微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌细胞生长的影响

摘要 目的 研究微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌生长的影响。方法 利用PWR1E,RWPE1和DU145细胞株,通过蛋白质印迹分析、siRNA实验和MTT实验,检测微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸微管蛋白的含量,并观察细胞的生长情况。结果 在硝基化酪氨酸的作用下,DU145细胞的硝基化酪氨酸微管蛋白含量低于PWR1E和RWPE1细胞（P＜0.05）;和对照组相比,PWR1E和RWPE1实验组细胞生长受到抑制（P＜0.05）,而DU145细胞生长无明显改变（P＞0.05）;在有效沉默TTLL12后,实验组的硝基化酪氨酸微管蛋白含量高于对照组（P＜0.05）;实验组在硝基化酪氨酸作用下,细胞生长受到抑制,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）,而对照组内两组细胞生长改变较小,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 TTLL12可使前列腺癌细胞逃避硝基化酪氨酸的打击,从而使前列腺癌细胞逃脱机体监控作用,获得异常增殖机会,而对这一调控机制的进一步研究,将有助于控制肿瘤细胞的生长。     

TTLL12过表达对口腔鳞癌SCC-25细胞株生物学特性的影响

目的 检测微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12(TTLL12)过表达对人舌磷癌SCC-25细胞株生物学特性的影响.方法 建立TTLL12稳定过表达的SCC-25细胞株,采用间接免疫荧光法和Western blot检测TTLL12在SCC-25细胞内的分布,MTT检测沉默TTLL12对SCC-25细胞生长的影响,Boyden小室侵袭试验检测沉默TTLL12对SCC-25细胞侵袭的影响,采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析.结果 间接免疫荧光法和Western blot结果均显示TTLL12在细胞质、细胞核及细胞核膜均有分布.间接免疫荧光法结果显示α微管蛋白(α-tubulin)的分布与TTLL12重合.MTT实验结果显示沉默组(沉默TTLL12基因的SCC-25细胞)的SCC-25细胞生长较对照组(未作任何处理的SCC-25细胞)受到明显抑制(P<0.05).Boyden小室侵袭实验结果显示沉默组的穿膜细胞百分比明显小于对照组(P<0.05).结论 沉默TTLL12可有效抑制SCC-25细胞的生长和侵袭能力.     

β-榄香烯抗肿瘤作用和抑制微管蛋白体外聚合的研究

目的探讨β-榄香烯对微管蛋白体外聚合作用的影响，阐明其抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法测定β-榄香烯对体外培养的A549、WI38细胞增殖、生长的抑制作用；用浊度法测定β-榄香烯对提取的牛脑微管蛋白体外聚合的抑制作用。结果β-榄香烯能明显抑制A549、WI38细胞增殖、生长。其抑制作用呈浓度与时问依赖性；对A549、WI38细胞增殖的半数抑制率(1C50)分别为2．73μmol/L、3．53μmol/L。β-榄香烯明显抑制体外微管蛋白的聚合，并与药物浓度呈一定的线性关系，对微管蛋白体外聚合的半数抑制率(IC50)为5．12μmol/L。结论β-榄香烯对A549、WI38细胞增殖、生长有明显的抑制作用．β-榄香烯抑制微管蛋白的聚合是其抗肿瘤作用的重要机制之一，并与微管蛋白稳定剂紫杉醇的作用机理不同。     

药物的禁用与慎用（见表1）

孕妇 甲氧苄啶（TMP），SMZ—TMP，诺氟沙星（氟哌酸），氧氟沙星，环丙沙星，洛美沙星，利福平、利福喷丁、氨苯砜、咪康唑、制霉菌素、利巴韦林、阿糖腺苷、氯喹、乙胺嘧啶、奎宁、伯氨喹、阿苯达唑（肠虫清）、左旋咪唑、噻嘧啶、美法仑（溶肉瘤素）、苯丁酸氮芥、噻替哌、白消安、甲氨蝶呤、硫嘌呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、羟基脲、丝裂霉素、平阳霉素、阿霉素、表柔比星、吡喃阿霉素、长春碱、长春新碱、高三杉酯碱、紫杉醇、他莫昔芬、丙卡巴肼、顺铂、卡铂、门冬酰胺酶、咪哒唑仑、维库溴钱、苯噻啶、吲哚美辛（消炎痛）、双氯芬酸、萘普生、     

流体剪切力和细胞骨架阻断对肌动蛋白丝的影响

目的：探讨流体剪切力对成骨细胞细胞骨架的影响.方法：实验分为3组,Ⅰ组（流体剪切力）,Ⅱ组（流体剪切力＋细胞松弛素D,Cytochalasin D）,Ⅲ组（流体剪切力＋噻氨酯哒唑,Nocodazole）.分别对Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组施加12dyne/cm2流体剪应力,应力作用时间分别为：0,10,30,60min.采用激光共聚焦显微镜、免疫荧光显微镜技术和免疫荧光染色方法对小鼠成骨细胞骨架进行形态学观察、F-肌动蛋白表达的荧光定量分析.结果：细胞在不同时间点受到同一剪切应力后,细胞的排列方向发生改变,细胞内的F-肌动蛋白排列同应力方向一致,随着应力时间延长到1h,F-肌动蛋白变得厚而丰富,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比明显增强（P〈0.01）.当加入细胞松驰素D后,细胞内F-肌动蛋白结构发生改变,在力的作用下,细胞内微丝断裂明显,随着拉伸时间的延长,微丝断裂更为明显,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比显著减弱（P〈0.01）.加入噻氨酯哒唑后,在剪切力作用下细胞内微管断裂,F-肌动蛋白丝完整且边缘呈锯齿状改变,它的荧光强度同0时段剪切力组相比也有明显减弱（P〈0.05）.结论：不同时间点受到同一剪切应力对细胞骨架微丝、微管结构产生一定的影响,微丝解聚和重排以及微管断裂与否在细胞力传导中起重要作用.     

过氧亚硝基阴离子调控谷氨酸脱氢酶的催化功能

目的:观察过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对谷氨酸脱氢酶(GDH)的硝基化修饰及功能调控.方法: GDH与ONOO-体外反应,测定酶活性及别构调节效应.Western Blot检测GDH硝基化修饰;制备含"去硝基化酶"的脾脏蛋白,观察能否逆转ONOO-作用.结果: 4～12 μmol/L ONOO-不影响GDH活性和二磷酸腺苷(ADP)别构激活作用,但使三磷酸鸟苷(GTP,10 μmol/L)别构抑制作用由(49±4)%降低至(69±7)%和(75±3)%;36～108 μmol/L ONOO-使GDH活性由(0.81±0.05)kat/kg降低至(0.55±0.06)和(0.29±0.07)kat/kg,使GTP(10 μmol/L)别构抑制作用降低至(83±4)%和(95±7)%;324 μmol/L ONOO-使GDH完全失活. Western Blot检测到ONOO-使GDH发生硝基化修饰.脾脏蛋白可部分逆转上述作用.结论: ONOO-可通过硝基化修饰调控GDH催化功能.     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其特性研究

目的 建立耐紫杉醇的人肺腺癌A549(A549/Taxol)细胞株,并初步研究其生物学特性.方法 应用抗肿瘤药紫杉醇以体外浓度递增和短时作用法筛选A549细胞株.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的耐药指数及对多种抗癌药物的敏感性;免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P170)、β-tubulin等耐药相关蛋白的表达情况.结果 A549/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50 )是亲代A549细胞的512.8倍,群体倍增时间是亲代细胞的1.28倍,对紫杉醇、丝裂霉素、长春新碱、诺维本的耐药指数依次为512.8、66.48、4.88和 2.06;而对顺铂、健择无交叉耐药.A549/Taxol细胞高表达P170,β-tubulin表达水平高于其亲代细胞系.结论 成功建立了一株耐紫杉醇的A549/Taxol,并呈多药耐药特性.     

蛋白酶体功能障碍对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤

目的探讨蛋白酶体抑制剂lactacystin对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤.方法不同浓度的lactacystin(1、5、10、15和20μmoL/L)分别处理多巴胺能PC12细胞和胶质瘤U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;50 μmol/L的lactacystin处理U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;10、20 μmol/L lactacystin处理PC12细胞,Western Blot检测细胞内多泛素化蛋白含量;单胺氧化酶B抑制剂selegiline(500μmol/L)和特异性酪氨酸羟化酶抑制剂α-MT(1 mmol/L)提前4 h预处理PC12细胞,再与10 μmol/Llactacystin共同作用24 h,MTT法检测细胞活力,Western Blot检测多泛素化蛋白含量.结果Lactacystin呈剂量依赖性损伤多巴胺能PC12细胞,其对胶质瘤U251细胞无毒性作用,而且其毒性与细胞内多泛素化蛋白生成增加相关.用以增加细胞内多巴胺含量的selegiline和用以减少细胞内多巴胺含量的α-MT都导致lactacystin毒性增强.结论蛋白酶体功能障碍特异性损伤多巴胺能细胞,而其特征性的神经递质多巴胺在其易感性中的作用复杂.     

紫杉醇-顺铂联合药物控释系统对肺腺癌细胞系 A549细胞生长的抑制作用

目的：观察以聚碳酸亚丙酯乳液作为纺丝液,采用静电纺丝技术,负载紫杉醇和顺铂制备的载药纤维控释系统对体外培养的肺腺癌细胞系 A549的抑制率,为进一步的动物实验奠定基础,并探讨用于肺癌治疗的可行性。方法体外培养肺腺癌细胞系 A549。分别比较紫杉醇、顺铂和两药联合纤维载药控释系统与其相应的裸药对照组对 A549的抑制率。肿瘤细胞生长抑制率测定采用酶标仪测定吸光度（490 nm 波长）。药物对肿瘤细胞抑制率=（对照组吸光度-实验组吸光度值）/对照组吸光度。结果紫杉醇单药、顺铂单药和两药联合的载药纤维控释系统对肺癌细胞 A549的生长的抑制率均强于相应的裸药组。顺铂单药和两药联合的载药纤维控释系统的肿瘤细胞抑制率随药物浓度的增加而呈明显的上升趋势。结论聚碳酸亚丙酯负载紫杉醇和/或顺铂静电纺丝制备控释给药系统可显著抑制体外培养的肺腺癌细胞系 A549的生长。该给药系统有望实现抗癌药物解剖靶向控释给药。     

β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用不同浓度的β-榄香烯干预A549和H460细胞后,台盼蓝拒染试验和MTT试验检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:不同浓度β-榄香烯能抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖性,β-榄香烯干预后的A549细胞凋亡率明显升高,其相关抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达下调。结论:β-榄香烯可抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。