肾透明细胞癌中谷胱甘肽S-转移酶M3基因的表达及其启动子区CpG岛的甲基化水平

目的:检测肾透明细胞癌(ceRCC)中谷胱甘肽S-转移酶M3(GSTM3)基因表达水平,观察其启动子区CpG岛的甲基化水平,探讨GSTM3基因甲基化与ccRCC发生和转移的关系.方法:半定量RT-PCR检测ccRCC高转移潜能细胞系(RCC05-TXJ)、低转移潜能细胞系(RCC05-ZYJ)、24例原位ccRCC及其癌旁肾组织和14例ccRCC转移组织的GSTM3基因的表达水平.用去甲基化剂5-Aza-CdR干预RCC05-ZYJ,RT-PCR检测处理前后GSTM3基因的表达变化.用巢式BSP(nes-ted bisulfite sequencing PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织的GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点.采用巢式MSP(nested methylation specific PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织、8例ccRCC转移组织甲基化情况.结果:RCC05-TXJ中GSTM3基因表达强度低干RCC05-ZYJ.5-Aza-CdR处理RCC05-ZYJ后,GSTM3基因表达强度高于处理前.24例原位ccRCC中17例GSTM3基因的表达强度低于其在癌旁肾组织中的表达强度,其余7例原位ccRCC中GSTM3基因的表达强度不低干其在癌旁肾组织中的表达.10例原位ccRCC及其癌旁和8例转移组织中,癌组织GSTM3基因启动子甲基化阳性为4例,癌旁组织2例(P=0.628),转移组织1例(P=0.314),差异无统计学意义.结论:GSTM3基因表达与ccRCC的发生、转移密切相关,其启动子区CpG岛甲基化会降低该基因的表达;初步筛选出ecRCC中GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点,为后续研究奠定了基础.     

汉族人肾透明细胞癌肺转移小鼠模型的建立及肺转移细胞亚株的筛选

目的:建立可稳定传代的肾透明细胞癌小鼠肺转移模型，并在此基础上初步筛选出肾透明细胞癌特异性鼠肺转移细胞亚株，为后续研究奠定基础。方法:选用本实验室前期建立的肾透明细胞癌细胞株RCC05-TXJ，体外扩增培养制成细胞悬液后注射于NOD-SCID小鼠颈背部皮下，成瘤后取出瘤组织接种于另外NOD-SCID小鼠的肾包膜下，待有肉眼可见瘤块后，处死小鼠并取出肿瘤组织接种于新NOD-SCID小鼠的肾包膜下，反复数轮，直至出现稳定的鼠肺转移模型。此时取模型鼠肺转移组织，一部分继续接种于新鼠肾包膜下，反复数轮，尝试以转移组织诱导肺转移；另一部分进行原代培养，细胞经体外扩增纯化后制成悬液接种于新鼠肾包膜，数轮循环至产生肺转移，筛选能产生稳定鼠肺转移的细胞亚株。整个筛选过程均观察记录原位成瘤、淋巴及肺转移形成情况，并对肿瘤组织进行病理组织学观察及CA9（肾癌标志）、CD133（干细胞标志）表达检测。结果:以RCC05-TXJ细胞株接种所致NOD-SCID小鼠颈背部皮下肿瘤组织作为移植瘤材接种鼠肾包膜在第2轮即出现鼠肺转移，此后3~6轮以鼠肺转移组织移植肾包膜下，均能成功诱导转移。以鼠肺转移组织原代培养RCC细胞均获成功，第6轮原代培养细胞扩增纯化后制成的细胞悬液（RCC05-TXJ-L）接种于鼠肾包膜下，出现特异性肺转移，重复2轮实验结果稳定。RCC05-TXJ-L细胞具有生长速度快（传代时间约为2 d）、原位成瘤时间短（1周左右）、接种后转移性较强、CA9及CD133表达升高等特点。结论:RCC05-TXJ在NOD-SCID小鼠体内多轮反复筛选可建立稳定的肾细胞癌鼠肺转移动物模型；在此基础上筛选出的肺转移性细胞亚株RCC05-TXJ-L可稳定诱导NOD-SCID鼠产生肺部转移。     

肾透明细胞癌CD133的表达及其体外对α-干扰素和5-氟尿嘧啶处理效果的影响

目的:观察肾透明细胞癌中是否存在类似肿瘤干细胞(TSC)特性的细胞,并探讨这部分细胞对干扰素及化学治疗肾透明细胞癌疗效的影响。方法:选用高转移性肾透明细胞癌细胞株RCC05-TXJ、低转移性肾透明细胞癌细胞株RCC05-ZYJ、临床原位肿瘤样本培养的低代数非转移性肾透明细胞癌细胞(来自男、女性患者各1例)。采用流式细胞术及免疫组化法检测上述4种细胞干细胞标志物CD133的表达情况;采用α-干扰素、5-FU分别处理4种细胞,用MTT法检测药物处理前后细胞存活率。结果:流式细胞术检测结果发现转移性的RCC05-TXJ及RCC05-ZYJ细胞有CD133表达,男、女性原位癌细胞CD133几乎不表达;免疫组化结果显示RCC05-TXJ及RCC05-ZYJ在细胞膜上局部表达CD133,男、女性肾透明细胞癌细胞几乎不表达CD133;化疗药和干扰素干预组RCC05-TXJ、RCC05-ZYJ均出现撤药后24 h细胞存活率明显反弹现象,而男、女性原位癌细胞在撤药后细胞存活率持续降低。结论:肾透明细胞癌中存在少数CD133阳性具TSC特性的细胞,这些细胞可能是影响干扰素及化疗效果的原因之一;针对这部分细胞的治疗有望成为今后临床药物治疗的新方向。     

人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903生物学特性的初步观察

目的新建一株人肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的实验模型.方法用组织块法培养,并按细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性.结果细胞维持培养15个月,传代100代,细胞形态及超微结构具有恶性细胞的特征,45代细胞的倍增时间为21.3h,细胞能在软琼脂上生长,形成集落,染色体众数60～67条,主干系为亚三倍体.1q(i)和t(6,11)为其标记染色体,细胞对刀豆球蛋白有凝集反应,5×106细胞接种于裸鼠皮下,肿瘤呈进行性生长.结论该细胞系符合建系标准,是一株新建的肝癌细胞系.     

舌癌淋巴道转移模型中分离并建立舌癌细胞永生化细胞系

目的：在建立舌癌Tca8113淋巴道转移裸鼠模型的基础上,建立永生化的舌癌细胞系,并进一步探讨舌癌转移淋巴结组织中同源癌细胞相关标记物的表达情况,为舌癌干细胞研究提供基本的研究模型。方法：采用癌细胞足垫注射法建立淋巴道转移模型,4周后取淋巴结进行原代细胞培养并分离、纯化舌癌细胞进行连续传代培养、进行永生化细胞系的生物学特性鉴定。结果：在淋巴道转移模型中,HE染色与EMA免疫组化染色发现淋巴结有散在或灶性鳞状上皮癌细胞转移。进而取转移模型裸鼠的淋巴结组织进行原代细胞培养,经分离和纯化以及连续传代而建立舌癌永生化细胞系,命名为Tca8113-Ml,目前传代100余代,时间近2年,生长稳定,倍增时间为22.51h,染色体众数58,保持人染色体形态,细胞形态与Tca8113细胞相似。Tca8113-Ml在裸鼠体内的成瘤率为100%,裸鼠腋窝皮下成瘤的组织切片显示为典型的鳞状上皮细胞癌。结论：在舌癌淋巴道转移模型中,可分离培养与建立永生化的舌癌细胞系。     

裸鼠脊髓转移灶粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及生物学特性

目的 :建立Mc3细胞的脏器转移细胞系 .方法 :采用瘤细胞尾静脉注射法、组织块细胞培养法 ,从裸鼠体获得Mc3细胞系脊髓转移细胞亚系 .用染色体显示、细胞形态及细胞致瘤性观察证明其性质 ;用细胞生长曲线、流式细胞仪测定增值速度 .结果 :从5 0只受试裸鼠中获得一只截瘫的裸鼠 ,取其脊髓组织行原代及传代培养获得细胞并建立细胞系 ,传代 5 0次以上 ,生长稳定 ,倍增时间为 4 3h ,S期细胞占 2 2 .7% ,染色体众数为 6 1,保持人类染色体形态 ,细胞形态与其母细胞相似 ,相差显微镜观察活细胞呈“铺路石”样外观 .裸鼠肺内转移肿瘤组织切片显示为…     

人膀胱癌细胞系BC-6的建立及其生物学特性

目的:建立人膀胱癌细胞系BC-6,为膀胱癌的基础研究提供实验模型.方法:18例膀胱癌标本采用组织块直接培养法、8例采用细胞悬液培养法行原代培养;其中12例同时行裸鼠皮下移植,在皮下生长后,连续裸鼠体内传代3次,再行体外培养.结果:组织块直接培养和细胞悬液培养均未成功.12例裸鼠皮下接种肿瘤有3例生长,l例裸鼠意外死亡,l例裸鼠体内传代F2代肿瘤消失.1例肿瘤裸鼠皮下接种后生长较快,裸鼠体内传代3次后,取部分肿瘤组织体外培养得到膀胱癌细胞系BC-6,其形态结构,分化程度与原发瘤保持一致,染色体形态仍为人类核型,众数维持在66～72之间,占82%,细胞周期分析G1期0.58,G2期0.08,S1期0.35,细胞群体培增时间为44h.结论:通过裸鼠体内移植瘤建立的膀胱癌细胞系BC-6,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代1 a以上,传代92代.细胞形态不变,生长周期恒定,己经成为一个稳定的细胞系.     

miRNA在肾细胞癌分子分型、诊断、预后预测方面的研究进展及应用价值

microRNA (miRNA)参与调节细胞生长的多个环节,包括细胞分化、增殖、凋亡及肿瘤发生、转移等.研究发现,miR-210、miR-32、miR-17-92 cluster等在肾细胞癌(RCC)组织中上调表达,miR-141、miR-200c等下调表达,其异常表达可能与细胞微环境及染色体缺失等有关;miR-155的过表达结合miR-141的下调表达可用于区分RCC肿瘤组织和非肿瘤组织;miR-203、miR-424的过表达用于区分透明细胞癌(ccRCC)和乳头状细胞癌(pRCC);miR-32过表达与ccRCC患者不良预后密切相关;miR-21、miR-106b等与RCC的浸润转移相关.深入探讨miRNA的调节作用机制、明确miRNA在RCC分子分型、早期诊断和预后预测中的价值具有重要临床意义.     

利用裸鼠建立人泌尿生殖系统肿瘤细胞系

目的建立人泌尿系肿瘤无限细胞系,为泌尿系肿瘤研究提供实验模型.方法无菌取下肿瘤标本后,将标本剪成大小约1.0mm3的组织块,在裸鼠右后肢皮下包埋,当皮下肿瘤块发生明显增殖并长到一定程度后,再行裸鼠体内传代两次,最后取下组织块进行原代培养.培养细胞传代超过20代后按建系标准[2]进行检测.结果共取40例标本,裸鼠体内传代F1代成功6例,F3代成功3例,该3例标本行原代培养后建成3个无限细胞系人肾透明细胞癌RCC-9863,人膀胱癌BC-6,人前列腺癌PC-98106,全部细胞传代1年以上,生长稳定,传代周期固定,其形态结构,分化程度与原发瘤保持一致,染色体形态仍为人类核型.结论裸鼠肿瘤皮下种植法是泌尿系肿瘤建系的一个较好方法.     

肾透明细胞癌胰腺转移2例报告

肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC)约占成人恶性肿瘤的3％和原发性肾肿瘤的85％,其中肾透明细胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)为最常见的病理学类型,临床上常见转移部位包括肺脏、肝脏、骨骼、淋巴结等,而胰腺转移较罕见[1].本文回顾了2例原发病灶为ccRCC的胰腺转移性肾细胞癌(Pancreatic metastases from renal cell carcinoma,PMRCC)的患者资料,并结合国内外相关文献,总结其临床特点及诊治经验,为临床提供参考.现报道如下.     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404的建立和生物学特性

目的:研究骨巨细胞瘤细胞体外培养的生物学特性,并建立人骨巨细胞瘤细胞系. 方法: 采用原代组织块培养法培养骨巨细胞瘤手术标本,对存活细胞进行形态学观察、免疫组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、裸鼠移植. 结果: 建立人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404,其形态学表现、免疫组织化学染色均符合骨巨细胞瘤纤维母细胞样基质细胞的特征. 经过近1 a的体外培养,现已传代100次,细胞倍增时间39.7 h,细胞周期测定G1期为67.5%,G2期为8.9%,S期为23.6%. 染色体具有三倍体核型. 裸鼠移植成瘤率100%,无支原体污染. 结论: 人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404可以用于对骨巨细胞瘤的研究.     

细胞黏附对干扰素、5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡的影响

目的探讨细胞黏附作用对干扰素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导细胞凋亡的影响。方法采用HepG2、HEK293细胞株,常规96孔板培养细胞,分为空白不加药(A组)、多聚赖氨酸包被预处理+贴壁后加药(B组)、贴壁后加药(C组)、未贴壁就加药(D组)、未贴壁就加药和Fn抗体(E组)。选用干扰素、5-Fu分别作用各组细胞,MTT法测定各组增殖抑制率和DNA Fragmentation ELISA测定凋亡率,Western blot检测干扰素诱导各组PKR蛋白水平的表达。结果经多聚赖氨酸包被预处理后,细胞对药物的敏感性减弱,MTT法显示抑制率:干扰素作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(27.24±31.77)%、(39.04±14.88)%(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(30.61±11.26)%、(32.94±20.93)%(P<0.05);干扰素作用293细胞,B、C组抑制率分别为(32.02±23.48)%、(46.22±25.20)%(P<0.05);5-Fu作用293细胞,B、C组抑制率分别为(14.07±21.91)%、(31.61±31.49)%(P<0.05)。DNAFrag...     

高浓度腺苷通过抑制细胞增殖促进细胞存活

目的：研究危机环境下腺苷浓度增高对细胞的意义。方法：向细胞培养物中添加高浓度的腺苷来模拟危机环境,研究细胞对高浓度腺苷的生物学反应。结果：高浓度腺苷抑制细胞增殖,而不诱导细胞凋亡的发生;腺苷通过抑制细胞周期的进行而抑制细胞增殖;腺苷促进细胞在无糖环境下的存活。结论：腺苷通过抑制细胞增殖从而促进细胞在无糖环境下的存活。     

高胆血红素血症新生儿T细胞亚群、NK细胞表达水平的研究

目的 探讨高胆血红素血症新生儿T细胞亚群、NK细胞表达水平,为高胆血红素血症新生儿的早期诊疗、干预保健提供科学依据.方法 无菌采集健康足月自然分娩1分钟Apger评分≥8分,5分钟评分10分,体重在2.8～4Kg新生儿脐静脉肝素抗凝血2ml及不同高胆血红素血症新生儿股静脉肝素抗凝血2ml,采用美国RD有限公司提供的试剂,采用间接免疫荧光技术和S.P法,测定其T细胞亚群及NK细胞的水平.结果 （1）三个组CD3、CD4、CD8、NKCD16、NKCD57与对照组比较,均P＜0.01差异显著,有统计学意义.（2）一组与二组、三组比较,除了二组CD8 P＞0.05差异无统计学意义外,其他均P＜0.01差异显著,有统计学意义.结论 证实了高胆血红素血症新生儿胆红素毒性对其T细胞亚群及NK细胞有免疫抑制作用,可致患儿细胞免疫功能低下.这也是高胆血红素血症新生儿易并发感染的理论基础.为高胆血红素血症新生儿早期诊疗、干预及保健提供了基础免疫学依据.     

人胚腺垂体细胞库的初步建立

目的：初步探讨建立人胚腺垂体细胞库的方法及冷冻移植物复温后的形态和功能。方法：将人胚腺垂体细胞培养至第5天冷冻，15天后复温再培养，与单纯培养组相对照，相差显微镜下观察细胞形态，苔盼蓝测拒染率及检测激素分泌功能。结果：冷冻复温后垂体细胞存活率平均达78．2％；光镜下生物学状态无改变；GH分泌细胞复温后第5－7天状态最佳；PRL、TSH分泌水平差。结论：本方法适于建立人胚腺垂体细胞库用于治疗垂体性侏儒症，移植时机为复温后5－7天，该冷冻方法不适于PRL分泌细胞，培养条件不适用于TSH分泌细胞。     

乳腺癌干细胞耐放射性与细胞周期的关系

肿瘤的放射疗法是一种建立在细胞周期基础上的治疗方法,乳腺癌干细胞在放疗过程中出现的G2/M期阻滞、衰老途径下调、APE1水平升高及细胞周期调控相关基因p21和p53活性等改变直接或间接导致细胞周期紊乱,均与乳腺癌干细胞的耐放射性密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点.     

干细胞分化的表观遗传调控

干细胞具有自我更新能力和多谱系细胞分化能力,在基础医学和临床应用中有极大研究意义。以胚胎干细胞为模型,近年来干细胞分化的表观遗传调控已成为研究热点。染色质结构的表观遗传调控,比如DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰,对于胚胎发育时基因的激活和抑制非常关键。本文综述了干细胞多潜能性维持和干细胞分化的表观遗传机制及其一些表观遗传修饰之间的联系。