阿司匹林对小鼠S180肉瘤生长及血管和淋巴管生成的影响

目的   观察阿司匹林对小鼠S180肉瘤生长的影响,并探讨其可能的作用机制。方法   昆明种小鼠40只,接种S180肉瘤细胞,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、阿司匹林高(250mg/kg)、低剂量(50mg/kg)组,描绘肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率;HE染色观察各组肿瘤组织病理变化;免疫组化检测各组肿瘤组织微血管密度(MVD)、淋巴管密度(LVD)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的变化;Western blot检测各组肿瘤组织VEGF-A、VEGF-C的表达。结果   阿司匹林高、低剂量组抑瘤率分别为45.4%和22.2%(P<0.05),与荷瘤对照组相比,5-FU组与阿司匹林高、低剂量组VEGF-A和VEGF-C的表达明显下调,LVD、MVD降低(P<0.05),阿司匹林的作用呈剂量依赖性。结论   阿司匹林能抑制小鼠S180肉瘤的生长,其作用机制可能与减少VEGF-A和VEGF-C产生从而抑制肿瘤血管和淋巴管生成有关。     

塞来昔布联合厄罗替尼对人肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 探讨厄洛替尼和塞来昔布联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COx-2),对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长及血管形成的影响.方法 人肺癌细胞A549接种于裸鼠皮下,成瘤后随机分为4组:对照组、厄洛替尼组、塞来昔布组、塞来昔布和厄洛替尼联合用药组,给予灌胃处理,观察裸鼠生长状况,每周两次测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线.40 d后处死裸鼠,称取移植瘤质量.采用免疫组化检测肿瘤微血管密度(MVD),ELISA法检测裸鼠血清中血管内皮生长因子(sVEGF)的含量,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达情况并计算Bcl-2/Bax的值.结果 联合用药组肿瘤明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P＜0.05).联合用药组微血管数目、sVEGF的含量明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P＜0.05).厄洛替尼组Bcl-2的表达明显小于对照组(P＜0.05),塞来昔布组Bcl-2的表达与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),联合用药组Bcl-2的表达与对照组、塞来昔布组、厄洛替尼组相比均明显降低(P＜0.05).Bax的表达在各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).联合用药组Bcl-2/Bax较塞来昔布组、厄洛替尼组明显降低(P＜0.05).结论 塞来昔布联合厄洛替尼相对厄洛替尼或塞来昔布明显抑制人肺癌移植瘤的生长.其中减少微血管生成、增加肿瘤细胞的凋亡可能为其抗肿瘤机制.     

塞来昔布对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤增殖的影响

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤生长抑制作用及其相关机制.方法 用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721接种BALB/C(nu/nu)裸鼠背部皮下,建立裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤动物模型(n=20)并分成实验组(n=10)和空白对照组(n=10).实验组接种前3 d开始在饮水中添加塞来昔布,对照组给予正常饮水,观察肿瘤生长曲线和质量,并应用免疫组化法对肿瘤组织的细胞凋亡情况、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤微血管密度(MVD)表达程度进行观察.结果 实验组肿瘤出现的时间显著晚于对照组,肿瘤的体积、质量显著小于对照组,两组差异有高度统计学意义(P＜0.01);塞来昔布处理后肿瘤组织的细胞凋亡明显强于对照组,而VEGF、MVD表达明显弱于对照组.结论 COX-2抑制剂塞来昔布可通过诱导凋亡及抑制肿瘤新生血管生成而抑制裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721株移植瘤的生长,其作用途径是抑制了COX-2的表达.     

选择性环氧化酶-2抑制剂对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用的研究

目的 探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridine,MPTP)致帕金森病小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性的保护作用及其可能机制.方法 30只健康雄性C57BL6小鼠随机分成3组:PBS对照组、生理盐水治疗组(生理盐水+MPTP)和塞来昔布治疗组(塞来昔布+MPTP),每组各10只.采用免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的减少,免疫印迹法检测黑质COX-2蛋白表达.结果 与PBS对照组比较,生理盐水治疗组TH阳性细胞明显减少(P＜0.05),黑质COX-2蛋白表达明显增加,塞来昔布治疗组TH阳性细胞数较生理盐水治疗组明显增多(P＜0.05),黑质COX-2蛋白表达含量明显减少.结论 COX-2的表达与PD模型小鼠黑质内DA能神经元的丢失有关,塞来昔布可能对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有保护作用.     

塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 研究不同剂量环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制.方法 将人结肠癌HT-29细胞注射于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,16 d后,将裸鼠以随机数字表法分为5组:对照组、塞来昔布1组(25 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布2组(50 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布3组(75 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布4组(100 mg·kg-1·d-1),并给予相应剂量的塞来昔布.每周测量肿瘤体积,给药35 d后,处死裸鼠,切取移植瘤组织检测COX-2,survivin表达, VEGF mRNA表达和微血管密度(MVD).结果 塞来昔布1、2、3、4组的抑瘤率分别为34.94%、39.20%、53.50%、59.20%,与对照组比较移植瘤体积明显缩小(P<0.05).与对照组比较,塞来昔布各组COX-2、survivin的表达水平均明显降低(P<0.05),并且抑制程度呈药物剂量依赖性.低剂量(25 mg·kg-1·d-1)塞来昔布可明显抑制VEGF mRNA表达和结肠癌移植瘤微血管生成(P<0.05,vs对照组),其抑制作用并未随用药剂量的增加而增强.结论 不同剂量的塞来昔布均能明显抑制结肠癌移植瘤的生长,其抑制作用呈用药剂量依赖性,这种作用可能是通过抑制survivin的表达实现的.低剂量塞来昔布可抑制人结肠癌裸鼠移植瘤微血管生成,可能对防止肿瘤转移起到重要作用.     

二甲双胍、塞来昔布对化学诱导异常隐窝病灶预防机制的研究

目的 探讨二甲双胍、塞来昔布对氧化偶氮甲烷(AOM)诱导的异常隐窝病灶(ACF)的预防机制.方法 45只7周龄BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、二甲双胍组、塞来昔布组3组,分别予腹腔注射AOM;同时对照组、二甲双胍组、塞来昔布组小鼠分别予生理盐水、二甲双胍、塞来昔布灌胃处理.每周监测小鼠体质量变化.6周后处死小鼠并分离结直肠组织,应用PCNA免疫组织化学染色及TUNEL染色的方法检测病变组织的增殖及凋亡的情况;使用ELISA检测小鼠空腹血糖、空腹胰岛素以评估小鼠胰岛素的抵抗状态. 结果 二甲双胍组和塞来昔布组的细胞增殖指数分别为(27.30±1.49)和(37.20±2.10),显著低于对照组(56.20±1.93) (P＜0.05),二甲双胍对细胞增殖的抑制作用强于塞来昔布(P＜0.05);二甲双胍组和塞来昔布组的细胞凋亡指数分别为(7.70±1.25)和(7.00±1.05),显著高于对照组(5.10±1.37)(P＜0.05);对照组、二甲双胍组、塞来昔布组的小鼠空腹血糖及胰岛素抵抗指数比较,差别无统计学意义(P＞0.05). 结论 二甲双胍、塞来昔布对大肠癌起到预防的作用,其机制可能与抑制细胞增殖及促进细胞凋亡有关;二甲双胍的作用明显优于塞来昔布.     

组合压气机中尾迹与势流同频/异频干涉的叠加特性

目的 探讨环氧合酶-2 (eyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肝癌小鼠调节T细胞(regulatory T,Treg)的影响.方法 昆明种小鼠随机分成正常组及肝癌组,每组各20只.肝癌小鼠和正常小鼠于背部皮下注射肝癌H22荷瘤小鼠腹水稀释液或生理盐水0.2 mL一次.于次日开始,每组各取10只采用塞来昔布30mg/(kg·d)灌胃;肝癌组另外10只予以相同容积的生理盐水灌胃,作为肝癌对照组.灌胃均为1次/d,共24 d.正常组另外10只不做任何干预,作为健康对照组.给药24 d后处死全部小鼠,完整取出肿瘤后称取瘤重,HE染色检测是否成瘤;采用流式细胞学技术测定小鼠外周血中Treg细胞数量变化;免疫组织化学方法检测肝癌组织中叉头样/翼状螺旋转录因子-3(Foxp3)及COX-2的表达情况.结果 塞来昔布干预后小鼠瘤重低于肝癌对照组[(0.82±0.30)g vs.(1.41±0.63)g,P＜0.05].HE染色证实所有肿瘤小鼠均已成瘤.肝癌对照组小鼠外周血中Treg占CD4+T细胞的比例高于健康对照组[(4.26±0.89)％Vs.(3.01±0.65)％,P＜0.05];经塞来昔布作用后,其Treg占CD4+T细胞的比例下降[(3.04±0.74)％ vs.(4.26±0.89)％,P＜0.05].正常小鼠经塞来昔布作用后,其外周血Treg与健康对照组相比无明显变化.塞来昔布干预后肝癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中Foxp3蛋白阳性细胞低于肝癌对照组[(8.87±3.72)％vs.(30.78±9.26)％,P＜0.05],肿瘤组织中COX-2表达水平亦下调[IOD值(2.90±1.030) vs.(6.63±2.279),P＜0.01].结论 肝癌小鼠外周血中Treg比例增高;COX-2抑制剂能明显降低其外周血及肿瘤浸润淋巴细胞中Treg的比例.     

非甾体类抗炎药促进神经元轴突生长机制研究

目的研究非甾体类抗炎药促进中枢神经元轴突生长的机制。方法分别培养PC12和DRG细胞,用轴突生长抑制蛋白硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs)和髓磷脂(Mye)处理,再分别予奈普生、布洛芬、消炎痛、塞来昔布干预,以常用做细胞培养的中性等渗磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照组。检测神经元轴突生长和RhoA活性。结果布洛芬组(Ibu)、消炎痛组(Indo)、塞来昔布组(Cel)与对照组(PBS)比较,能促进轴突生长(P<0.01),而奈普生组(Nap)与对照组差异无统计学意义。布洛芬组、消炎痛组、塞来昔布组的RhoA活性与对照组比较,能显著降低RhoA活性(P<0.01),而奈普生组与对照组差异无统计学意义。结论非甾体类抗炎药:布洛芬、消炎痛、塞来昔布,可能通过抑制RhoA活性促进神经元轴突生长。     

Mnk1对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的：探究丝裂原活化蛋白激酶相互作用丝苏氨酸激酶1(Mnk1)基因缺失对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（Mφ）炎症反应的影响及可能机制。方法：选取8～10周龄健康雄性野生型C57BL/6J(WT)、Mnk1基因敲除（KO）小鼠，分为WT+PBS组、KO+PBS组、WT+LPS组、KO+LPS组，腹腔注射PBS或LPS 24 h后，ELISA法检测血清中IL-1β含量，提取脾脏Mφ行qRT-PCR检测脾脏Mφ中IL-1β和Sprouty2(Spry2)的mRNA表达水平。同时分别提取两种品系的小鼠腹腔Mφ进行体外实验，检测巨噬细胞黏附功能，并以等体积LPS或PBS溶液刺激24 h，分为WT+PBS组、KO+PBS组、WT+LPS组、KO+LPS组，并用表达Spry2的腺病毒转染各组Mφ，qRT-PCR法检测Mφ中LFA-1α、IL-1β、iNOS、CD206、Arg1和Spry2的mRNA表达水平，Western blot法检测Mφ中Mnk1、ERK1/2、P-ERK1/2、P-p38、P-JNK、Spry2蛋白水平。结果：在体实验中，腹腔注射LPS的KO+LPS组小鼠较WT+LPS...     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

雷帕霉素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤后脾γδT淋巴细胞与肺巨噬细胞相互作用的影响

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤后脾γδT淋巴细胞与肺巨噬细胞相互作用的影响.方法 6～8周龄健康雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、LPS组、RAPA组及LPS+RAPA组.气管内注射LPS构建小鼠急性肺损伤模型,采用免疫磁珠法提纯给药1 d后处死的小鼠脾γδT淋巴细胞和肺巨噬细胞,调整细胞浓度为106 个/ml;24孔板分成PBS、LPS、RAPA及LPS+RAPA共4组,每组又分为以下3个复孔:单独培养的脾γδT淋巴细胞、单独培养的肺巨噬细胞及按1:1混合培养的脾γδT淋巴细胞和肺巨噬细胞.24 h后采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养上清液中干扰素γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;采用实时定量聚合酶链反应法测定培养的细胞中IFN-γ及TNF-α mRNA的表达.结果 LPS组支气管肺泡灌洗液的总细胞和淋巴细胞浓度明显大于PBS组和LPS+RAPA组(P＜0.05).脾脏γδT淋巴细胞与肺组织巨噬细胞按1:1昆合培养时,LPS组上清液IFN-γ高于其他3组(P＜0.05),而TNF-α只高于RAPA组和LPS+RAPA组(P＜0.05).混合培养时LPS组IFN-γmRNA的表达明显高于PBS组和RAPA组(P＜0.05).结论 RAPA能显著抑制小鼠LPS诱导急性肺损伤后脾脏γδT淋巴细胞和肺组织巨噬细胞混合培养时IFN-γ和TNF-α的分泌.

Abstract：

Objective To explore the influences of rapamycin (RAPA) upon the cytokine changes of activated spleen γδT lymphocytes and lung tissue macrophages in acute lung injury of mice induced by lipopolysaccharide (LPS).Methods A total of 24 healthy male C57BL/6 mice,6 -8 weeks old,were randomly divided into phosphate buffered saline (PBS),LPS,RAPA and LPS + RAPA groups.Acute lung injury was induced by a single intratracheal instillation of LPS in mice.And spleen γδT lymphocytes and lung macrophages were purified by immunomagnetic beads at Day 1.The purified spleen γδT lymphocytes and lung macrophages were adjusted to 106 cell/ml.And 24-well plates were used for 4 groups.Each group were further separated with spleen γδT lymphocytes alone,lung tissue macrophages alone and co-culturing.Supernatant fluid was collected after 24 hours.The expressions of IFN-γ and TNF-o were analyzed by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).And the expressions of mRNA were analyzed by real-time quantitative PCR (polymerase chain reaction).Results The total cells numbers and lymphocytes numbers of bronchoalveolar lavage fluid were significantly higher in LPS group than those in PBS and LPS + RAPA groups (P＜0.05).And the level of IFN-γwas significantly higher in LPS group than that in PBS,RAPA and LPS + RAPA groups by co-culture (P ＜ 0.05).The level of TNF-α was significantly higher in LPS group than that in RAPA gaud LPS + RAPA groups by co-culture (P ＜ 0.05).However,the mRNA of IFN-γ was higher in LPS group than that in PBS and RAPA groups (P ＜ 0.05).Conclusion RAPA inhibits the secretion levels of IFN-γ and TNF-α in spleen γδT lymphocytes and lung tissue macrophages in acute lung injury of mice induced by LPS.     

PC61.5联合瘤苗抗小鼠T细胞淋巴瘤的实验观察

目的:观察抗CD25抗体(PC61.5)联合瘤苗对小鼠T细胞淋巴瘤的抗肿瘤作用.方法:用PC61.5尾静脉注射小鼠,4 d后用丝裂霉素灭活的肿瘤细胞免疫小鼠,观察小鼠抗肿瘤的能力;用乳酸脱氢酶杀伤试验进一步验证PC61.5可增强CTL的杀伤活性以及杀伤特异性.结果:PC61.5能够有效地延缓小鼠淋巴瘤的发生时间,PC6...     

白藜芦醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用及其机制

目的：探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖（LPS）+卵白蛋白（OVA）联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组（LPS+OVA组）、白藜芦醇组（Res组,于激发前2 h灌胃30 mg·kg^-1白藜芦醇）和N-乙酰半胱氨酸组（NAC组,于激发前2 h灌胃3 mmol·kg^-1 N-乙酰半胱氨酸）;同时选取6只同周龄小鼠作为正常对照组（PBS组）。于乙酰甲胆碱雾化期间观察各组小鼠的行为学变化,采用肺功能仪分析小鼠气道高反应（AHR）,光学显微镜观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数和炎症细胞,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,酶联免疫法（ELISA）检测各组小鼠BALF上清中白细胞介素17（IL-17）水平,特异性荧光探针DCF-DA染色分析肺组织活性氧（ROS）水平,丙二醛（MDA）试剂盒检测肺组织匀浆中MDA水平。结果：与PBS组比较,LPS+OVA组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分均明显升高（P<0.05或P<0.01）,BALF上清中IL-17水平明显升高（P<0.01）,肺组织内ROS荧光强度明显升高,肺匀浆中MDA水平明显升高（P<0.01）。与LPS+OVA组比较,Res组和NAC组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分明显降低（P<0.05或P<0.01）,BALF上清中IL-17水平均明显降低（P<0.05）,肺组织内ROS荧光强度降低,肺匀浆中MDA水平明显降低（P<0.01）。结论：白藜芦醇能够有效抑制中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织中的炎症反应,其机制可能与白藜芦醇抑制体内发生的氧化应激反应有关。     

己酮可可碱对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤肺微血管通透性的保护

目的：探讨己酮可可碱(PTX)对内毒素(LPS)诱导的急性肺损伤肺微血管通透性的影响。方法：建立大鼠急性肺损伤模型,随机分为LPS组、LPS PTX组、对照组,检测3组的动脉血气并行支气管肺泡灌洗液计数白细胞和白蛋白,肺微血管通透性指数及肺组织学检查。结果：与对照组比较,LPS组及LPS PTX组的动脉氧分压均显著下降,白细胞计数增加,白蛋白含量及肺微血管通透性指数升高,肺组织学检查显示明显的炎症改变;与LPS组比较,LPS PTX组动脉氧分压有所改善,白细胞计数减少。白蛋白含量及肺微血管通透性指数降低,肺组织学检查明显好转。结论：PTX可降低肺微血管通透性,对LPS诱导的急性肺损伤有保护作用。     

黄藤素注射液抗脂多糖致小鼠急性肺损伤的作用

目的 研究黄藤素注射液抗脂多糖致小鼠急性肺损伤的作用.方法 健康雄性成年昆明小鼠72只,随机分为6组:正常对照组;LPS组(气管滴入脂多糖LPS 5 mg/kg);氢化可的松组(腹腔注射氢化可的松3.3mg/kg,每日1次,连续3 d,第4天气管滴入LPS 5 mg/kg);黄藤素低、中、高剂量组(分别腹腔注射黄藤素2mg/kg、10 mg/kg和50 mg/kg,每日1次,连续3 d,第4天气管滴入LPS 5 mg/kg).在气管滴入LPS后24 h处死各组小鼠,部分小鼠取出肺组织进行称重计算肺系数,部分小鼠行支气管肺泡灌洗,对炎症细胞进行计数.结果LPS组小鼠肺系数明显高于正常对照组(P<0.05);氢化可的松组和黄藤素低、中、高剂量组小鼠肺系数明显低于LPS组(P<0.05).对于BALF中炎症细胞及中性粒细胞比例,LPS组明显高于正常对照组(P<0.01),与LPS组相比,氢化可的松组和黄藤素中剂量组和高剂量组明显降低(P<0.01).结论 黄藤素注射液能够明显减轻脂多糖致小鼠急性肺损伤炎症反应程度.     

姜黄素对LPS诱导的星形胶质细胞炎性反应的抑制作用

目的：探讨脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞产生炎性反应及姜黄素对它的抑制作用。方法在2015年3月—2015年7月期间,分离培养了10只新生1~2 d的昆明小鼠大脑皮质星形胶质细胞,培养10 d后传代分组,实验分PBS对照组(n=6)、LPS刺激组(n=6)、LPS联合姜黄素干预组(n=6)。 ELISA检测炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的释放。结果与PBS组的IL-6(873.82±20.28)、IL-1β(680.62±10.35)和TNF-α(492.73±8.56)比较,LPS刺激组IL-6(1132.42±78.09)、IL-1β(821.87±14.33)和TNF-α(559.32±9.6)的分泌增加(P<0.05);姜黄素能显著抑制 LPS 诱导的IL-6(1014.79±52.08)、IL-1β(738.84±7.33)和 TNF-α(476.7±10.38)的分泌,与 LPS 组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能抑制LPS激活星形胶质细胞所致的炎性反应。     

HIFU联合载HSV-TK基因的纳米级超声分子探针治疗对裸鼠肝移植瘤血管生成的影响

目的 观察高强度聚焦超声(HIFU)治疗裸鼠肝移植瘤后,再注入载单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-TK)的纳米级超声分子探针治疗效果,并探讨其治疗机制.方法 用人肝癌HepG2细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型60只,采用CZF型HIFU机治疗后,分别经鼠尾静脉注射200 μL的微泡+HSV-TK+磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)(A组)、微泡+HSV-TK(B组)、HSV-TK+ GPC3(C组)、HSV-TK(D组)、微泡+GPC3(E组)、PBS液(F组),每3天1次,共注射3次.每次注射后,根据超声监测微泡到达靶组织的情况,对A、B、D、E组用DZC型超声转染仪给予2 W/cm2、1 MHz、5 min超声辐照.首次注射48 h后,各组经腹腔注射0.2 mL更昔洛韦(GCV,100 mg·kg-1·d-1),连续注射14d.治疗结束后,用免疫组织化学法测残瘤中微血管密度(MVD)水平,用Western blot和免疫组织化学法测量残癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管肉皮生长因子(VEGF)的变化情况,用Q-PCR检测肿瘤中HIF-1α、VEGF基因的转录水平.结果 治疗14 d后,B、C、D、E、F组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,VEGF及HIF-1α mRNA水平,MVD均明显高于A组(P＜0.05).结论 载HSV-TK的纳米级超声分子探针治疗可降低HIFU治疗后残瘤组织中的VEGF、HIF-1α及MVD水平,从而抑制肿瘤的生长,提高HIFU的治疗效果.     

和厚朴酚通过激活线粒体依赖的Sirt3/AMPK途径减轻脂多糖所致的急性呼吸窘迫综合征

目的：探讨和厚朴酚(honokiol，HKL)对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)所致的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)肺微血管内皮细胞的作用及潜在机制。方法：动物实验中，40只C57BL/6J小鼠随 机分为对照组(Con组)、LPS干预组(LPS组)、LPS+HKL干预组(HKL组)、LPS+HKL+尼克酰胺(nicotinamide，NAM)干 预组(NAM组)，每组10只。细胞实验中，实验分为对照组(Con组)、LPS干预组(LPS组)、LPS+HKL干预组(HKL组)、 LPS+HKL+NAM干预组(NAM组)和LPS+HKL+混合抑制剂(compound C，CMC)干预组(CMC组)。采用HE染色观察肺 组织病理改变；检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中蛋白浓度、细胞总数、中性粒细胞数及 肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性；伊文思蓝实验检测肺微血管渗透性的改变；采用细胞计数试剂盒 (cell counting kit-8，CCK-8)检测HKL对人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells，HPMECs) 活 力的影响；采用抑制剂NAM和CMC干预探讨HKL保护性作用的分子机制；采用Western印迹检测组织或细胞Sirt3， caspase-3，cleaved caspase-3，Bcl-2，Bax，p-腺苷酸活化蛋白激酶(p-adenosine monophosphate activated protein kinase， p-AMPK)和AMPK蛋白表达。结果：动物实验中，与Con组比较，LPS组小鼠肺组织呈典型的ARDS病理改变，肺组 织湿干重比(W/D)值及MPO活性、BALF蛋白浓度、细胞总数和中性粒细胞数、伊文思蓝渗漏指数(evans blue leaking index，ELI)和肺组织cleaved caspase-3表达均显著升高(均P<0.05)，而Sirt3表达明显下调(P<0.05)；与LPS组比较，HKL 组的上述改变显著改善(均P<0.05)；与HKL组比较，NAM组中HKL干预的疗效可部分抑制(均P<0.05)。细胞实验 中，与LPS组比较，HKL组HPMECs的存活率升高(P<0.05)，Bcl-2和Sirt3蛋白表达显著上调(均P<0.05)， Bax和cleaved caspase-3蛋白表达下调(均P<0.05)，AMPK通路活化加强(P<0.05)；与HKL组比较，CMC组HKL干预的疗效被部分抑制 (均P<0.05)。结论：HKL能够显著减轻LPS所致的ARDS，抑制肺微血管内皮凋亡，其作用可能是通过线粒体依赖的 Sirt3/AMPK途径实现的。     

电针预处理对脂多糖诱导的小鼠心功能障碍及炎性反应的影响

目的  观察电针预处理对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症模型小鼠心功能障碍和炎性反应的影响, 探讨电针预处理促心肌保护的可能机制。方法  24只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和电针预处理组, 每组8只。电针预处理组在异氟烷麻醉状态下电针双侧足三里穴, 疏密波, 频率2/15 Hz, 强度2 mA, 持续15 min; 对照组、模型组同样的方式抓取、固定。电针结束后, 模型组和电针预处理组腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建脓毒症模型; 对照组注射等量生理盐水。采用超声心动图评价心功能; ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β水平; qPCR和Western blot法检测心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10 mRNA和蛋白表达量; 流式细胞术检测心肌组织中F4/80+CD11b+总巨噬细胞、F4/80+CD11b+CD206lowM1型和F4/80+CD11b+CD206highM2型巨噬细胞含量。结果  与对照组相比, 模型组小鼠的LVEF、LVFS均显著下降(P < 0.01), 血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P < 0.01), 心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA和蛋白表达增加(P < 0.05,P < 0.01), 心肌组织中巨噬细胞含量增多(P < 0.01), 且M1型巨噬细胞比例增高(P < 0.01);与模型组相比, 电针预处理组的LVEF、LVFS均显著提高(P < 0.01), 血清中TNF-α、IL-1β含量下降(P < 0.05,P < 0.01), 心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白表达下降(P < 0.05,P < 0.01), 而IL-10表达上升(P < 0.05,P < 0.01), 巨噬细胞含量下降(P < 0.01), 且M2型巨噬细胞比例增高(P < 0.01)。结论  电针预处理可能通过促进心肌组织中巨噬细胞由促炎M1型向抗炎M2型极化, 减轻全身和局部炎性反应水平, 改善心功能, 产生心肌保护效应。      

Expression of urotensin Ⅱ and its relationship with pro-inflammatory cytokines of TNF-α and IL-1β in early stage of acute liver failure

目的 探讨小鼠急性肝衰竭(ALF)早期尾加压素Ⅱ(UⅡ)表达和分泌的动态变化及其对前炎症细胞因子的影响.方法 选择6周龄雄性BALB/c小鼠60只,随机分为模型组和预处理组,每组30只.两组均建立ALF动物模型,即采用脂多糖(LPS)50 μg/kg联合右旋半乳糖胺(D-GalN )800 mg/kg(LPS/D-GalN)腹腔注射;预处理组在LPS/D-GalN注射前0.5h,以UⅡ受体拮抗剂urantide 0.6 mg/kg尾静脉注射.两组均在LPS/D-GalN注射后0、0.5、1、2和6h处死动物(每一时间点各6只小鼠),其中0h作为对照(仅腹腔内注射0.2 mL无菌生理盐水);采集动物血清和肝组织标本.采用RT-PCR及ELISA方法分别检测U Ⅱ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素1β(IL-1β)mRNA和蛋白质的表达.结果 LPS/D-GalN注射后0.5h,肝组织和血清中UⅡ的表达和分泌即快速上升并达峰值,且峰值水平持续至LPS/D-GalN攻击2h后,至6h时UⅡ的表达与分泌虽有所降低,但仍显著高于正常水平(p＜0.05);面TNF-α水平在LPS/D-GalN攻击后0.5h内无明显升高(P＞0.05),直到1h后才快速上升达峰值(P＜0.05),至6h时开始下降(P＜0.05);IL-1β的表达与分泌则直到6h后才有明显上升(P＜0.05).Urantide的应用不仅显著抑制了LPS/D-GalN攻击诱导的UⅡ高表达,也使上调的TNF-α和IL-1β表达和分泌明显受抑(P＜0.05).结论 UⅡ可刺激TNF-α的表达,有可能作为炎症级联效应的触发者在ALF的发生或启动中发挥关键性影响.