hTERT和HPV16/18E6蛋白表达与宫颈病变的关系及意义

目的：探讨人端粒酶逆转录酶（hTERT）和人乳头状瘤病毒16/18型E6蛋白（HPV16/18E6蛋白）表达与宫颈病变之间的关系及意义.方法：通过免疫组化SupervisionTM二步法检测宫颈病变中hTERT及HPV16/18E6蛋白的表达.结果：hTERT和HPV16/18E6蛋白表达均随宫颈病变严重程度增加而增加,且与病变级别呈正相关（r=0.475,r=0.416,均P＜0.05）;hTERT与HPV16/18E6蛋白表达呈正相关（r=0.372,P＜0.05）.结论：hTERT及HPV16/18E6蛋白参与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生,两者具有一定的相关性.     

人乳头状病毒 E6蛋白与宫颈癌关系的研究进展

人乳头状病毒（ human papillomavirus, HPV）感染是宫颈癌发生的最重要因素。 HPV的早期基因区编码早期调控蛋白中的E6蛋白与宫颈癌的发生发展密切相关。 HPV表达E6蛋白诱发宫颈癌的机制包括降解P53蛋白、激活端粒酶、影响与PDZ蛋白的交联作用、扰乱细胞的信号转导、抑制免疫识别和阻碍细胞凋亡等途径。靶向HPV E6蛋白有望在宫颈癌预防和治疗中发挥重要作用。     

端粒酶与宫颈癌的发生、发展

端粒酶在大多数恶性肿瘤中呈高表达。在宫颈癌中的表达率几乎为80％－100％。HPV感染在宫颈癌的发病中起着重要作用。高危型HPV中有两个重要的癌基因E6、E7，宫颈癌中E6、E7的表达与端粒酶的表达有一定的相关性。端粒酶反义寡核苷酸通过抑制端粒酶活性，延长肿瘤细胞的倍增时间，抑制移植瘤的生长，其治疗肿瘤的机制多数文献认为是启动了细胞的凋亡。     

宫颈癌中端粒酶的表达与HPV E6/E7基因的研究

目的 探讨端粒酶活性表达与HPV E6/E7基因在宫颈癌发生发展中的作用以及两者的关系.方法 查阅近年来国内外相关文献及相关试验、理论研究成果讨论两者在宫颈癌发生发展中的作用以及其相关性做一综述.结果 高危型HPV E6/E7蛋白是病毒致癌蛋白,在宫颈癌的发生起重要的作用,端粒酶活性表达在子宫颈癌的发生发展中同样起重要的作用,其活性表达与HPV感染密切相关.结论 将hTERT与HPV E6/E7基因有关的基因或蛋白结合起来应用可提高对宫颈肿瘤的早期诊断率,并将其作为一种早期的筛查HPV手段,对宫颈癌的预警和筛查有重要作用,在临床上有一定的应用价值.     

乳腺癌中的HPV16感染对hTERT蛋白表达的影响

目的为了研究乳腺癌中的HPV16感染对hTERT蛋白表达的影响。方法检测了人乳头状瘤病毒HPV16和人端粒酶逆转录酶（hTERT）在乳腺癌中的表达。应用免疫组化SP法共检测了52例乳腺癌和16例乳腺良性瘤HPV16和hTERT蛋白的表达。结果表明HPV16和hTERT蛋白在乳腺癌组的阳性表达率均显著高于乳腺良性瘤组。统计分析表明,hTERT蛋白表达阳性率与HPV感染率密切相关（P〈0.05）。结论HPV16感染参与了乳腺癌的发生,其致癌机制可能是通过某种途径引起hTERT蛋白表达增加而导致乳腺癌的发生。     

16型人乳头瘤病毒 E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变发展中的表达及意义

目的 研究16型人乳头瘤病毒(HPV16) E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织的表达,探讨其与宫颈癌前病变恶性进展间的关系,为寻找预测宫颈癌前病变转归方向的分子指标做一探索.方法采用免疫组织化学EnVision二步法检测30例原发性浸润性宫颈癌(ICC组,n=30)、CIN[CINⅠ-Ⅱ组,n=60;CINⅢ(含原位癌)组,n=30]、正常宫颈组织标本(正常组,n=10)中HPV16 E6、E7蛋白和端粒酶的表达.结果 HPV16 E6、E7蛋白和端粒酶在正常组、CINⅠ-Ⅱ组、CINⅢ组和ICC组中的阳性表达均呈逐级增高趋势.HPV16 E6蛋白的表达:ICC组高于正常组,CINⅢ组高于正常组、CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05);HPV16 E7蛋白的表达:ICC组、CINⅢ组高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);端粒酶的表达:ICC组高于CINⅢ组,CINⅢ组高于CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05).HPV16 E6与HPV16 E7蛋白、HPV16 E6蛋白与端粒酶、HPV16 E7蛋白与端粒酶的表达呈正相关(r=0.272,P＜0.05;r=0.279,P＜0.05;r=0.376,P＜0.01).结论 HPV16 E6、E7蛋白和端粒酶随宫颈病变CIN的升级其阳性表达率、表达强度呈逐渐递增趋势.在宫颈癌变过程中HPV16 E6、E7蛋白和端粒酶的阳性表达均呈正相关.HPV16 E6、E7蛋白和端粒酶作为CIN的预后因子还尚待进一步研究.     

应用组织芯片技术研究人宫颈鳞状细胞癌及宫颈上皮内瘤样变组织中HPV16感染与端粒酶hTERT表达的关系

目的：探讨卸PV16感染与端粒酶hTERT表达在人宫颈鳞癌及其癌前病变中的关系。方法：利用组织芯片技术结合原位杂技术和免疫组织化学方法研究130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样变组织和宫颈鳞癌组织中HPV16感染以及端粒酶hTERT表达的情况。结果：①在8／22CINⅠ，7／11CINⅡ，11／13CINⅢ，4／6原位癌，41／52宫颈鳞癌中为HPV16杂交信号阳性，CINⅢ、浸润癌与正常宫颈组织相比，HPV16杂交信号阳性率差异有显著统计学意义（P〈0．05）；②从CINⅡ到CINⅢ到浸润性鳞癌，hTERT表达与正常宫颈组织相比差异皆有统计学意义（P〈0．05），且阳性程度逐渐增加；③端粒酶hTERT表达在各级CIN、原位癌及浸润癌组织中，与HPV16型的感染率之间呈现正相关性（P〈0．05，r=0．339）。结论：宫颈鳞癌的形成与HPV16的感染、端粒酶hTERT表达之间有重要关系。宫颈鳞癌及其癌前病变组织中HPV16感染与端粒酶hTERT表达之间具有正相关性，检测两者配合细胞学检查，有利于提高宫颈癌及其癌前病变的诊断率。组织芯片技术是高效的研究基因及其表达产物的技术平台。     

人乳头状瘤病毒感染及端粒酶活性与维吾尔族子宫颈癌的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV16）感染及端粒酶激活与维吾尔族子宫颈癌的关系。方法：对32例维吾尔族宫颈癌、25例宫颈上皮内瘤变（CIN）及33例慢性宫颈炎患者应用PCR（聚合酶链反应）技术及PCR—TRAP（重复序列扩增）法进行HPV16及端粒酶活性检测。结果：（1）端粒酶阳性表达率依次为：CIN〉宫颈癌〉慢性宫颈炎；（CINⅢ级〉（TINⅠ、Ⅱ级（P〈0．05）。端粒酶活性水平：CIN〉宫颈癌〉慢性宫颈炎（P〈0．05）；CINⅢ级〉（CINⅠ、Ⅱ级（P〈0．05）。（2）HPV16阳性表达率依次为：宫颈癌〉CIN〉慢性宫颈炎（P〈0．05）。（3）宫颈组织中HPV16及端粒酶协同阳性表达率为：宫颈癌〉CIN〉慢性宫颈炎（P〈0．05）；（4）HPV16及端粒酶在宫颈癌早期与晚期、高分化与中低分化组织中表达差异均无统计学意义，在宫颈鳞癌与腺癌中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：HPV16感染和端粒酶激活与维吾尔族子宫颈癌的发生密切相关，端粒酶激活是宫颈癌发生的早期事件。     

HPV致宫颈癌机制研究进展

人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）是一类无包膜的具有嗜上皮特性的双链DNA病毒,由核酸及衣壳蛋白构成,其基因组可分为早期编码区（E区）、晚期编码区（L区）和长控制区（LCR）,研究表明高危型HPV的持续感染与宫颈癌的发生密切相关,当HPV病毒感染机体后,其基因组可随机整合到宿主细胞DNA中,随后沉默E2基因的表达,削弱E2蛋白对E6、E7基因的抑制,使E6、E7蛋白过表达,辅以E5蛋白的表达,促使感染细胞永生化甚至癌变。因此研究HPV的病毒结构及其致病机制对防治HPV感染及预防HPV相关恶性肿瘤,尤其是宫颈癌的发生、发展尤为重要。本文拟就HPV的病毒结构、致病机制研究进展进行综述。     

喉鳞癌组织中HPV16、18E6和HPV16E7蛋白表达及其相关性研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型E6和E7蛋白与喉鳞癌发生的关系以及两种蛋白在致病过程中的相互关系。方法 :采用免疫组化SABC方法对 5 8例喉鳞癌 ,30例癌旁组织和 30例声带息肉进行检测。结果 :在喉鳞癌和癌旁组织中的E6蛋白的表达率分别为 31 0 % (18/5 8)和 2 0 0 % (6 /30 ) ;E7蛋白的表达率分别为 32 7%(19/5 8)和 2 0 3 % (7/30 )。声带息肉组中未见E6和E7蛋白阳性表达。E6和E7蛋白表达率在喉癌组与息肉组之间 ,有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间均有显著性差异 (P <0 .0 1)。E6和E7蛋白在喉鳞癌中的表达结果具有明显的相关性。结论 :HPV16、18E6和HPV16E7蛋白与喉鳞癌发生、发展关系密切 ,E6与E7蛋白在致癌过程中有协同作用     

宫颈癌及癌前病变中人乳头瘤病毒16载量与整合频率的研究

目的 研究人乳头瘤病毒(HPV)16病毒载量、基因组整合状态与癌前病变进展的关系,探讨HPV基因组整合频率作为宫颈病变程度标志物的可行性.方法 收集宫颈脱落细胞标本337例,通过PCR扩增、DNA测序分析筛选出HPV16单一感染的样品40例,利用实时定量PCR检测早期基因E2、E6和β-肌动蛋白的拷贝数,分析病毒载量和整合状态.结果 (1)校正后病毒载量在正常组、低度鳞状上皮内病变(LSIL)组、高度鳞状上皮内病变(HSIL)组和宫颈鳞癌组的中位数分别是0.11拷贝/细胞、18.55拷贝/细胞、44.63拷贝/细胞、7.6拷贝/细胞,正常组低于LSIL与HSIL组,宫颈鳞癌组低于HSIL组.(2)在正常、癌前病变(LSIL-HSIL)和宫颈鳞癌中E2/E6比值的中位数分别是0.93、0.84、0.64,E2/E6比值与病变的严重程度显著相关.(3)随着病变程度的升高,游离型比例逐渐降低:正常4/5、LSIL4/6、HSIL 10/16、宫颈鳞癌5/13,整合型(混合+整合)比例逐渐升高:正常1/5、LSIL 2/6、HSIL 6/16、官颈鳞癌8/13.2例完全整合的标本均为宫颈鳞癌.结论 HPV16病毒载量可能不是预测宫颈病变的理想指标.HPV16整合频率与宫颈病变严重程度正相关,可能可作为HPV16感染后宫颈上皮细胞病变发展的预估指标.

Abstract：

Objective To investigate the association between viral load, genomic integration frequency of HPV 16 and cervical carcinogenesis and assess the probability that HPV 16 integration frequency may be utilized as a marker for cervical cancer. Methods Forty cases of HPV16 single infection were selected from 337 cervical scrape samples by PCR (polymerase chain reaction) amplification and DNA sequencing. The copy numbers of E2, E6 and β-actin were quantified to evaluate the viral load and integration status by real-time PCR. Results ( 1 ) The median number of adjusted viral load of normal group, LSIL (low-grade squamous intraepithelial lesion) group, HSIL (high-grade squamous intraepithelial lesion) group and squamous cervical cancer group were 0. 11, 18. 55, 44. 63 and 7.6 copies per cell respectively. The viral load was higher in LSIL-HSIL group than that in normal group while lower in squamous cervical cancer group than that in HSIL group. (2) The median number of E2/E6 was 0. 93 in normal group, 0. 84 in precancerous group (LSIL-HSIL) and 0. 64 in squamous cervical cancer group respectively. It showed a descending trend with the progression of cervical disease. (3) With the disease development, the proportion of episomal form decreased ( normal group 4/5, LSIL group 4/6, HSIL group 10/16, cervical squamous cancer group 5/13 ) whereas that of integrated form ( mixed and totally integrated)increased (normal group 1/5, LSIL group 2/6, HSIL group 6/16, cervical squamous cancer group 8/13).Both totally integrated cases were cervical squamous cancer. Conclusion ( 1 ) HPV 16 viral load may not be an ideal marker to predict cervical carcinogenesis. (2) Due to a positive correlation between HPV16 genomic integration frequency and cervical neoplastic progression, HPV 16 integration frequency may be a potential marker of early diagnosis for cervical lesion progression.     

用原位杂交技术检测人子宫颈癌组织中HPV16E_6转化基因的研究

应用地高辛非放射性标记与检测系统制备人乳头瘤病毒１６型Ｅ６（ＨＰＶ１６Ｅ６）转化基因ＤＮＡ探针，经用斑点杂交检测，探针特异性强，灵敏度达０．１ｐｇ，应用组织切片原位杂交技术检测了４４例子宫颈癌组织。结果表明，ＨＰＶ１６Ｅ６阳性２７例、占６１．３６％，５例正常对照子宫颈组织中未检出。提示ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因与子宫颈癌密切相关，为阐明子宫颈癌的病因和ＨＰＶ１６Ｅ６在诊治子宫颈癌中的作用提供了理论依据。     

HPV16E6与吲哚胺2，3-二氧化酶在宫颈病变组织中的表达

  目的   检测高危HPV感染的正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织、宫颈癌组织HPV16E6和IDO的表达,分析二者在宫颈病变组织恶化过程中的关系,探讨其作为宫颈癌肿瘤标志物的可能性。   方法   把经第二代杂交捕获（HC-2）法行HPV DNA检测为高危型HPV感染的宫颈病变者120例为实验对象,正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织、宫颈癌组织各40例。免疫组化染色法检测各组织中HPV16E6和IDO的表达情况。   结果   40例正常宫颈组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为7.5%、0%;40例宫颈癌前病变组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为37.5%、22.5%。40例宫颈癌组织中HPV16E6和IDO阳性表达率分别为90%、80%。在宫颈病变组织恶化过程中HPV16E6和IDO的阳性表达呈正相关（r_s = 0.710,P = 0.000）。   结论   HPV16E6和IDO的表达随宫颈病变的进展而呈现出阳性程度逐渐递增趋势,HPV16E6和IDO可考虑成为预测宫颈病变组织恶化的肿瘤标志物。      

人乳头瘤病毒E6／E7mRNA与宫颈病变关系的研究进展

人乳头瘤病毒与子宫颈癌的发生和发展密切相关,其中病毒癌基因E6、E7的表达是致癌的关键,当病毒基因整合进入宿主基因后,E6、E7基因过度表达,最终导致子宫颈癌的发生。文章对E6、E7基因转录产物E6／E7mRNA的研究进展进行综述。     

女性生殖道乳头状病毒检测的研究进展

近年来,宫颈癌的发病率有增长趋势,而且日趋年轻化,研究证实人类乳头状瘤病毒(HPV)是宫颈癌及癌前病变的主要致病因素,HPV根据不同型别与癌发生的危险性分为低危型和高危型,高危型的感染与宫颈癌的发生成正相关,因此HPV分型检测对宫颈癌的诊断及预后有重要意义。     

Value and Feasibility of HPV DNA Test in Cervical Scraping Smears

Summary： To investigate the reliability and feasibility of human papillomavirus （HPV） DNA test in cervical scraping smears with polymerase chain reaction （PCR）, 131 cases of cervical scraping specimens were collected, and the positive rates and accuracy of HPV infection were determined in normal subjects and cervical cancer patients. GP5^＋/GP6^＋ and E7 primer pairs designed for detecting HPV L1 and HPV type 16 E7 were tested in this study. Our results showed that positive rates of HPV DNA in normal population and cervical cancer patients were 32.99% and 73.53% respectively and there was significant difference between them （P〈0. 001）. In normal subjects, detection rates of HPV DNA with GP5^＋/GP6^＋ and E7 primer pairs were 27.84 % and 16.49 % respectively, with statistically significant difference between them （P〉0.05）. However the detection rates in cervical cancer patients were 38.24 % and 67.65 % for the two markers, with a significant difference found between them （P〈0.05）. It is concluded that HPV DNA test with PCR for cervical scraping smears was feasible. GP5^＋/GP6^＋ primer pairs may be a useful probe to screen HPV infection in normal population, but they are not sensitive enough in cervical cancer patients. It is suggested that high risk type HPV DNA test was very useful in population with high risk of cervical cancer.     

宫颈癌妇女人乳头瘤病毒16E6/E7基因变异分析

目的了解宫颈癌妇女人乳头瘤病毒(HPV)16E6/E7基因变异的情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法从大量样本中筛选出HPV16阳性标本180例,其中宫颈癌患者100例,宫颈不典型增生患者50例,宫颈炎症患者30例,对宫颈脱落细胞样本采用PCR方法扩增HPV16 E6/E7基因,然后对反应产物采用DNA测序法获得基因序列,在GeneBank进行经BLAST分析,寻找变异位点。结果宫颈癌患者中E6核苷酸变异率为82.00%(82/100),明显高于宫颈不典型增生患者(=0.000)及宫颈炎患者(=0.000);宫颈癌HPV16E6最频繁的序列变异为T178G(60/100),其他常见变异为T350G、C335T/A442C、T178G/G39T,年轻宫颈癌组E6核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但两者T178G变异率存在明显差异(=0.000)。宫颈癌患者HPV16 E7核苷酸变异率为74.00%(74/100),明显高于宫颈不典型增生患者(=0.000)及宫颈炎患者(=0.000);E7最频繁序列变异为A647G 32.00%(32/100),其他常见的变异为A647G/C749T/T843C/T846C、A647G/C749T/T846C、C749T/C790T、A647G/C749T;年轻宫颈癌组E7核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但A647G变异率存在明显差别(=0.03)。结论宫颈癌患者明显存在HPV16E6E7核苷酸变异,HPVE6 T178G、E7 A647G可能与宫颈癌年轻化密切相关,故对该人群的检测并及时尽早采取干预措施。     

宫颈疾病妇女HPV感染现状及基因型的分布

目的 研究广州地区宫颈疾病妇女人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染及基因型的分布情况,探讨不同宫颈疾病妇女不同年龄、不同基因型感染与宫颈疾病的关系.方法 采用导流杂交基因分析技术对患者宫颈脱落细胞标本进行HPV检测及基因分型,检测不同年龄组、不同宫颈疾病组的HPV感染率.结果 768例标本中HPV感染率为71.10％,其中单纯HR-HPV感染率为57.40％,单纯LR-HPV感染率为9.40％.其中HR-HPV以HPV16、HPV58、HPV33、HPV18为主,LR-HPV以HPV11、HPV6为主.HR-HPV、LR-HPV感染在各年龄组的构成差异有显著性(P＜0.05).随着年龄的增长,HR-HPV感染的比例逐步增加,而LR-HPV感染比例呈逐步下降趋势.细胞学正常组、CIN Ⅰ组、CINⅡ-Ⅲ组、宫颈癌组患者HPV感染率、HR-HPV感染率、重叠感染率均逐渐升高(P＜0.05);随着CIN级别的增加,HPV16的构成比亦逐渐增加(P＜0.05);CIN患者主要基因型为HPV16、HPV58为主,宫颈癌以高危型HPV16感染为主.Logistic多元回归分析显示HPV16、HPV58、年龄大于45岁是宫颈癌发生的危险因素.结论 HPV在广州地区宫颈疾病妇女生殖道有较高的感染率及重叠感染率;HPV16、HPV58、HPV33高危型感染时宫颈疾病的主要诱因,高危型HPV16/58及年龄超过45岁与宫颈癌的发生有明显的相关性.