阿托伐他汀对脂多糖诱导下人肺上皮细胞C反应蛋白表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀能否调节脂多糖(LPS)诱导下人肺上皮细胞CRP的表达.方法:对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预,同时设置对照组,分别提取细胞RNA,采用RT-PCR方法比较CRP mRNA表达;收集培养上清液,采用ELISA方法比较CRP的浓度.结果:在LPS诱导下,人肺上皮细胞有CRP mRNA的表达及蛋白的分泌,并呈时间和剂量依赖关系;阿托伐他汀明显降低LPS诱导下人肺上皮细胞CRP mRNA的表达及蛋白的分泌,并呈剂量依赖关系.结论:阿托伐他汀能降低LPS诱导的人肺上皮细胞CRP mRNA表达及蛋白分泌,提示阿托伐他汀可能具有直接抗炎作用.     

阿托伐他汀对脂多糖诱导的人肺上皮细胞分泌PGE2和IL-6的影响

目的：探讨阿托伐他汀（atorvastatin）对经脂多糖（LPS）诱导人肺上皮细胞(A549)的炎症细胞因子PGE2和IL-6分泌的影响。方法：对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预，同时设置对照组，分别收集其培养上清液，采用ELISA方法，比较PGE2和IL-6浓度。结果：①在不同浓度的LPS诱导下，肺泡上皮细胞不同时间分泌PGE2和IL-6浓度明显高于未经LPS诱导的对照组（P<0.05）。②阿托伐他汀不同浓度的干预，肺上皮细胞PGE2和IL-6的分泌浓度较无阿托伐他汀干预组均有不同程度的降低（P<0.05）。结论：阿托伐他汀能降低脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症因子PGE2和IL-6的分泌, 提示他汀类药物对肺上皮细胞有直接抗炎作用。     

脂多糖对人肺泡上皮细胞一氧化氮分泌的影响

目的探讨脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导人肺泡上皮细胞（A549）一氧化氮（Nitric oxide，NO）分泌的影响。方法对A549给予不同浓度的LPS，分别收集其培养上清液，用硝酸还原法检测NO浓度。结果不同浓度LPS诱导A549，NO分泌量高于未经LPS诱导的对照组，且具有浓度、时间依赖性。结论LPS诱导A549NO的分泌，提示LPS具有诱导肺泡上皮细胞急性炎症和氧化应激的作用。     

结核杆菌耐热抗原对A549细胞分泌SP-B和凋亡的影响

目的 探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响.方法 用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组1和对照组2)和阳性对照组[脂多糖(LPS)组和姜黄素组].运用ELISA法检测对照组1、LPS组和实验组1(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h和48 h)培养上清液中的SP-B表达量;使用实时荧光定量PCR法检测对照组1、LPS组和实验组1中基因SFTPB的相对表达量;采用流式细胞技术检测对照组2、姜黄素组和实验组2(2、3 μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h)中A549细胞的凋亡率.结果 刺激诱导相同时间,实验组1的SP-B表达量低于对照组1,差异有统计学意义(P ＜0.05);相同浓度刺激诱导随时间的延长,实验组1中SP-B表达量降低的不显著.相同培养时间,随着Mtb-HAg浓度的增加实验组1表达SP-B的基因SFTPB的相对表达量显著低于对照组1,差异有统计学意义(P＜0.05);而在相同有效刺激浓度下,其相对表达量随作用时间变化不显著.姜黄素组和实验组2中的A549细胞凋亡率显著高于对照组2(P ＜0.05).结论 Mtb-HAg对A549细胞表达SP-B的抑制作用明显,并能诱导A549细胞发生凋亡.     

血管活性肠肽对肺炎支原体诱导的人肺上皮细胞分泌TNF-α的影响

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞(人肺腺癌上皮细胞株)产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平以及血管活性肠肽(VIP)对TNF-α产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α的含量;用不同浓度的VIP预处理A549细胞,然后再以Mp诱导,测定细胞培养上清液中TNF-α的含量。结果:A549细胞经Mp刺激后,TNF-α的产生水平明显高于正常细胞对照组(P<0.05),且TNF-α的产生水平与Mp的感染复数和感染时间具有依赖性。VIP不同浓度的干预,A549细胞TNF-α的分泌浓度较无VIP干预组有不同程度的降低(P<0.05)。结论:Mp可诱导A549细胞产生TNF-α,VIP可有效降低Mp诱导的TNF-α的产生,提示VIP对肺上皮细胞有直接抗炎作用。     

熊果酸对脂多糖作用下肺上皮细胞炎症因子表达的影响及机制研究

目的:熊果酸(ursolic acid,UA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人肺上皮细胞来源的A549细胞的生物学活性影响及潜在机制.方法:CCK-8检测不同浓度(10、50、100、150、200 μg/mL)UA对A549细胞增殖的影响.此外,检测浓度为10 μg/mL的UA作用于A549细胞不同时间点对细胞的增殖影响.荧光定量PCR检测UA对LPS作用下A549细胞的白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达.ELISA检测ERK、p38、JNK抑制剂对UA对LPS作用下A549细胞的IL-1β表达的影响,结果采用单因素方差分析.结果:UA能够显著抑制A549细胞的活性且呈浓度依赖性.CCK-8检测结果显示,UA作用A549细胞24h后,10 μg/mL的UA能够明显抑制A549细胞的活性(P＜0.05).此外,UA能够明显抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达(P＜0.05).其中,对LPS诱导的IL-1β抑制作用最为明显.ELISA结果显示,ERK、JNK信号通路抑制剂作用下并不能影响UA抑制炎症的效果,但p38信号通路抑制剂能显著逆转UA对LPS诱导的IL-1β的抑制作用(P＜0.05).p38信号通路的激活剂却可以逆转这种抑制作用(P＜0.05).结论:UA能够抑制LPS诱导的IL-1β,且通过p38信号通路作用.     

人肺泡型细胞A549在大肠埃希菌诱导下非特异性免疫分子的表达

目的:呼吸道上皮细胞在呼吸道固有免疫应答中起重要作用,文中探讨呼吸道上皮细胞对大肠埃希菌(E.coli)的应激反应能力及其作用机制.方法:常规体外培养A549细胞,细胞传代24h后加入灭活的E.coli,进行不同浓度或时间的诱导;用半定量RT-PCR法检测其细胞中白细胞介素(IL)-6、补体C3和C-反应蛋白(CRP) mRNA水平;ELISA法检测其上清液中IL-6、CRP和血清淀粉样蛋白A(SAA)蛋白水平,免疫比浊法检测其上清液中C3蛋白水平.结果:培养的A549细胞在不同浓度和不同时间的E.coli诱导下,表达IL-6、C3和CRP mRNA及IL-6、C3、CRP和SAA蛋白水平呈浓度和时间的依赖性.与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05).结论:呼吸道上皮细胞在病原微生物刺激下,表达多种非特异性免疫效应分子,积极清除外来致病物,发挥重要的固有免疫防御作用.上皮细胞还可能在固有免疫和适应性免疫之间起连接作用.     

隐孔菌多糖对脂多糖诱导人肺上皮细胞生成单核细胞趋化蛋白-1的作用

目的：研究隐孔菌多糖（CP）对脂多糖（LPS）诱导人肺上皮细胞株A549生成单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响。方法：在有或无CP条件下用LPS诱导A549细胞株，分别采用ELISA和RTPCR法，测定MCP-1蛋白浓度和MCP-1 mRNA的表达。结果：LPS 1000μg／L诱导A549细胞24h明显增加MCP1的生成。CP 100μg／L或地塞米松1μmol／L对A549细胞株的生长和活力无明显影响。CP100μg／L或地塞米松1μmol／L能明显抑制LPS诱导A549细胞株的MCP-1蛋白含量和mRNA的表达。结论：结果证明，CP能调节MCP-1的生成，可能是其抗肺部炎症的作用机制之一。     

瑞巴匹特抑制脂多糖诱导肺上皮细胞株A549表达TLR4和释放TNF-α

目的：研究瑞巴匹特对肺上皮细胞株A549 细胞TLR4表达及分泌肿瘤坏死因子（TNF-α）的影响。方法：用脂多糖(LPS)建立体外A549 细胞体外炎症损伤模型,实验分为对照组（无干预无刺激）、模型组（LPS刺激）、干预组1（LPS和10 mg/L瑞巴匹特）、干预组2（LPS和30 mg/L瑞巴匹特）、用ELISA观察A549细胞分泌TNF-α和RT-PCR及蛋白免疫印迹观察A549 细胞TLR4的表达。 结果：LPS诱导A549 细胞分泌TNF-α（与对照组比较,P＜0.01）, 在第6 h达高峰;LPS诱导A549 细胞表达TLR4（与对照组比较,P＜0.01）;瑞巴匹特可抑制LPS诱导A549 细胞分泌TNF-α和表达TLR4（与模型组比较,P＜0.05）,但2组干预组间无统计学差异（P＞0.05）。 结论：瑞巴匹特的抗炎机制可能是通过抑制TLR4的表达,从而减少炎性细胞因子的释放;瑞巴匹特有可能作为一种有价值的抗感染治疗的辅助药物。     

探讨肺纤维化时表达单核细胞趋化蛋白-1的主要效应细胞

目的 研究凝血酶对人肺上皮细胞及正常人肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调节作用.方法 人肺支气管上皮细胞(normal human bronchial epithelial cells,NHBE)、人肺癌上皮细胞系A549及正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblasts,NH-LF)分别培养于96孔或6孔板培养板内,凝血酶诱导4h和24h后,收集上清液及细胞裂解液.ELISA方法检测MCP-1蛋白水平:实时荧光定量RT-PCR技术检测MCP-1 mRNA水平.结果 凝血酶可诱导NHBE、A549及NH-LF细胞释放MCP-1,但NH-LF细胞的MCP-1释放量远远高于NHBE及A549细胞;凝血酶还可诱导NH-LF细胞mRNA表达.结论 人肺成纤维细胞可能是肺内表达MCP-1的主要来源细胞,因此在肺纤维化时可能起重要作用.     

LPS刺激对人结肠癌SW480、肺癌A549细胞HMGB1以及HBD-1表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响。方法以浓度为5、10、50和100ng／μl LPS刺激SW480、A549细胞24h后,提取细胞RNA,并用RT—PCR法检测HMGB1以及HBD-1基因mRNA的表达水平。结果SW480以及A549细胞,HMGB1以及HBD-1均有较高的表达。在SW480细胞中,不同的LPS刺激浓度下,5ng／μl LPS即可上调HMGB1基因mRNA的表达,但其表达量并不随LPS浓度的增高而有所增加;而同样刺激条件下HBD-1基因mRNA表达水平未见明显变化（P〉0．05）。在A549细胞中,不同的LPS刺激浓度下HMGB1以及HBD-1基因mRNA表达量未见明显变化（P〉0．05）。结论HMGB1及HBD-1固有表达于肠道及呼吸道上皮细胞。LPS能上调SW480细胞HMGBl的表达,其表达量无浓度依赖性,但LPS不能上调HBD-1的表达。在A549细胞,LPS不能诱导HMGB1以及HBD-1的表达。     

Toll样受体4在人肺泡上皮细胞株中的表达及其在细胞炎症反应中的作用

目的 明确人Ⅱ型肺泡上皮细胞是否表达Toll样受体4(TLR4),探讨TLR4在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用.方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒(E1A+组)和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组(E1A-组),分别以不同浓度的脂多糖(LPS,0、0.1、1、10μg/ml)、白细胞介素1β(IL-1β,0、0.1 ng/ml)、香烟提取物(CSE,0、10%、20%、40%)刺激.刺激后12、24 h,用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞IL-8 mRNA和TLR4 mRNA的表达,用蛋白质印迹技术测定核因子κB(NF-κB)亚单位P65蛋白的表达.结果 10μg/ml LPS、0.1 ng/ml IL-1β或20%CSE刺激24 h后,E1A+组IL-8 mRNA表达量(2.82、1.87、4.70)明显高于正常对照组(0.95、0.78、1.02,均P<0.05)和E1A-组(0.97、0.81、1.12,均P<0.05).10μg/ml的LPS刺激后12、24 h,E1A+组细胞TLR4 mRNA表达水平分别为4.52、7.99,明显高于正常对照组(1.91、3.81,均P<0.05)和E1A-组(2.00、3.88,均P<0.05);IL-1β也可增加TLR4 mRNA表达.CSE刺激对各组细胞TLR4 mRNA表达水平均无明显影响.3种刺激因子均可引起各组细胞NF-κB亚单位P65蛋白表达水平增高.结论 人Ⅱ型肺泡上皮细胞表达TLR4,LPS、IL-1β引起IL-8释放可能与TLR4介导的NF-κB激活有关.     

慢性阻塞性肺疾病患者TH17细胞的表达及功能研究

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者TH17细胞的表达及功能。方法:选取COPD稳定期患者30例作为COPD稳定期组,门诊不吸烟的健康体检者30名为正常对照组。通过流式细胞术检测外周血TH17细胞的表达,ELISA检测血浆中白介素(IL)-17、IL-4、干扰素(IFN)-γ水平。结果:外周血中TH17细胞比例COPD稳定期组要高于正常对照组(P0.01),ELISA检测表明,COPD稳定期组血浆中IL-17和IFN-γ水平均明显高于正常对照组(P0.01),2组血浆中IL-4水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:TH17细胞在COPD中的表达增加,参与了COPD慢性炎症过程。     

脂多糖对人肝内胆管上皮细胞IL-6/STAT3信号通路的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞(HiBECs)白介素(IL)-6/STAT3信号通路的影响.方法 HiBECs细胞常规体外培养,使用不同浓度的LPS(0、0.1、1、2、4、8 μg/ml),分别作用该细胞24、48、72 h后,ELISA法检测IL-6的表达水平,确定LPS的最适刺激浓度及最佳刺激时间,再以其进行后续实验;RT-qPCR法测定c-Myc mRNA、Mcl-1 mRNA的表达情况;Western blot法测定p-STAT3/STAT3蛋白比例及c-Myc、Mcl-1蛋白的表达情况.结果 LPS能够促进HiBECs细胞IL-6分泌,并且在4 μg/ml、24 h时IL-6的分泌量达最大(F=16.492、17.763,P<0.001、P<0.01);LPS刺激HiBECs细胞后,c-Myc mRNA、Mcl-1 mRNA表达上调 (P<0.01);p-STAT3/STAT3蛋白比例增高(P<0.05),c-Myc(P<0.001)、Mcl-1(P<0.05)蛋白表达增多.结论 LPS能够激活HiBECs细胞IL-6/STAT3信号通路,并且可能通过该信号通路促进Mcl-1、c-Myc的表达.     

γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法正常氧条件下培养肺腺癌细胞A549,通过Western blotting及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。在正常氧条件下,不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肺腺癌细胞A549(加药组),48 h后采用Western blotting方法检测Notch1蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1mRNA表达的变化,应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响;每个浓度设二甲基亚砜对照组。结果 Notch1～4各亚型在A549细胞均有表达。5、10、20μmol/L MW167处理肺腺癌A549细胞48 h后,各加药组与对照组相比,Notch1蛋白表达升高(P<0.05),而HES1 mRNA表达下降(P<0.05),随MW167浓度升高,对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐升高(r=0.927,P<0.01)。MTT法检测结果显示各加药组吸光度高于对照组(P<0.05),且随MW167浓度升高,细胞增殖率相应升高(r=0.904,P<0.01)。结论在正常氧条件下,MW167可阻断Notch信号通路,对A549细胞起促增殖作用;Notch1信号通路可能在A549细胞中起一定抑癌作用。     

IL-13对肾小球系膜细胞的IL-12表达的影响

目的探讨白细胞介素13（IL-13）对肾小球系膜细胞分泌白细胞介素12（IL-12）的调节作用。方法用酶联免疫吸附（ELISA）法和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测系膜细胞的IL-12蛋白水平和IL-12p40 mRNA的表达。结果未受刺激的系膜细胞无IL-12mRNA的表达及其蛋白分泌。LPS诱导系膜细胞的IL-12p40mRNA的表达及其蛋白分泌。IL-13在1～100ng／ml的浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞的IL-12分泌及其mRNA的表达。结论LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，而IL-13则抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12的表达；IL-13可能通过抑制IL-12的产生，调整了体内Th1／Th2细胞因子的平衡，作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定的作用。