MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定

目的鉴定miR-7基因敲减小鼠模型,为进一步研究miR-7的生物学功能奠定基础。方法常规剪取7只miR-7基因敲减（miR-7 knock down,miR-7KD）小鼠的脚趾和尾巴,分别用来提取基因组DNA和总RNA;剪取1只WT（wild-type,WT）小鼠的尾巴,提取其总RNA;将提取的两组小鼠的总RNA逆转录成c DNA;分别以基因组DNA和c DNA为模板,用特异性引物PCR技术扩增目的基因增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）片段;提取WT和miR-7KD小鼠7个不同组织器官的总RNA,利用Real-time PCR探针法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平;HE染色观察miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠的形态学结构改变。结果 PCR结果显示,模型小鼠的脚趾基因组DNA和尾巴c DNA中均能扩增出载体目的基因EGFP片段;Real-time PCR结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肝脏和脾脏等组织器官miR-7成熟体的表达水平较WT小鼠均显著下调（P〈0.05）;HE染色结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠形态学结构发生了明显的病理性改变。结论成功鉴定了miR-7基因敲减小鼠模型,为后续深入探讨该分子的生物学功能提供重要实验基础。     

microRNA-126 基因敲减小鼠的鉴定及其血糖水平变化

目的：检测microRNA-126(miR-126)基因敲减(knock down,KD)小鼠各组织器官中miR-126的表达,并观察 小鼠血糖的变化,初步探讨其意义。方法：分别提取野生型(wild type,WT)和miR-126 KD模型小鼠中12种组织器官的 总RNA,荧光定量PCR探针法检测miR-126在12种组织器官的表达水平;检测小鼠血糖的变化,并观察小鼠体质量的 变化;HE染色观察肝脏和胰腺的病理改变。结果：与正常小鼠相比,miR-126 KD模型小鼠的脾、胰腺、肝、肌肉和 肺等器官组织中miR-126的表达显著下调(P<0.05);出生第7周和第16周模型小鼠血糖水平均明显增高(P<0.05),HE染 色显示模型小鼠胰腺和肝组织呈明显病理异常;出生第13周后,模型小鼠体质量逐渐增加(P<0.05)。结论：miR-126 KD小鼠血糖水平明显增加,可能与胰腺和肝的病理改变有关,提示miR-126在血糖代谢中具有重要作用,可能与2型 糖尿病的发生发展密切相关。     

靶向miR-126慢病毒表达载体的构建及意义

目的：检测微小RNA-126（microRNA-126,miR-126）在CD4＋CD25＋调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）中的表达水平,同时构建基于慢病毒的miR-126反义寡核苷酸序列（antisense oligonucleotides,ASOs）表达载体。方法：实时定量PCR特异性探针法检测miR-126在Tregs中的表达水平;针对miR-126序列,设计合成其ASOs序列,退火后连接至经AgeI酶和EcoRI酶双酶切的pGCsil—LV—GFP载体上,连接产物转化DH5α感受态细胞,对经PCR鉴定为阳性的载体（命名为pGCsil—miR-126-ASOs）进行测序分析;将构建成功的pGCsil—miR-126-ASOs表达质粒和pHelper1．0、pHelper2．0质粒共转染293T细胞,浓缩病毒颗粒并测定所获病毒滴度;将制备好的病毒颗粒感染经TGF—B体外诱导培养的小鼠CD4＋CD62L＋初始T细胞,72h后用流式细胞仪检测其Foxp3的表达变化。结果：实时定量PCR结果显示miR-126在CD4＋CD25＋Tregs中的表达明显高于CD4＋CD25-T细胞（P〈0．01）;测序结果证明成功构建pGCsil-miR-126-ASOs重组质粒载体,包装并获得高浓度的慢病毒颗粒,病毒滴度为9×10^8TU／mL;重组的病毒能明显抑制Tregs的外周诱导（P〈0．05）。结论：成功构建miR-126ASOs的慢病毒表达载体,并获得高浓度的病毒颗粒。     

葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠中TRAIL-R基因敲除对Th17细胞凋亡的影响

目的：采用葡聚糖硫酸钠（DSS）构建实验性结肠炎小鼠模型,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体基因敲除（TRAIL -R -/-）对结肠炎症及Th17细胞凋亡的影响。方法：将C57BL/6品系小鼠分为4组：TRAIL -R -/-结肠炎组、TRAIL -R -/-对照组、野生型（WT）结肠炎组、WT对照组,每组各9只。结肠炎组饮用3.5%的DSS,对照组饮用清水。7 d后,从临床表现和组织病理学上评估小鼠结肠炎的严重程度。取外周血单个核细胞（PBMCs）和结肠黏膜固有层单个核细胞（LPMCs）,采用流式细胞术检测Th17细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测视黄酸相关孤儿受体（ROR-γt）和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平。采用TUNEL荧光染色技术及激光共聚焦显微镜观察结肠组织中Th17细胞的凋亡率。通过比色法检测结肠组织中凋亡蛋白酶Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性。结果：DSS诱导后,TRAIL -R -/-小鼠较WT小鼠发生了更为严重的结肠炎。TRAIL -R -/-结肠炎小鼠PBMCs中Th17 细胞的比例（P ＜0.01）,以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠（均P ＜0.05）。TRAIL -R -/-结肠炎小鼠LPMCs中Th17细胞的比例（P ＜0.01）,以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠（均P ＜0.05）。与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL -R -/-结肠炎小鼠的结肠组织中Th17细胞的凋亡率（P ＜0.01）以及Caspase 3和Caspase 8的酶活性均显著降低（均P ＜0.01）。结论：DSS诱导后,TRAIL -R -/-小鼠的结肠炎症较WT小鼠更为严重,原因可能是Th17细胞凋亡减少,其数目和活性增高所致。     

DNAM-1通过IL-2/STAT-5通路调节Ⅰ型调节性T细胞的增殖和功能

目的 探讨DNAM-1对Ⅰ型调节性T细胞（Tr1细胞）活化、增殖和功能的影响及相关分子机制。方法 利用anti-CD3/CD28激活小鼠T细胞,采用流式细胞术分别检测静息和激活状态下CD4+ T细胞和Tr1细胞DNAM-1分子表达变化;分离DNAM-1基因敲除小鼠（KO小鼠）脾脏初始CD4+ T细胞并体外诱导Tr1细胞,流式细胞术检测CD25和CD69活化分子表达水平,CFSE标记后检测增殖能力,IL-2刺激前后检测KO小鼠 Tr1细胞分泌IL-10和转录激活蛋白（p-STAT5）水平变化。结果 流式细胞术结果显示：与静息状态下相比较,激活状态的CD4+ T细胞和Tr1细胞表达DNAM-1分子均增高（P<0.05）;敲除DNAM-1不影响小鼠脾脏Tr1细胞的数量和比例,但KO小鼠Tr1细胞表达细胞激活分子CD25和CD69均降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与WT小鼠比较,KO小鼠诱导型Tr1细胞体外增殖能力降低（P<0.05）;与WT组Tr1细胞比较,KO小鼠Tr1细胞分泌抑制性细胞因子IL-10水平降低（P<0.05）,给予IL-2刺激后仍无法逆转,表达Il-10 mRNA和Gzmb mRNA水平降低（P<0.05）;给予不同剂量IL-2刺激Tr1细胞后,KO小鼠Tr1细胞表达p-STAT5水平相比较WT组均降低（P<0.05）。结论 DNAM-1参与Tr1细胞的活化和增殖,并通过IL-2/STAT5信号通路影响Tr1细胞抑制功能。     

华支睾吸虫来源的分子伴侣rCsHscB对小鼠慢性溃疡性结肠炎有治疗作用

目的 研究华支睾吸虫来源的分子伴侣rCsHscB对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的作用。方法 诱导大肠杆菌表达体外获得高纯度重组rCsHscB蛋白。将C57BL/6雄性小鼠随机分为NC组（n=10）、rCsHscB组（n=10）、DSS组 （n=15）和DSS+rCsHscB组（n=15）,采用2%的DSS常规建立小鼠慢性溃疡性结肠炎模型。rCsHscB组和DSS+rCsHscB组在给予DSS同一周的第4、7天腹腔注射125 μg/mL rCsHscB,NC组和DSS组注射无内毒素PBS。第84天处死小鼠后对结肠组织进行HE和Masson染色,并采用流式细胞术检测外周血和小肠固有层淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达,ELISA检测结肠匀浆上清中IL-6、IL-10和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）含量,Western blot 检测结肠组织中MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2、JNK和P38的磷酸化和非磷酸化水平。结果 与NC组相比,rCsHscB组小鼠未出现不良反应。DSS组小鼠结肠组织病理损伤显著,胶原纤维沉积加重,外周血及小肠固有层淋巴细胞中CD4+T细胞比例升高、CD4+ T/CD8+T细胞比值明显上升。结肠匀浆上清中IL-6和MCP-1水平显著升高,IL-10分泌没有明显变化（P=0.11）,ERK1/2、JNK和P38的磷酸化水平显著升高;与DSS组比较,DSS+rCsHscB组小鼠结肠组织病理损伤缓解、胶原纤维沉积减少,外周血及小肠固有层淋巴细胞中CD4+T/CD8+T细胞比值明显降低,结肠匀浆上清中IL-6及MCP-1水平显著下降,IL-10水平显著上升（P=0.003）,ERK1/2、JNK和P38磷酸化水平显著降低。结论 rCsHscB对小鼠慢性溃疡性结肠炎具有一定的预防改善作用,其可能是通过MAPK抑制促炎因子产生并调控 CD4+T/CD8+T细胞平衡来发挥作用的。     

小鼠CD4~+T细胞外泌体分离及鉴定

目的探讨CD4~+T细胞是否具有分泌外泌体的能力,以及CD4~+T细胞外泌体参与炎症及肿瘤免疫过程的可能。方法应用断颈处死的方法取出小鼠的脾脏,用磁珠分选的方法从小鼠脾脏细胞中分选出CD4~+T细胞,并尝试从培养基上清液中提取CD4~+T细胞的外泌体,在透射电镜下观察,后用PCR技术分析miR-23a、miR-214的表达情况。结果在透射电镜下能够观察到提取出的CD4~+T细胞外泌体,且用PCR技术能检测到小鼠CD4~+T细胞外泌体中miR-23a、miR-214这两个炎症及肿瘤相关的miRNA的表达。结论小鼠CD4~+T细胞有分泌外泌体的能力,且为CD4~+T细胞外泌体参与炎症及肿瘤相关过程提供了可能。     

日本血吸虫感染的小鼠肺脏组织CD69~+TRM细胞免疫学特性的变化

目的探究日本血吸虫感染的小鼠肺脏CD69~+组织定居记忆T细胞(TRM)的表型和功能的变化。方法使用血吸虫感染C57BL/6小鼠,6周后分离感染组及正常对照组小鼠的肺脏组织,制备石蜡切片,使用HE染色,观察肺部病变情况;制备单细胞悬液,用流式细胞术检测CD4~+和CD8~+的CD69~+TRM的含量;使用细胞表面染色方法,观察CD69~+TRM细胞表面CD103、CD62L和CD107a分子的表达情况;使用细胞内细胞因子染色法,检测CD69~+TRM细胞白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-9和IL-10的分泌情况。结果日本血吸虫感染小鼠肺脏组织出现明显肉芽肿病变;流式细胞术检测结果显示,在CD4~+T和CD8~+T细胞中,感染组CD69的表达比例均高于正常组[(19.02±2.87)%vs.(4.29±0.21)%,(7.61±1.99)%vs.(2.46±0.49)%],差异有统计学意义(P0.05)。在CD4~+T细胞中,CD62L和CD107a分子在感染组小鼠CD69~+细胞的表达比例低于正常组[(6.41±0.47)%vs.(23.95±1.63)%,(30.19±2.70)%vs.(48.15±2.75)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在CD8~+T细胞中,感染组小鼠CD69~+细胞表面CD103和CD62L分子的表达比例远低于正常组小鼠[(19.12±0.41)%vs.(44.79±3.64)%,(38.89±4.59)%vs.(58.69±2.12)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在CD4~+T细胞中,感染组CD69~+T细胞相比正常组表达较高水平的IL-4[(27.25±0.88)%vs.(14.57±1.36)%],差异有统计学意义(P0.05)。在CD8~+T细胞中,感染组CD69~+T细胞相比正常组表达较高水平的IFN-γ[(45.08±4.25)%vs.(2.75±0.07)%],差异有统计学意义(P0.05)。结论小鼠肺脏组织中存在着一群表达CD69的TRM细胞,在日本血吸虫感染诱导的肺部肉芽肿病变过程中发挥了重要的作用。     

乳腺癌患者CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的变化

目的 检测临床乳腺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)和外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的变化,并探讨其意义.方法 分离22例乳腺癌患者PBMCs和TILs, 用流式细胞仪检测CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的比例,同时检测其Foxp3的表达;进一步用流式细胞仪检测CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞记忆分子CD45RO、CD44和CD62L的表达水平;用3H-TdR增殖实验观察CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用.结果 乳腺癌患者PBMCs和TILs中CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的比例明显增加,并在肿瘤局部存在显著的富集;CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞高表达Foxp3,在体外能有效抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,并高表达记忆分子CD45RO、CD44,低表达CD62L,显示了效应/记忆样表型.结论 CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞在乳腺癌患者肿瘤局部有明显富集,这可能是肿瘤长期免疫逃逸的重要原因.     

靶向PD⁃L1分子的 RNAi增强树突状细胞疫苗对胰腺癌治疗作 用的实验研究

目的：研究通过 RNA干扰敲减程序性死亡受体配体 1（programmed death receptor ligand 1,PD?L1）分子能否增强树 突状细胞疫苗对胰腺癌的治疗作用。方法：免疫组化法检测42例胰腺癌及对应胰腺组织中PD?L1的表达差异;纯化CD8+T细 胞和制备成熟的树突状细胞（DC）,将低表达PD?L1的Panc?1细胞Panc?1/PD?L1?RNAi、阴性对照Panc?1/LV?Control细胞以及野 生型Panc?1细胞分别与CD8+T细胞+DC疫苗共同培养,检测细胞上清中干扰素（IFN）?γ表达水平;3组肿瘤细胞分别建立人源 化严重免疫缺陷（severe combined immunodeficiency,SCID）小鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,以 DC疫苗为治疗手段进行尾静脉注 射,观察肿瘤生长情况。结果：免疫组化实验显示,胰腺癌组织较胰腺组织中PD?L1高表达,差异有统计学意义（P＜0.001）。T 细胞反应实验显示,PD?L1敲减肿瘤细胞组与DC和CD8+T细胞共同培养的上清中IFN?γ表达水平明显高于其他2个对照组,差 异有统计学意义（P＜0.001）。人源化SCID小鼠体内荷瘤实验显示,敲减PD?L1表达与应用DC疫苗治疗胰腺癌皮下移植瘤具 有协同作用。结论：胰腺癌较胰腺组织中PD?L1高表达,敲减胰腺癌细胞PD?L1表达与应用DC疫苗治疗可能是胰腺癌免疫治 疗的有效策略。     

利用CFSE标记检测CD8+淋巴细胞增殖

[目的 ]介绍一种新的检测淋巴细胞增殖的方法。 [方法 ]用本室构建的重组蛋白疫苗hsp6 5-CAP3对C5 7小鼠进行 3次免疫后 ,分离小鼠的脾细胞 ,以照射灭活的CAP3转基因细胞为刺激细胞 ,在体外刺激淋巴细胞的增殖反应。淋巴细胞在与刺激细胞共培养之前用绿色荧光染料羧乙基锗倍半氧化物 (CFSE)进行标记。在共培养 72h后 ,用PE标记的抗鼠CD8分子的单抗标记淋巴细胞。收集细胞进行FACS检测 ,出现在二维点图左上象限的细胞代表CFSE含量减少的CD8 淋巴细胞 (CD8 CFSElow)即增殖的CD8 淋巴细胞 ,利用流式细胞仪记数左上象限CD8 CFSElow细胞的比例。 [结果 ]经体外刺激的脾淋巴细胞中 ,实验组CD8 CFSElow的平均百分比值为 (16 .4 7± 2 .10 ) % ,对照组CD8 CFSElow 的平均百分比值为 (7.6 9± 1.6 5 ) % (P <0 .0 5 )。 [结论 ]通过FACS结果判定CD8 淋巴细胞发生了特异性的增殖。CFSE标记是一种有效的检测淋巴细胞增殖的方法。     

荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎T细胞增殖研究中的应用

目的 探讨荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎(EAU)抗原特异T细胞增殖研究中的应用价值. 方法 以人类光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)的多肽片段IRBP161-180为抗原,免疫B10RⅢ小鼠使其产生EAU.用CFSE荧光染料标记细胞,结合荧光单抗和流式细胞术,检测T细胞及其亚群在特异抗原刺激下,不同时间点细胞增殖的情况.结果 IRBP161-180刺激4 d后出现T淋巴细胞增殖分裂,表现为CFSE荧光强度的系列减半.使用荧光单抗双标记发现CD4+ T和CD8+ T细胞增殖反应不同步,CD8+ T细胞较CD4+T细胞增殖分裂更活跃,亲代细胞百分率下降更明显(P<0.01).结论 CFSE荧光标记技术是分析EAU抗原特异性T细胞及亚群增殖分裂的有力工具.     

OX40在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的：研究溃疡性结肠炎（UC）患者OX40分子的表达,以及CD4＋OX40＋T细胞的免疫表型和免疫学功能.方法：从活动性UC患者肠粘膜标本中分离和纯化粘膜固有层CD4＋T细胞（LP-CD4＋T）.用FACS多参数分析法测定OX40在不同的CD4＋T细胞上的表达.用ELISA BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶）法测定LP-CD4＋T细胞的增生程度以及不同刺激剂对它们增生程度的影响.结果：UC病变部位LP-CD4＋T细胞表达OX40明显高于健康对照者外周血、UC患者外周血CD4＋T细胞以及UC患者非病变部位CD4＋T的表达.LP-CD4＋OX40＋T细胞表达淋巴细胞活化标记CD25、CD38、CD45RO和HLA-DR均明显高于LP-CD4＋OX40-T细胞的表达（P＜0.01）.抗OX40单抗可明显增强病变部位LP-CD4＋T细胞的增生反应.相反,抗OX40L单抗则能明显抑制病变部位LP-CD4＋T细胞的增生.结论：OX40在UC患者病变部位的LP-CD4＋T细胞上表达明显增加,LP-CD4＋OX40＋T细胞是一类在原位被特异性抗原激活后扩增的T细胞,它们在UC的免疫病理机制中起重要作用.抗OX40L能够抑制其增生反应,可能是一种有效治疗UC的新方法.     

系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞miR-126及宿主基因EGFL7DNA甲基化状态分析

目的: 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者CD4⁺T细胞miR-126宿主基因EGFL7的甲基化水平对miR-126表达的调控。方法: 采用实时qPCR检测SLE患者CD4⁺T细胞miR-126及EGFL7 mRNA表达水平;亚硫酸氢钠基因组测序法检测EGFL7基因启动子区甲基化状态。结果: miR-126及其宿主基因EGFL7在SLE患者CD4⁺T细胞表达上调(P<0.01),EGFL7 mRNA表达水平与miR-126的表达呈正相关(r=0.538,P=0.015)。miR-126是一个内含子miRNA,位于宿主基因EGFL7基因座第7个内含子中,其自身的基因序列中包含29个CpG位点。但该区域甲基化水平在SLE患者CD4⁺T细胞和正常对照组间差异无统计学意义(P=0.907)。而SLE患者CD4⁺T细胞中EGFL7基因启动子区甲基化水平显著降低(P<0.05)。结论: SLE患者CD4⁺T细胞miR-126宿主基因EGFL7启动子区甲基化状态调控宿主基因本身及其miR-126的表达。     

重组IL-15/Fc融合蛋白治疗EAU的实验研究

目的 探讨重组小鼠IL-15/Fc融合蛋白治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的效应和机制.方法 C57小鼠输注IRBPI-20抗原特异性T细胞,构建EAU模型,通过静脉注射重组IL-15/Fc融合蛋白,眼底镜和HE染色评价融合蛋白治疗EAU的疗效.用auto-MACS分离IRBPI-20抗原免疫小鼠T细胞,通过CFSE染色,3HTdR渗入抑制法,流式细胞仪,ELISA法检测IL-15/Fc融合蛋白对IRBPl-20特异性T细胞抗原特异性活化、增殖、分化和分泌炎症细胞因子的作用.结果 IL-15/Fc融合蛋白能有效抑制IRBPI-20特异性CD8 T细胞增殖、扩增、向CD44highCD62Llow效应细胞亚群的分化和分泌炎症性细胞因子.体内应用能有效抑制EAU的临床症状.结论 该重组IL-15/Fc融合蛋白能抑制IRBP1-20特异性CD8 T细胞活化、增殖、分化和分泌炎症性细胞因子,从而抑制EAU的炎症反应.     

ICOS-Ig combined with CsA induces long term survival of cardiac allografts in mouse

Objective： To study the synergistic effect of ICOS-Ig combined with cyclosporine （CsA） on mouse heart transplantation and explore its therapeutic potential. Methods： ICOS-Ig fusion protein was generated by fusing the extraeellular portion of human ICOS and Fc portion of human IgG. To investigate the effect of ICOS-Ig on T-cell proliferation in vitro, ICOS-Ig or IgG was added to the primary MLR cultures （BALB/c spleen T cells as responder cells and irradiated C57BL/6 spleen cells as stimulator cells）. The cells responsiveness rates were detected by 3H-TdR methods. Then the T cells of each group in primary MLR were cultured as responder cells for secondary MLR, and irradiated C57BL/6 （donor） or C3H （third party） spleen cells as stimulator cells. To study the effect of ICOS-Ig on T-cell proliferation in vivo, CFSE-labeled C57BL/6 spleen cells were transferred to irradiated BALB/c mice. Mice were then treated with IgG, ICOS-Ig or CsA. Seventy two hours after transfer, the spleen cells of the mice were harvested for the detection of CD4^＋CFSE^＋ and CD8^＋CFSE^＋ by FACS. C57BL/6 mouse underwent transplantation of the hearts of BALB/c mouse and were then randomly divided into five equal groups： no treatment group, control lgG treated group （250 gg i.p. d2, 4, 6）, ICOS-Ig treated group （250 μg i.p. d2, 4, 6）, CsA treated group （10 mg/kg i.p. d0-6）, ICOS-Ig combined with CsA group. The cardiac allograft survival was monitored by daily palpation. Results： In primary MLR, ICOS-Ig inhibited T-cell proliferation, （inhibition ratio 58i8.2% in 50 μg/ml）. In secondary MLR, ICOS-Ig specifically inhibited donor spleen cells, which suggested ICOS-Ig could induce donor-specific hyporesponsiveness. In the CFSE dye assay, CD4^＋CFSE^＋ and CD8^＋CFSE^＋ in ICOS-Ig and CsA group was stronger than those in control group, which showed ICOS-Ig and CsA could inhibit the proliferation of allo-reactive T cells in vivo. In mouse heart transplantation model, survival was significantly prolonged in animals treated with ICOS-Ig or CsA as compared with controls. Moreover, ICOS-Ig combined with CsA group had even longer engraftment （〉100 d） than ICOS-Ig or CsA used alone. In histological examination, it was found that there were congestions and edemas in no treatment and IgG treated recipients, together with a lot of inflammatory cells infiltrated. Allogeneic hearts from ICOS-Ig and/or CsA immunized recipients revealed milder histological changes. It was revealed in mechanical analysis that splenic T cells from recipients also exhibited depressed mixed leukocyte reactions （MLR） and cytotoxic lymphocyte reactions （CTL）. Conclusion： These data suggest that ICOS-Ig combined with CsA induces a long-term survival of mouse cardiac allografts, whereas monotherapy is less effective in this regard. Thus, ICOS-Ig combined with CsA treatment may be a novel regimen to combat allograft rejection.     

伯氏疟原虫感染小鼠脾脏T淋巴细胞及其表面分子的检测

目的 探讨感染伯氏疟原虫的C57BL/6小鼠脾脏不同免疫细胞的含量及表面分子变化。方法 将C57BL/6小鼠尾静脉注射伯氏疟原虫进行感染,6 d后分离感染组和正常对照组小鼠的脾脏,制备单细胞悬液,然后通过流式细胞术检测小鼠CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的含量及其表面分子CXCR3、CD69、CD62L的表达水平变化情况。结果 感染伯氏疟原虫的小鼠脾脏CD8⁺T细胞（5.51%±0.76%）、γδT细胞（0.31%±0.03%）和T细胞（18.60%±3.37%）的百分比含量较正常组（14.04%±1.31%、0.75%±0.07%、33.27%±3.76%）明显减低,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常组（21.45%±0.10%、33.49%±3.17%、16.72%±2.16%）相比,感染组小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的CXCR3（6.30%±0.15%、18.34%±0.61%、5.25%±0.25%）均明显下调（P<0.05）;感染组小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的CD62L（67.98%±1.18%、54.37%±0.98%、55.06%±1.53%）较正常组（91.96%±0.75%、71.38%±1.02%、82.10%±1.04）%）均明显下调（P<0.05）,而感染组小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞的CD69 （28.13%±0.37%、42.58%±2.06%、34.65%±0.43%）表达水平比正常组（3.70%±0.62%、11.59%±0.41%、7.69%±1.56%）高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 感染伯氏疟原虫的C57BL/6小鼠脾脏CD8⁺T细胞、γδT细胞和T细胞及其表达的CXCR3和CD62L均明显下调,而CD69的表达水平升高,提示机体感染疟原虫后,小鼠的T淋巴系细胞增殖不明显,但其迁移情况有所不同,存在一定的复杂性。