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相似文献
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1.
目的:研究肝癌细胞中EP3受体剪接体亚型的表达类型及其调控肝癌细胞生长的功能。方法:EP3受体激动剂Sulprostone处理肝癌细胞株观察其生长情况;二维电泳和质谱分析研究EP3受体激动与下游信号蛋白之间的关系;Real-TimePCR实验鉴定肝癌细胞株中EP3受体剪接体亚型的表达类型。结果:10μmol/L Sulprostone处理CCLP1细胞24 h后,细胞生长率上调了31.46%(P<0.01);给予CCLP1细胞10μmol/L Sulprostone处理24 h后,二维电泳和质谱实验的结果显示促进细胞增殖侵袭、与细胞代谢正相关的蛋白水平升高,降低细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白水平下降;Real-Time PCR实验检测肝癌细胞,结果表明肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种剪接体亚型。结论:EP3受体通过上调促细胞生长代谢蛋白,下调抑制细胞生长代谢蛋白而发挥促进肝癌细胞增殖的作用。肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种EP3受体剪接体亚型。  相似文献   

2.
目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对胆管上皮癌细胞增殖的影响及其可能机制.方法:体外培养胆管上皮癌细胞株(HuCCT1),给予外源PGE2处理,以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率;Fluo-3/AM荧光负载胆管上皮癌细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化情况;并用酶联免疫法测定细胞内环磷腺苷(cAMP)的浓度.结果:PGE2可促进胆管上皮癌细胞生长,而且可使细胞内钙离子和cAMP浓度升高.结论:PGE2影响胆管上皮癌细胞内Ca2 和cAMP浓度,可能与PGE2促进肿瘤细胞生长有关.  相似文献   

3.
前列腺素E2活化EP2受体促进肝癌细胞增殖   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究前列腺素E2(PGE2)对肝癌细胞增殖活性的影响,并探讨其作用主要通过何种前列腺素EP受体介导。方法采用RT-PCR检测肝细胞癌Hep3B细胞COX-2和EP1~EP4受体mRNA的表达水平,cell counting kit-8(CCK-8)细胞计数法检测PGE2和EP2受体激动药butaprost及EP3/EP4受体激动药PGE1 alcohol对细胞增殖的影响。结果人肝癌细胞Hep3B高表达COX-2 mRNA,正常肝细胞QSG7701 COX-2 mRNA表达水平远远弱于前者。四种亚型的PGE2受体EP1~EP4的mRNA在人肝细胞癌细胞株Hep3B均有表达,EP2和EP4受体表达水平明显高于EP1和EP3受体。PGE2呈时间和浓度依赖性地促进Hep3B细胞增殖。孵育细胞48h后,10μmol/L的PGE2表现出明显的促细胞增殖的作用,与未加PGE2的阴性对照组相比,细胞的增殖活性上升22.57%(P<0.001)。0.1、1和10μmol/L的PGE2作用Hep3B细胞72 h后,细胞增殖活性分别较对照组上升12.13%(P<0.01)、17.58%(P<0.01)和33.07%(P<0.001)。20μmol/L的butaprost孵育细胞72 h使细胞增殖活性提高了21.96%(P<0.001),而EP3/EP4受体激动剂PGE1alcohol在浓度为2~20μmol/L的范围内对Hep3B细胞增殖活性无显著影响,当浓度达到200μmol/L时则对细胞的增殖产生抑制作用。结论 Hep3B细胞上的EP2受体被选择性激动后可刺激细胞增殖,提示EP2受体介导了PGE2对Hep3B细胞的促增殖作用。  相似文献   

4.
目的:探讨前列腺素E2受体EP3-Ⅲ对胆管上皮癌细胞生长的影响.方法:采用常规培养的人胆管上皮癌细胞株HuccT1,分别给予不同浓度的EP3受体激动剂sulprostone(0、1、5、10 μmol/L)作用24 h,用WST-8法检测细胞的活性.用RT-PCR方法检测HuccT1细胞表面EP3-Ⅲ mRNA水平的表达.用细胞瞬时转染方法使HEK293细胞表达EP3-Ⅲ蛋白,并用WST-8法检测PGE2对转染HEK293细胞生长的影响.结果:WST-8检测发现,随着sulprostone作用浓度的升高,HuccT1的细胞活性呈浓度梯度依赖性增加.RT-PCR检测发现,HuccT1细胞有EP3-Ⅲ mRNA表达.HEK293细胞瞬时转染EP3-Ⅲ后,WST-8检测发现转染细胞在PGE2 10 μmol/L作用下细胞活性明显增加.结论:人胆管上皮癌细胞株HuccT1表面有前列腺素E2受体EP3-Ⅲ表达,EP3-Ⅲ对细胞生长有显著的促进作用.  相似文献   

5.
目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7 Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性.方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Western blot检测Survivin蛋白表达.结果:5 μmol/L PGE2处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P<0.01);5 μmol/L EP1、5μmol/L EP3、5 μmol/L EP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P<0.01),76.68%(P<0.01),70.01%(P<0.01),而5 μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P>0.05);10 μmol/L EP1,10 μmol/L EP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P<0.01),28.36%(P<0.05),而10 μmol/L EP2受体抑制剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P>0.05);10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P<0.01).结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关.  相似文献   

6.
目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力?方法:用PGE2?EP1~4四种受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2?Butaprost?Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)?EP2受体抑制剂AH6809?腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot?划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化?结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P < 0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P < 0.01)?10 μmol/L EP1~4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P < 0.05),10 μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P < 0.01);10 μmol/L EP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P < 0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P < 0.01)?25 μmol/L AC抑制剂SQ22536?10 μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P < 0.05)和80.78%(P < 0.05)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移?  相似文献   

7.
目的:本研究论证肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞中tRNA-ValAAC-5表达发挥作用及机制。方法:使用Real-time PCR法检测tRNA-ValAAC-5在人正常细胞肝癌细胞(THLE2,THLE3)和HCC细胞株(Hep3B, HuH7, SNU398, Hep3G2)和中的表达。Hep3B和Hep3G2细胞分别转染tRNA-ValAAC-5-inhibitor及对照tRNA-ValAAC-5-NC即为inhibitor组和NC组。两组细胞分别通过CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭转移能力,Western blot法检测p21、基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果:相较于THLE2、THLE3细胞,tRNA-ValAAC-5在Hep3B、HuH7、SNU398、 Hep3G2细胞中相对表达量均有升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与tRNAValAAC-NC相比,转染tRNA-ValAAC-5-inhibitor的Hep3B、Hep3G2细胞tRNA-ValA...  相似文献   

8.
目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmol/L PGE2处理HuH7细胞24h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P<0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P<0.01);10μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P<0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P<0.01),而10μmol/L EP1、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24h后,VEGF的表达水平无明显改变;30μmol/L PKA抑制剂(H89)、500μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24h后,胞浆VE...  相似文献   

9.
目的:研究亚砷酸钠抑制肝癌(HCC)细胞增殖是否与早幼粒细胞白血病(PML)蛋白表达有关。方法免疫组织化学法、免疫荧光、蛋白免疫印迹法(Western blot)和荧光定量PCR检测HCC组织PML蛋白及基因表达。结果免疫组织化学分析显示随机选择15例高分化、中度分化和低分化HCC组织和细胞均不同程度表达PML蛋白。Western blot 分析发现24例HCC组织、HuH7、HepG2、Hep3B、SMMC‐7721和 L02细胞均表达 PML 蛋白。免疫荧光提示 HuH7、HepG2、Hep3B、SMMC‐7721细胞核均有PML蛋白颗粒,其中 HuH7和 Hep3B细胞表达PML蛋白较 HepG2、SMMC‐7721细胞多。24例 HCC组织, Hep3B、HepG2、SMCC‐7721和HuH7细胞都表达PML基因。亚砷酸钠不仅可下调HuH7和原代 HCC细胞表达PML蛋白,而且亚砷酸钠抑制HuH7,HepG2,Hep3B和SMMC‐7721细胞生长,随着暴露时间延长亚砷酸钠对HCC细胞抑制作用增强。结论HCC 组织和细胞系普遍表达PML 基因和蛋白,PML 蛋白可能是砷剂直接靶向作用的分子基础。  相似文献   

10.
目的:探讨前列腺素E2(PGE2)对人胆管细胞癌HuCCT1细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达与酶活性的影响及与EP1受体的关系。方法:分别用PGE2、EP1受体激动剂或抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理HuCCT1细胞,通过RT-PCR、明胶酶谱法检测MMP2的mRNA水平以及MMP2酶活性。结果:5μmol/L PGE2和5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理组MMP2 mRNA的表达水平与对照组相比分别上升了89.14%(P<0.01)和163.89%(P<0.01);MMP2酶活性与对照组相比分别增强了69.11%(P<0.05)和117.65%(P<0.01);10μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后,MMP2 mRNA水平以及MMP2酶活性较PGE2处理组分别下降了47.74%(P<0.05)、84.58%(P<0.01);5μmol/L PGE2或5μmol/L 17-PT-PGE2处理稳定转染EP1R-pcDNA3的人胚肾细胞株HEK293细胞,MMP2的酶活性较对照组分别增强了36.07%(P<0.05)、61.59%(P<0.05)。...  相似文献   

11.
目的:观察乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDH-A)在胆管癌组织及人胆管癌细胞株中的表达情况?方法:应用免疫组织化学方法检测32例胆管癌组织?15例癌旁组织中LDH-A的表达;采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)?Western blot法检测LDH-A在人胆管癌细胞株HuCCT1及人正常胆管上皮细胞株HIBEpic中的表达?结果:LDH-A在胆管癌组织中呈高表达18/32(56.3%,P < 0.01),在HuCCT1细胞中亦呈现高表达,而HIBEpic细胞则表现为低表达?结论:LDH-A在胆管癌组织及人胆管癌细胞株HuCCT1中高表达,说明LDH-A与胆管癌的发生?发展可能具有关联性?  相似文献   

12.
人肝癌细胞株VEGF/VEGFR的检测及意义探讨   总被引:2,自引:1,他引:2  
目的:筛选血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)高表达肝癌细胞株,为进一步研究VEGF在肝癌治疗中的作用提供理论依据。并探讨VEGF受体在肝癌细胞株的表达及意义。方法:ELISA法及Western blot法分别检测人肝癌细胞株培养上清及细胞内VEGF蛋白的表达。免疫细胞化学方法检测VEGFR在人肝癌细胞中的表达。结果:5株肝癌细胞株均见VEGF蛋白表达,其中SMMC-7721的VEGF表达量最高,VEGF特异性受体Fit-1在HepG2、HHCC、SMMC-7721、Bcl-7402见阳性表达,KDR在HepG2、HHCC、Bel-7402、QGY-7701见阳性表达。结论:肝癌细胞株中VEGF表达量不尽一致,VEGF在肝癌发生发展中可能存在自分泌作用方式。  相似文献   

13.
[目的]观察ErBb-3结合蛋白Ebp1mRNA在人肝癌细胞系中的表达.[方法]培养人肝癌细胞系Hep 3B,Hep G2,Huh7和正常人张氏肝细胞,提取总RNA,以P32标记的Ebp1为探针,18S为内参照,采用Northern Blot法检测Ebp1mRNA的表达水平.[结果]Northern Blot法检测结果示,Ebp1mRNA在人肝癌细胞系中的表达水平明显高于正常肝细胞(P〈0.01).[结论]人肝癌细胞系中Ebp1mRNA呈高表达.  相似文献   

14.
目的:通过不同剂量长白山珍珠梅黄酮纳米粒(TTF1-NP)分别诱导不同种人肝癌细胞和人正常肝细胞凋亡,探讨TTF1-NP对不同细胞的作用及涉及的内质网应激作用机制。方法:以体外培养的不同种人肝癌细胞(Hep3B、HepG-2和PLC/PRF/5)和人肝细胞(Chang Liver)为模型,实验分为阴性对照组、阳性对照组(5-Fu)和TTF1-NP实验组,TTF1-NP处理浓度分别为50、100和200 μmol·L-1。采用MTT法检测TTF1-NP对不同种细胞的生长抑制作用,选择最佳抑制效果细胞(HepG-2)为主要研究细胞株;利用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用Western blotting和免疫细胞化学染色技术检测内质网应激关键蛋白表达情况;通过内质网应激抑制剂4-苯丁酸(4-PBA)作用,再次检测相关蛋白的表达情况。 结果:与阴性对照组比较,不同浓度的TTF1-NP组4种细胞生长抑制率升高(P<0.05或P<0.01),且呈一定的浓度和时间依赖关系。细胞凋亡检测,与阴性对照组比较,TTF1-NP实验组随药物浓度增加其细胞凋亡率逐渐上升(P<0.05或P<0.01);内质网应激关键蛋白GRP78和caspase-4 随着TTF1-NP浓度增加,表达水平逐渐升高(P<0.05或P<0.01)。4-PBA有效抑制GRP78和caspase-4表达,与TTF1-NP组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 结论: TTF1-NP可诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡;内质网应激途径是 TTF1-NP 诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的主要作用机制之一。  相似文献   

15.
HEPATOCELLULARcarcinoma(HCC)isoneofthemostcommonanddevastatingmalignanttumors,withanestimatedannualincidenceofonemillioncases,mainlyinAfricanandAsianregions.Inrecentyears,importantadvanceshavebeenmadeinunder standingthemolecularpathogenesisofHCC,butonlyli…  相似文献   

16.
目的:明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝肿瘤细胞系凋亡及其与Smad的关系。方法:选用3种含有不同p53基因状态的人肝肿瘤细胞系,应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝肿瘤细胞的凋亡进行了定量检测。为明确凋亡机制,还应用LF2000把含有Smad结合元件和荧光素酶基因的TGF-β1可诱导的荧光素酶报告质粒对细胞进行了转染,后经TGF-β1作用,分别检测其相对荧光素酶活性。结果:在应用TUNEL检测的3个细胞系中,TGF-β1仅能诱导HepG2细胞(野生型p53)凋亡,而Huh-7(突变型p53)和Hep3B细胞(缺失型p53)则凋亡较少。荧光素酶检测显示,HepG2细胞对TGF-β1反应较强,而Huh-7和Hep3B细胞其荧光素酶的表达较低。结论:HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B细胞系更易发生TGF-β1诱导的凋亡,Smad4也许是TGF-β1信号转导途径的主要调控因子之一。  相似文献   

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