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1.
硫酸氨基葡萄糖对大鼠软骨细胞增殖的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨硫酸氨基葡萄糖(GS)对大鼠软骨细胞体外增殖的影响。方法:采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并对第四代细胞进行药物干预,利用MTT比色、免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)、流式细胞术检测细胞周期等方法检测各代次大鼠软骨细胞和药物干预后第四代软骨细胞的增殖情况。结果:大鼠软骨细胞随传代培养,MTT比色显示增殖呈下降趋势,免疫细胞化学检测PCNA表达减少,流式细胞术显示细胞增殖指数下降;硫酸氨基葡萄糖可以抑制这一趋势,促进传代培养的细胞增殖能力。结论:GS对传代培养的大鼠软骨细胞的增殖能力有明显促进作用。  相似文献   

2.
目的:观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法:分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因(type Ⅱ procollagen gene,Col2a1)的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素(6.25、12.5、25和50μmol/L)组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达。结果:第2代原代软骨细胞活力正常,Col2al表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论:蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。  相似文献   

3.
4.
目的:研究丹参酮ⅡA对体外培养的原代大鼠软骨细胞增殖的影响。方弦:取24h新生sD大鼠肱骨头处软骨,用Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。对照组软骨细胞用含10%FBS的H—DMEM的培养基培养;实验组分4个浓度组,在培养基内分别加入终浓度为6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L的丹参酮ⅡA。培养24h后,MTT法检测各组细胞的增殖情况,WesternBlot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期。结果:丹参酮ⅡA可明显抑制软骨细胞的增殖,且抑制程度与丹参酮ⅡA的浓度呈正相关;丹参酮IIA可抑制软骨细胞PCNA的表达;随着丹参酮HA浓度的增加,G0/G1期的软骨细胞比例明显增高,而S期的比例明显降低。结论:丹参酮HA可诱导软骨细胞发生G0/G1期阻滞,抑制软骨细胞增殖。  相似文献   

5.
目的:探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法:分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞周期,同时用蛋白印迹杂交(Western blot)检测Rho激酶的表达情况。结果:PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大,24h最高,48h下降但仍高于常氧对照组;流式细胞术分析细胞周期,G2/M期细胞缺氧组均显著高于常氧组;Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论:缺氧诱导PASMC增殖,促使细胞进入有丝分裂期,同时,Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。  相似文献   

6.
鹿茸多肽对人骨髓间质干细胞体外增殖的影响   总被引:9,自引:0,他引:9  
为探讨鹿茸多肽 (PAP)对人骨髓间质干细胞 (MSCs)体外增殖的影响 ,采用密度梯度离心法分离扩增骨髓间质干细胞 ,并用流式细胞术检测其表面标志 ;用MTT比色、免疫组化检测增殖细胞核抗原 (PCNA)、流式细胞术检测细胞周期等方法来反映MSCs的增殖。结果CD3 4 、CD45表达阴性 ,CD2 9、CD90 表达阳性 ;1 0 μg/ml时PAP获得最佳促进MSCs增殖效应 ,且PAP能消除MSCs在体外连续培养过程中异倍体的产生。说明PAP对人MSCs的增殖有明显促进作用 ,且能防止MSCs在体外连续培养过程中异行性的产生 ,为种子细胞的优化提供了理论和实验依据。  相似文献   

7.
淫羊藿素对大鼠软骨细胞作用的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究淫羊藿素对大鼠软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:将细胞随机分为6组,分别予以浓度为 0,4,8,16,32,64 μmol/L的淫羊藿素(纯度为99%)处理不同时间组。药物作用于细胞后,MTT比色法检测大鼠软 骨细胞的增殖,Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:MTT 实验结果显示,4和8 μmol/L的淫羊藿素 作用于大鼠软骨细胞72 h,大鼠软骨细胞的增殖能力高于对照组(P<0.05);16,32,64 μmol/L的淫羊藿素作用于大鼠 软骨细胞72 h,大鼠软骨细胞的增殖能力低于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,在药物处理24 h和48 h后, 4 μmol/L的淫羊藿素所引起的细胞凋亡率较对照组明显降低(P<0.05);8,16,32 μmol/L的淫羊藿素则会增加细胞的凋 亡率(P<0.05)。结论:淫羊藿素在低浓度(4,8 μmol/L)时能促进大鼠软骨细胞的体外增殖和抑制凋亡,而过高浓度的 淫羊藿素反会抑制细胞增殖和促进凋亡。  相似文献   

8.
目的:探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对人粘液表皮样癌细胞的增殖抑制作用。方法:用2mmol/L HMBA对培养的粘液表皮样癌细胞体外诱导后,分别采用MTT比色试验、光学显微镜、免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的增殖活性进行检测。结果:MTT比色试验显示,HMBA处理的粘液表皮样癌细胞较未处理的细胞增殖活性明显降低。增殖细胞核抗原(PCNA)的表达HMBA处理组明显低于对照组(P<0.01)。结论:HMBA能够明显抑制粘液表皮样癌细胞的增殖。  相似文献   

9.
目的:观察受体酪氨酸激酶抑制剂genistein对体外培养兔软骨细胞一氧化氮(NO)表达的影响。方法:兔膝关节软骨细胞传代培养,应用不同浓度genistein干预1、2、3、4天后,通过亚硝酸盐测定检测培养上清液NO表达水平。结果:形态学、甲苯胺蓝染色显示3代以内体外培养软骨细胞保持细胞表型的稳定。在genistein干预后上清液中NO水平下降,下降水平与genistein干预浓度和时间相关。结论:体外培养兔软骨细胞三代以内的细胞具有较好的活性,genistein能有效降低兔软骨细胞NO的表达水平。  相似文献   

10.
目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及维生素C(Vc)两种影响因子单独或联合应用对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外生长及增殖的影响。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别用特定浓度的bFGF及Vc两种影响因子单独或联合应用,绘制细胞生长曲线,用四唑盐比色法(MTT)法、流式细胞仪及免疫组化染色法观察细胞的增殖及生长情况。结果细胞生长曲线、MTT法、流式细胞仪结果均显示第3~5天各组BMSCs增殖能力达高峰,其中Vc+bFGF组增殖能力最强(P〈0.05)。第7天,对照组及单独应用bFGF和Vc组细胞增殖力均有所下降,仅Vc+bFGF组细胞仍保持较强的增殖能力(P〈0.05)。结论bFGF和Vc均有促进体外培养的骨髓间充质干细胞增殖的作用,联合应用bFGF和Vc促增殖作用最强,可以作为体外扩增培养骨髓间充质干细胞的最佳培养条件。  相似文献   

11.
马钱子碱对兔软骨细胞增殖的影响   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的:观察马钱子碱对体外培养兔软骨细胞增殖的影响。方法:分离、培养兔的软件细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖。结果:马钱子碱高、中、低剂量组细胞增殖率均高于空白对照组(P<0.05),一氧化氮(NO)能抑制软骨细胞的增殖,马钱子碱能拮抗NO对软骨细胞增殖的抑制作用。结论:马钱子碱能有效促进软骨细胞增殖。  相似文献   

12.
目的 探讨姜黄素抑制硝普钠(SNP)诱导的大鼠软骨细胞凋亡的机制研究。 方法 每组取4只SD大鼠关节软骨,细胞进行原代培养,将软骨细胞分成6组,分别为空白对照组(A组),SNP损伤组(B组),SNP+5 μmol/L姜黄素组(C组),SNP+10 μmol/L姜黄素组(D组),SNP+20 μmol/L姜黄素组(E组),SNP+30 μmol/L姜黄素组(F组)。用CCK8法检测不同浓度的姜黄素对软骨细胞增殖的影响,同时检测各组中软骨细胞的活性;用RtPCR检测软骨细胞MMP-13、caspase-3、Bax和Bcl-2基因的表达情况;用Hoechst 33342染色观察软骨细胞核凋亡情况;Western Blotting检测线粒体凋亡途径相关蛋白的表达情况。 结果 ①当姜黄素的浓度为20 μmol/L时,姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显;②CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组>E组>D组>C组>F组>B组;③RtPCR检测软骨细胞caspase-3、Bax和Bcl-2表达量经姜黄素处理后均有显著变化;④Hoechst 33342染色结果表明姜黄素能改善SNP诱导的软骨细胞核染色质的损伤,减少软骨细胞中的线粒体膜电位;⑤Western boltting检测各组软骨细胞中caspase-3、Bax、蛋白的表达情况,表达量依次为B组>E组>A组;Bcl-2蛋白的表达情况,表达量依次为A组>E组>B组。 结论 姜黄素通过抑制线粒体凋亡途径,从而减少SNP诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。   相似文献   

13.
目的:研究人重组骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对国产多孔钽/软骨细胞复合物中软骨细胞分泌功能以及Ⅱ型胶原( typeⅡcollagen,Col-Ⅱ)、蛋白聚糖( aggrecan,AGG)和SRY相关高迁移率组基因9(SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9)mRNA表达的影响。方法:3周龄新西兰幼兔,取双膝关节软骨细胞分离培养及鉴定,将生长状态良好的第2代细胞以1×106/mL浓度接种于多孔钽并给予不同浓度BMP-7,分为对照组(多孔钽/软骨细胞组)、50μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组、100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组及200μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组。 CCK-8法检测不同浓度BMP-7对多孔钽/软骨细胞生长及增殖的影响,扫描电镜观察各组软骨细胞在多孔钽表面及内部生长情况,二甲基亚甲蓝( dimethyl methylene blue,DMMB)比色定量法对BMP-7/多孔钽/软骨细胞复合物糖胺多糖( glycosaminoglycan,GAG)进行定量检测,实时荧光定量PCR检测Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA的表达。结果:原代软骨细胞培养24 h后呈梭形生长,4 d后细胞呈多角形,胞浆丰富。阿辛蓝( alcian blue)、番红O( safranin O)、Col-Ⅱ免疫细胞化学染色均呈阳性反应。 CCK-8法细胞增殖检测结果显示,100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组细胞增殖水平高于其他各组( P<0.05)。扫描电镜示各组软骨细胞在多孔钽表面生长状态良好,细胞有多个突起、伸展、叠层生长并覆盖于多孔钽表面。 GAG定量检测显示,100μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组GAG含量比其他各组均明显升高( P<0.05);实时荧光定量PCR检测显示,各实验组Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA表达量均高于对照组,以200μg/L BMP-7/多孔钽/软骨细胞组升高最为明显( P<0.05)。结论:BMP-7/多孔钽/软骨细胞复合体能促进体外软骨细胞增殖及细胞外基质的分泌,促进软骨基因的表达。  相似文献   

14.
目的:研究黄芪多糖对大鼠退变软骨细胞糖胺多糖(GAG)合成的影响。方法:分离大鼠关节软骨细胞传代培养并加入IL-1β造模,分别将100,10,1,0.1 mg/L的黄芪多糖作用于该软骨细胞,以4.5 mg/L的硫酸氨基葡萄糖作为阳性对照。其后检测细胞增殖、细胞内GAG含量、细胞内葡萄糖醛酸转移酶Ⅰ(GlcAT-1)mRNA含量和透射电镜观察细胞形态学改变。结果:各浓度的黄芪多糖均对大鼠软骨细胞增殖率无影响。100 mg/L的黄芪多糖可以增加软骨细胞内GAG的合成(P<0.01);1,10,100 mg/L的黄芪多糖能够增加GlcAT-1 mRNA的表达。结论:黄芪多糖能逆转IL-1β对体外培养的大鼠软骨细胞GAG合成的抑制作用,其主要机制可能与促进GlcAT-1的表达有关。  相似文献   

15.
目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。  相似文献   

16.
目的:研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰多孔钽(Ta)对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能等生物学行为的影响,探讨RGD/软骨细胞/多孔钽复合物作为软骨组织工程支架材料修复软骨缺损、促进软骨再生的可行性。方法:通过物理吸附的方法将不同浓度RGD肽及Ⅱ型胶原(ColⅡ)吸附于多孔钽表面,分为Ta-RGD组、Ta-ColⅡ组、Ta-RGD/ColⅡ0.2 g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ1.0 g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ5.0 g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ10.0 g·L-1组及纯Ta组。分离培养新西兰幼兔关节软骨细胞,取第2代细胞种植于修饰前后多孔钽使其成为RGD/软骨细胞/多孔钽复合物;扫描电镜观察RGD/软骨细胞/多孔钽复合物形貌特征以及软骨细胞生长状态,沉淀法检测多孔钽修饰前后软骨细胞黏附率,MTT法检测多孔钽修饰前后软骨细胞的增殖水平,羟脯氨酸法测定软骨细胞分泌功能。结果:多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞黏附率均高于修饰前(P<0.05),其中黏附效果最好的是4 h的Ta-RGD/ColⅡ5.0 g·L-1组,同时各组间黏附率比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下各组软骨细胞在修饰后的多孔钽表面生长状态良好,细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽表面;MTT检测,多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞增殖水平均高于修饰前(P<0.05),其中增殖效果最好的是13 d的Ta-RGD/ColⅡ1.0 g·L-1组;羟脯氨酸检测,Ta-RGD/ColⅡ1.0 g·L-1组羟脯氨酸水平高于其他各组(P<0.05)。结论:RGD多肽可有效加强软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内的黏附及增殖,对软骨细胞的分泌有促进作用。  相似文献   

17.
体外诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的探讨兔骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在特定培养条件下向软骨细胞定向分化的情况。方法密度梯度离心法分离兔BMSCs,在体外培养扩增后用含有骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2的条件培养液诱导其在体外单层培养模式下向软骨细胞分化。采用甲苯胺蓝染色、Masson染色、免疫组织化学染色、阿利新蓝比色法测定糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)的含量检测BMSCs分化情况。统计学分析比较第2、4、7代(P2、P4、P7)BMSCs诱导后增殖能力及向软骨细胞分化能力的变化。结果定向诱导后BMSCs表现出软骨细胞的特性。P2、P4间的细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力比较差异无统计学意义(P>0.05);P7与P2、P4相比,细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BMP-2能诱导兔BMSCs在体外单层培养模式下向软骨细胞分化;细胞传代对BMSCs向软骨细胞分化有重要影响。  相似文献   

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