节软骨有着相同的生化成分,且新生软骨中Ⅱ型胶原的含量与正常关节软骨接近。     

胶原-纤维蛋白混合凝胶对关节软骨细胞合成Ⅱ型胶原的影响

目的：以胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体在体外进行关节软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,研究载体对软骨细胞在其中的表达及合成Ⅱ型胶原的影响。方法：取2周龄的新生兔关节软骨,经消化,将获得的软骨细胞与牛Ⅰ型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合,制成软骨培养物并在体外培养。培养第3周时,取材进行Masson染色、Ⅱ型胶原寡核苷酸探针原位杂交和Ⅱ型胶原的免疫组化观察。 结果：体外培养3周,培养物内细胞大部分存活, Masson染色形成软骨陷窝,同源性细胞簇出现,细胞周围有蓝色物质环绕存在,原位杂交证实其软骨细胞表达Ⅱ型胶原mRNA,免疫组化证实软骨细胞分泌Ⅱ型胶原。 结论：用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可促进关节软骨细胞合成分泌Ⅱ型胶原,Ⅱ型胶原是软骨组织最主要的细胞外基质成分。     

益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎关节软骨细胞胶原和基质金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的：探讨益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎（KOA）模型软骨细胞Ⅱ型前胶原基因（Col2A1）、X型胶原基因（ColX）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）mRNA表达的影响。方法：36只新西兰兔随机分为假手术组、模型组和益气化瘀补肾方组,每组12只。模型组和益气化瘀补。肾方组家兔采用改良Hulth方法复制KOA模型,假手术组仅切开膝关节表面的皮肤。益气化瘀补肾方组家兔于造模4周后连续用药1个月。观察各组软骨病理形态学变化及Col2A1、ColX和MMP-13mRNA变化。结果：模型组关节软骨结构破坏较严重,而益气化瘀补肾方组家兔关节软骨退变较模型组明显减轻。益气化瘀补。肾方组家兔膝关节软骨Col2A1mRNA表达明显高于模型组（P〈0．01）,ColX、MMP-13mRNA表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）,但与假手术组比较仍有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：益气化瘀补肾方可通过促进软骨合成Col2A1和抑制MMP-13及ColX胶原以延缓KOA家兔关节软骨的退变。     

骨关节病与大骨节病关节软骨细胞凋亡的比较

目的比较成年人大骨节病与骨关节病关节软骨细胞凋亡及凋亡相关调控因子Fas和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达分布特点,探讨两种疾病发病机制的异同。方法收集15例大骨节病、15例正常对照以及15例骨关节病的关节软骨,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和免疫组化法,观察大骨节病、骨关节病和正常对照关节软骨的细胞凋亡率、Fas及iNOS蛋白表达及其分布特点。结果大骨节病及骨关节病关节软骨细胞凋亡率较正常对照高(P<0·01),且关节软骨剥蚀区的细胞凋亡率较未剥蚀区高(P<0·05),但大骨节病与骨关节病之间软骨细胞凋亡率差异无显著性。大骨节病与骨关节病关节软骨Fas及iNOS表达阳性细胞数较正常关节软骨增多(P<0·01),且关节软骨剥蚀区Fas及iNOS表达阳性细胞数较未剥蚀区增多(P<0·05),但大骨节病与骨关节病之间Fas及iNOS表达阳性细胞数差异无显著性。结论骨关节病和大骨节病均存在软骨细胞异常凋亡,Fas和iNOS可能参与了细胞凋亡过程。     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞iNOS表达和NO合成的影响

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔原代软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖,免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原;用IL-1β10 ng/ml和(或)不同浓度(5、10、15、20μg/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48 h后,RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达;用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果软骨细胞呈三角形或多角形,蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核。与对照组比较,IL-1β单独作用软骨细胞iNOS和NO的表达显著增加(P<0.01);IL-1β和川芎嗪联合作用后,软骨细胞iNOS和NO的表达较IL-1β单独作用显著降低(P<0.05,P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。结论川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞iNOS的表达和NO的合成。     

大骨节病与骨关节病患者软骨细胞凋亡及其机制的比较研究

目的比较分析大骨节病与骨关节病关节软骨中细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达分布特点，探讨两病发病机制的异同。方法收集大骨节病和骨关节病的关节软骨各15例．并以15例正常人作对照。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记（TUNEL）技术和免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶（B-SA）法染色，观察大骨节病、骨关节病和正常对照关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNOS蛋白阳性表达率及其分布特点。结果（1）大骨节病及骨关节病关节软骨凋亡阳性细胞数较正常关节软骨增多（F=20．90～53．16，df=42，P〈0．01），且关节软骨剥蚀区的凋亡阳性细胞数较未剥蚀关节软骨区增多（t=4，154-6.004，df=28，P〈0.01），但大骨节病与骨关节病之间软骨细胞凋亡阳性数无显著性差异（t=1.329～1.362，df=28，P〉0.05）。（2）大骨节病与骨关节病关节软骨Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性细胞数较正常关节软骨增多（F=25.46-215.31，df=42，P〈0．01），且关节软骨剥蚀区Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性细胞数较未剥蚀区增多忙2．278～7.77，df=28，P〈0．05），但大骨节病患者与骨关节病Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达阳性细胞数无显著性差异（t=0.284-1．590，df=28，P〉0．05）。结论大骨节病与骨关节病均有相似的细胞凋亡，而且凋亡机制相同，即Bcl-2、Bax、Fas及iNos途径。     

首乌延寿丹对家兔骨关节炎的防治作用及其可能机制

目的观察首乌延寿丹对兔骨关节炎（Osteoarthritis,OA）的防治作用。方法将24只日本大耳白兔随机分成空白对照组、模型组、首乌延寿丹组。ACLT术[1]制作OA模型。于第12周末观察软骨病理形态学改变;免疫组化法测定软骨Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的表达。结果以ACLT术成功建立了OA模型。首乌延寿丹组病变明显减轻,Ⅱ型胶原的蛋白表达明显升高（P〈0.01）;MMP-1表达明显降低（P〈0.01）。结论首乌延寿丹可明显抑制OA发展,这一作用可能是通过增加Ⅱ型胶原的蛋白表达、下调MMP-1表达来实现的。     

人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型的建立及其意义

目的 建立人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型,观察人正常颈椎椎体和退变颈椎椎体终板软骨细胞的形态及表征.方法 选择2010年7月至2011年7月49例颈椎骨折、脱位(19例)及颈椎病(30例)患者术中取出的颈椎终板软骨,用酶消化法分别分离培养人正常颈椎椎体终板软骨细胞(对照组)和退变颈椎椎体终板软骨细胞(颈椎病组);用倒置显微镜和HE染色法观察细胞形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;甲苯蓝染色及反转录-PCR(RT-PCR)法对终板软骨细胞进行鉴定;RT-PCR法检测终板软骨细胞特征性基因蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Ⅰ型胶原的表达.结果 人颈椎椎体终板软骨细胞表达特征性蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Ⅰ型胶原,其生长情况及细胞表型类似于关节软骨细胞.对照组原代终板软骨细胞以多角形为主,增殖速度较快;而颈椎病组原代终板软骨细胞以梭形为主,细胞增殖速度较慢.颈椎病组原代终板软骨细胞表达的蛋白多糖基因(0.695 ±0.052)和Ⅱ型胶原基因(0.726 ±0.035)均低于对照组(0.950±0.032、0.907±0.078,t=7.263、3.681,P=0.002、0.021),Ⅰ型胶原基因则高于对照组(0.795±0.028比0.552±0.070,t=-5.560,P=0.005).结论 成功建立了人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型,为椎间盘退变机制研究提供了较好的细胞学基础,解决了以前一直以动物细胞模型为研究对象的局限性.     

大骨节病与骨关节病软骨组织死亡相关因子表达的比较

目的观察大骨节病软骨组织中程序化细胞死亡分子5（programmed cell death 5, PDCD5）和早期生长反应蛋白1（early
growth response protein-1, EGR-1）表达的变化及其在大骨节病软骨损伤中的作用。方法收集来自大骨节病患者关节软骨（KBD
组）10例,同时收集15例骨关节炎病人关节软骨（OA组）作为疾病对照,收集6例正常软骨作为健康对照（正常组）。采用免疫组化
染色法检测3组关节软骨组织中死亡受体调节因子PDCD5和EGR-1表达变化,并在显微镜下计数和分析3组关节软骨不同分层
间阳性表达率的显著性差异。结果（1）KBD软骨中层PDCD5阳性细胞表达率（41.35±2.97）%显著高于OA组（26.48±2.04）%和
正常组（19.02±1.88）%（P=0.001和P=0.000）,KBD软骨深层显著高于正常组和OA组（P=0.000和P=0.029）,OA组也高于正常组
（P=0.038）,而3组间的表层软骨细胞PDCD5阳性率无差异（P>0.05）;（2）在KBD软骨表层,EGR-1表达显著高于OA软骨和正常
软骨表层（P=0.000和P=0.000）,3组软骨的阳性表达率分别为（27.94±3.09）%、（3.20±1.49）%和（12.66±1.06）%,KBD软骨中层
EGR-1阳性细胞表达率显著低于OA组软骨（P=0.002）,而高于正常软骨（P=0.017）,KBD软骨和OA软骨深层阳性率均明显高于
正常组（P=0.000和P=0.001）,而KBD组和OA组的平均阳性率无统计学差异（P=0.187）;（3）KBD组与正常组的PDCD5和EGR-1
分别在3个软骨细胞层的表达均无相关性,而PDCD5和EGR-1在OA关节软骨表层呈强正相关。结论KBD软骨深层PDCD5显
著上调,而软骨表层和深层EGR-1显著高表达,提示这两种重要的细胞死亡相关因子在大骨节病软骨破坏过程中发挥重要作用。
     

骨关节炎软骨破坏与凋亡相关蛋白survivin、caspase-3和bcl-xl的表达的相关性研究

目的 研究骨关节炎(OA)患者关节软骨细胞凋亡和软骨破坏的关系,为用药物控制凋亡作为治疗OA的潜在治疗策略提供理论依据.方法 应用原位凋亡方法(TUNEL)检测OA患者(n=20)以及以股骨颈骨折患者为对照组(n=8)的关节软骨细胞的凋亡情况,并通过凋亡软骨细胞的分布来半定量地评估软骨的破坏程度;应用免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白survivin(SVV)、caspase-3和bcl-xl的表达,研究OA软骨破坏与凋亡蛋白表达的相关性.结果 在软骨破坏的相对早期即可以检测凋亡软骨细胞,而且与软骨破坏的程度显著相关(r=0.476,P=0.007),正常对照组组织则含有较少凋亡细胞(P=0.000).SVV表达在有降解损害的软骨细胞和软骨表层细胞中,与正常对照组之间差异有统计学意义(r=0.413,P=0.008),而且与TUNEL染色阳性凋亡细胞的数量有一定的相关性.与SVV相比,caspase-3表达范围较广,在相对正常的软骨区域也可检测到.软骨组织中未见明确的bcl-xl蛋白表达.结论 OA软骨细胞凋亡的程度与软骨破坏程度密切相关,在软骨的降解损害过程中,SVV和caspase-3蛋白的表达对OA软骨细胞的凋亡过程起到一定的作用.     

Sox9基因在终板软骨细胞退变模型中的表达变化及意义

目的 建立大鼠腰椎终板软骨细胞体外自然退变模型,并探讨Sox9基因在终板软骨细胞自然退变中的变化及作用.方法 取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞,建立体外终板软骨细胞培养模型.采取绘制细胞生长曲线、HE、甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色等方法,对该模型进行鉴定.RT-PCR检测各代细胞中Sox9、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化.结果 大鼠终板软骨细胞表达特征性Ⅱ型胶原,其生长情况及细胞表型类似于关节软骨,细胞传至4、5代后表现出细胞形态呈梭形、细胞增殖速度减慢等退变的特征.与原代相比,Sex9基因mRNA在4、5代终板软骨细胞的表达明显下降(P<0.05),受其调控的Ⅱ型胶原mRNA的表达也相应降低,两者表达变化呈正相关(r=0.912,P<0.05).结论 终板软骨细胞自然退变模型成功建立,为椎间盘退变机制研究提供了较好的细胞学基础.Sox9基因与终板软骨细胞自然退变存在明显关联,Sox9基因的表达下降可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成,从而促进或诱发椎间盘的退变.