龟鹿二仙胶巴布剂对化疗后患者白细胞减少的干预作用

<正>恶性肿瘤的发病率和死亡率一直居高不下,并逐年上升。据美国国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)于2012年公布的全球范围内癌症死亡率和发病率的报告,新发病例数已增长至1409万,新发病率为57%;死亡人数从760万增至820万,死亡率分别为65%。化疗已成为癌症的重要治疗手段之一[1]。但化疗在杀灭肿瘤     

龟鹿二仙胶的现代运用

<正>龟鹿二仙胶为中医传统名方,明代(1569年)王三才所著的《医便》就有详细记载,该方由鹿角胶、龟板、人参、枸杞子组成。方中龟板、鹿角胶"二仙"为主药,均归肾经。《古今名医方论·龟鹿二仙膏》云"龟得天地之阴气最厚,善通任脉",其腹甲为胶,能滋阴潜阳、补血。"鹿得天地之阳气最全,善通督脉",其角为胶,能补肾阳、生精血。人参大补元气而生津。枸杞子益精生血。《医方考·虚损劳瘵门》云人参"善于固气"     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

龟鹿二仙胶巴布剂治疗结直肠癌化疗后不良反应临床研究

目的:观察龟鹿二仙胶巴布剂治疗78例Ⅲ~Ⅳ期结直癌患者FOLFIRI方案化疗后骨髓抑制的疗效,评价安全性及对中医症状积分的影响。方法:采用随机双盲、安慰剂对照的研究方法,将78例Ⅲ~Ⅳ期结直癌患者分为治疗组及对照组。两组均采用FOLFIRI方案化疗,治疗组随化疗开始同时使用龟鹿二仙胶巴布剂外敷神阙穴治疗,疗程为14 d;对照组使用安慰剂巴布剂,用法用量同治疗组。观察化疗开始后14 d内患者外周血白细胞、中性粒细胞及血小板计数,中医症状积分疗效指标,肝肾功能、皮肤不良反应等药物不良反应指标。结果:以化疗后第14天为观察节点,治疗组白细胞及中性粒细胞计数均显著高于对照组(P0.05);中医症状积分显著低于对照组(P0.05);两组患者肝肾功能指标及皮肤情况均未见明显异常。结论:龟鹿二仙胶巴布剂治疗Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者FOLFIRI方案化疗后骨髓抑制疗效显著,安全性高。     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔骨髓基质干细胞增殖的影响

目的：观察龟鹿二仙胶汤对骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖的影响,确定影响BMSCs增殖的最佳中药血清浓度。方法：经前期体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,运用不同浓度的龟鹿二仙胶汤中药含药血清对获得的兔BMSCs进行药物干预24、48、72h后,采用MTT、免疫组化、流式细胞仪等方法,研究龟鹿二仙胶汤对BMSCs增殖的影响。结果：MTT比色实验显示,龟鹿二仙胶各浓度组均能不同程度地促进BMSCs的能量代谢,促进BMSCs增殖,与空白对照组相比有显著差异（P〈0．01）,而且以15倍药物浓度组为最佳。免疫组化结果证实,龟鹿二仙胶汤含药血清可通过促进PCNA表达来控制DNA复制,以15倍龟鹿二仙胶汤药物浓度血清培养时BMSCs表达致密的棕褐色颗粒最多,其他浓度组及TGF—β3组较多,空白对照组则最少。FCM结果显示,二仙胶汤药物血清能显著提高BMSCs增殖指数,且以15倍药物浓度龟鹿血清培养时最明显。结论：龟鹿二仙胶汤刺激BMSCs增值与药物浓度有关,低浓度龟鹿二仙胶汤就能显著刺激BMSCs增殖,无论是48h、72h测验均为15倍药物浓度时具有显著的增值作用,而更高浓度龟鹿二仙胶汤则表现为促进BMSCs增殖作用减弱。     

龟鹿二仙胶逆转化疗诱导的造血干细胞衰老的机制研究

[目的]探讨龟鹿二仙胶对化疗诱导的骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)衰老的影响及其相关机制。[方法]30只雄性昆明小鼠右腋部皮下注射肝癌细胞株H22细胞悬液0.1mL,细胞浓度为1.0×10~7个/mL,建立荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为3组(对照组、模型组、龟鹿二仙胶组),对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.2mL,1次/d,连续3d(d1~3);其余两组小鼠均腹腔注射环磷酰胺100mg/(kg·d),1次/d,连续3d(d1~3)。龟鹿二仙胶组小鼠同时给予龟鹿二仙胶9.5g/(kg·d)灌胃,1次/d,共9d(d1~9);对照组和模型组同时予0.9%氯化钠溶液0.3mL连续灌胃,1次/d,共9d(d1~9)。给药结束后24h分离小鼠骨髓HSC,以衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-gal)染色检测HSC衰老情况,流式细胞术检测细胞周期,CCK-8检测细胞活力。Western blot检测p16~(Ink4a)-Rb信号通路p16、CDK4/6、pRb蛋白的表达水平,q PCR检测p16、CDK4/6、pRb的mRNA表达水平。[结果]与对照组比较,模型组HSC的细胞活力明显降低(P0.01),SA-β-gal染色阳性率明显升高(P0.01),S期细胞比例明显升高(P0.01),p16蛋白的表达水平明显升高(P0.01),CDK4/6、pRb蛋白的表达水平明显降低(P0.01);与模型组比较,龟鹿二仙胶组HSC的细胞活力明显升高(P0.05),SA-β-gal染色阳性率明显降低(P0.01),S期细胞比例明显减低(P0.01),p16蛋白的表达水平明显降低(P0.01),CDK4/6、pRb蛋白的表达水平明显升高(P0.01,P0.05)。各组p16~(Ink4a)-Rb信号通路上相关mRNA的表达差异无统计学意义(P0.05)。[结论]龟鹿二仙胶能够改善化疗后HSC衰老,p16~(Ink4a)-Rb信号通路上相关蛋白可能是其作用靶点,但对mRNA表达的影响有待进一步研究。     

龟鹿二仙胶对绝经后骨质疏松性骨折愈合的影响

目的：探讨龟鹿二仙胶对大鼠绝经后骨质疏松性骨折(postmenopausal osteoporotic fractures, PMOPF)愈合的影响。方法：从34只SD大鼠中随机选取11只作为对照组,仅切除卵巢旁脂肪组织,其余大鼠行双侧卵巢切除术建立骨质疏松模型。12周后,所有大鼠行右侧股骨骨折合并髓内针固定术。将造模成功的PMOPF大鼠随机分为模型组、龟鹿二仙胶组(3.6 g·kg^-1)和阿仑膦酸钠组(3.6 g·kg^-1),每组6只。龟鹿二仙胶组和阿仑膦酸钠组给予相应药物灌胃,对照组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,持续8周。采用HE染色、番红固绿染色观察骨折处病理形态;三点弯曲法检测骨折处最大载荷;ELISA法检测血清骨钙素(bone gamma carboxy-glutamic acid containing proteins, BGP)、骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(type I collagen carboxy-terminal peptide, CTX-1)...     

龟鹿二仙胶汤治疗膝骨性关节炎的临床研究

观察龟鹿二仙胶汤对膝骨性关节炎的临床疗效.选择符合中西医诊断标准的临床患者120例,按就诊顺序随机分为2组,以龟鹿二仙胶汤和壮骨关节丸对照治疗.结果治疗组总有效率为98.3%,对照组为88.3%,治疗组的疼痛缓解、活动范围、步行能力、日常动作等指标明显优于对照组,2组比较有显著性差异（P＜0.01）.说明龟鹿二仙胶汤能有效的改善膝骨性关节炎的临床症状.     

龟鹿二仙胶加味治疗绝经后妇女不稳定型心绞痛的临床研究

目的:采用龟鹿二仙胶加味治疗绝经后妇女不稳定型心绞痛的临床研究.方法:观察患者用药前后心绞痛每天发作次数,心电图24h缺血总负荷、E2、NO、LDL-C等指标有无改善.结果:两组患者用药前后心绞痛每天发作次数、心电图24h缺血总负荷、E2、NO、LDL-C等指标改善有显著意义(P<0.05或P<0.01),中药组在停用或减服抗心绞痛药物的情况下与西药组比较,降低心绞痛发作次数及改善心肌缺血仍无显著差异(P>0.05),提高患者E2、降低LDL-C方面与尼尔雌醇相类似(P>0.05),提高NO水平优于西药组(P<0.05).结论:龟鹿二仙胶加味治疗绝经后妇女不稳定型心绞痛有延缓患者衰老及抗心绞痛作用.     

龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制

目的观察龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(OVX组)、雷奈酸锶组(SrR组)、龟鹿二仙胶低剂量组(GL组)、中剂量组(GM组)和高剂量组(GH组),除S组外,其余各组切除卵巢,给药6、12周检测大鼠腰椎骨强度、骨密度、骨小梁面积、平均骨小梁宽度、血清骨钙素、尿脱氧吡啶酚的变化。结果①6周时OVX组腰椎承受最大载荷低于其余各组,12周时GM组明显高于其它2个剂量组(P0.01)。②12周时龟鹿二仙胶3个剂量组骨密度高于OVX组(P0.05),低于S组、SrR组(P0.05);GM组骨小梁面积、平均骨小梁宽度高于其余2个剂量组(P0.05)。结论龟鹿二仙胶能显著提高去卵巢大鼠腰椎骨强度,以GM组最明显,其作用机制为早期提高骨小梁宽度和骨小梁面积,后期提高骨密度和改善骨显微结构。     

龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老作用研究

【目的】探讨龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老的作用及机制。【方法】以秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）为模型生物,观察不同浓度龟鹿二仙胶（0.5、2.5、5.0 mg/mL）对线虫健康寿命、行动力、生殖能力、吞咽频率、应激能力和体内活性氧自由基（ROS）、脂褐质水平及抗氧化酶活性的影响。【结果】龟鹿二仙胶能显著提高线虫行动能力、吞咽能力,延长其平均寿命,并对氧化损伤有显著改善作用。此外,不同浓度的龟鹿二仙胶均能显著提高线虫体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH）活性,降低机体内丙二醛（MDA）含量和脂褐质的堆积水平。【结论】龟鹿二仙胶可能是通过减缓细胞氧化损伤,进而起到延长秀丽隐杆线虫寿命的作用。     

基于网络药理学探讨龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的作用机制

目的:通过网络药理学的方法研究龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的相关作用机制。方法:基于TCMSP数据库、ETCM数据库、化学专业数据库、DrugBank数据库获取龟鹿二仙胶的潜在活性成分及相关靶点,从OMIM、Genecards数据库获取骨质疏松症的已知治疗靶点,运用STRING数据库建立活性成分-疾病靶点的蛋白相互作用网络(PPI),利用Cytoscape3.8.0软件对该网络进行拓扑参数分析得到关键活性成分及其靶点。并在R4.0.2中利用Bioconductor数据包对关键靶点进行GO生物学功能分析和KEGG通路分析,得到龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的有效成分和作用靶点。结果:龟鹿二仙胶共有87个活性成分和2 305个靶点,骨质疏松症共有4141个已知治疗靶点,二者共同作用靶点共71个,获得PPI核心基因69个,GO生物学过程分析得出95个条目,KEGG通路分析得出115条通路。结论:龟鹿二仙胶可能通过抑制炎症因子、调节成骨及破骨细胞分化、改善微循环、促进破骨细胞凋亡等途径起到抗骨质疏松的作用,涉及的通路包括TNF信号通路、IL-17信号通路、NF-kB信号通路、HIF-1信号通路、MAPK...     

龟鹿二仙胶加味治疗绝经后妇女不稳定型心绞育的临床研究

目的：采用龟鹿二侧胶加味治疗绝经后妇女不稳定型心绞痛的临床研究。方法：艇药前后心绞痛每天发作次数,心电图２４缺血总负荷、Ｅ２、ＮＯ、ＬＤＬ－Ｃ等指标有无改善。结果：两组患者用药前后心绞痛每天发作次数、心电图２４ｈ缺血总负荷、Ｅ２、ＮＯ、ＬＤＬ－Ｃ等指标改善有显著意义（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）,中药组在停用或减服抗心绞痛药物的情况下与西药组比较,降低心绞痛发作及改善心肌缺血仍无显著差异（Ｐ〉０．     

加味龟鹿二仙汤对乳腺癌患者化疗骨髓毒性的影响*

目的：观察加味龟鹿二仙汤对乳腺癌化疗骨髓毒性的影响。方法：将96例乳腺癌患者分为两组,治疗组（n=49）化疗同期服用加味龟鹿二仙汤,对照组（n=47）化疗同期服用鲨肝醇。连续6个疗程,比较化疗前后两组患者重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）使用率、毒副反应。结果：治疗组较对照组G-CSF使用率低（P<005）;治疗组白细胞、中性粒细胞、血红蛋白、血小板下降程度轻,恢复快,单个核细胞对乳腺癌细胞杀伤活性增强。结论：化疗联合使用加味龟鹿二仙汤不仅可以减少升白药物使用频率,同时有效减轻化疗所致的骨髓毒性,提高患者的免疫力。     

加味龟鹿二仙胶对晚期大肠癌化疗患者临床效果、骨髓功能、免疫功能分析

目的 探讨加味龟鹿二仙胶对晚期大肠癌化疗患者临床效果、骨髓功能和免疫功能的影响。方法 回顾性分析2017 年9 月～2019 年6 月我院收集的晚期大肠癌患者66 例,既往3 个月内化疗曾出现骨髓抑制并使用过集落刺激因子,分为研究组和对照组,各33 例,对照组使用常规化疗,研究组在对照组的基础上加用加味龟鹿二仙胶,比较两组的近期治疗效果、不良反应、中医证候积分、骨髓功能、骨髓抑制和免疫功能以及生活质量。结果 研究组的治疗效果比对照组更优（P＜0.05）,不良反应比对照组低（P＜0.05）,中医证候积分比对照组优（P＜0.05）,生活质量比对照组更好（P＜0.05）,骨髓功能和免疫功能均比对照组好（P＜0.05）,骨髓抑制的发生率比对照组低（P＜0.05）。结论 对晚期大肠癌化疗患者加用加味龟鹿二仙胶治疗,可以提高治疗效果,降低不良反应,更为安全可靠,且可有效改善患者中医证候积分、骨髓功能和免疫功能,提高患者的生活质量,因此可在临床推广应用。     

龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍模型大鼠行为学及海马GR、5-HT受体表达的影响

目的:观察龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠行为学,海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptors,GR)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受体1A亚型(5-HT1A)、2A亚型(5-HT2A)表达的影响。方法:采用单一延长刺激方法制作大鼠PTSD模型,通过旷场实验、拒俘反应实验以及Morris水迷宫实验观察大鼠的情感行为和学习记忆能力的改变。采用RT-PCR法检测海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达。结果:PTSD大鼠表现出多种情感行为障碍,学习能力显著降低(P<0.01)。海马GR表达增强(P<0.01),5-HT1A受体表达下降(P<0.05),5-HT2A受体表达则升高(P<0.05)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))能显著改善PTSD大鼠的情感行为障碍,提高学习记忆能力(P<0.05或P<0.01)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))可以明显降低PTSD大鼠海马GR的表达水平,升高5-HT1A受体表达水平和降低5-HT2A受体表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶对PTSD具有良好的干预治疗作用,其作用机理与改善情感行为和认知功能以及调节海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达有关。     

龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍模型大鼠行为学及海马GR、5-HT受体表达的影响

目的:观察龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠行为学,海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptors,GR)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受体1A亚型(5-HT1A)、2A亚型(5-HT2A)表达的影响。方法:采用单一延长刺激方法制作大鼠PTSD模型,通过旷场实验、拒俘反应实验以及Morris水迷宫实验观察大鼠的情感行为和学习记忆能力的改变。采用RT-PCR法检测海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达。结果:PTSD大鼠表现出多种情感行为障碍,学习能力显著降低(P0.01)。海马GR表达增强(P0.01),5-HT1A受体表达下降(P0.05),5-HT2A受体表达则升高(P0.05)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))能显著改善PTSD大鼠的情感行为障碍,提高学习记忆能力(P0.05或P0.01)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))可以明显降低PTSD大鼠海马GR的表达水平,升高5-HT1A受体表达水平和降低5-HT2A受体表达水平(P0.05或P0.01)。结论:龟鹿二仙胶对PTSD具有良好的干预治疗作用,其作用机理与改善情感行为和认知功能以及调节海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达有关。     

龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用

目的 研究龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。方法 体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传至第二代后分5组培养:正常组、地塞米松（10-8mol/L）组、骨化三醇含药血清组、龟鹿二仙胶含药血清低剂量组、龟鹿二仙胶含药血清高剂量组。MTT法检测骨髓间充质干细胞活力,检测细胞上清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、炎症因子白介素-6（IL-6）、小鼠白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。采用Western blot检测Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路蛋白表达。结果 龟鹿二仙胶能显著提高细胞活力,增加SOD水平、降低MDA水平、降低炎症因子水平,增加蛋白Nrf-2、HO-1蛋白表达水平,降低NF-κB信号蛋白表达。结论 龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤有保护作用,且作用与调控Nrf-2/HO-1/NF-κB信号相关。