胃癌组织中人巨细胞病毒感染及其临床意义

目的：初步探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染与胃癌的关系。方法：采用化学发光（CLIA）法对胃癌组（n=80）及健康对照组（n=80）的外周血清进行HCMV Ig G、Ig M抗体检测;巢式PCR技术检测22例胃癌患者的肿瘤及癌旁正常胃黏膜组织标本中的HCMV UL55基因;统计分析HCMV感染与胃癌临床特征的关系。结果：胃癌组血清HCMV-Ig G阳性率为95%（76/80）,HCMV-Ig M阳性率为6.25%（5/80）;在健康对照组血清中,HCMV-Ig G阳性率为97.5%（78/80）,HCMV-Ig M阳性率为3.75%（3/80）,HCMV Ig G、Ig M在胃癌组与健康对照组血清中差异无统计学意义（P〉0.05）。HCMV UL55阳性检出率在22例胃癌组织中为50%（11/22）,在相应正常胃黏膜组织中为9.09%（2/22）,胃癌组织HCMV阳性检出率较癌旁正常组织显著升高（P〈0.01）。此外,未发现HCMV感染与胃癌的TMN分期、组织病理分化及肿块大小有显著性关联。结论：胃癌组织中存在HCMV感染,且HCMV相较于癌旁正常组织更倾向感染癌灶,提示HCMV感染可能参与胃癌的发生发展过程。     

人巨细胞病毒UL133基因型在婴幼儿肝功能损伤中的分子机制

目的探索人巨细胞病毒（HCMV）UL133基因型对婴幼儿肝功能损伤的分子机制。方法选择收治入院的68例HCMV肝炎患儿和66例同期门诊体检肝功能正常且确诊为HCMV感染的患儿为研究对象。其中UL133基因型筛查阳性的66例肝炎患儿为UL133阳性组,UL133基因型筛查阴性的64例体检患儿为UL133阴性组。检测并比较患儿尿液中HCMVUL133基因型,血液中Caspase-3、Caspase-6蛋白表达水平及肝功能指标。结果肝炎患儿尿液中UL133基因型筛查阳性率达94.1%,明显高于体检患儿的3.0%（P＜0.05）。UL133阳性组患儿血液中ALT、Caspase-3、Caspase-6蛋白表达水平均明显高于UL133阴性组（P＜0.05）。两组患儿血AST、TBiL、DBiL、谷氨酰转移酶（GGT）比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论携带有UL133基因型的HCMV感染婴幼儿后,可能通过诱导Caspase-3、Caspase-6蛋白表达上调,导致肝功能损伤。     

人巨细胞病毒UL145基因在先天感染患儿临床株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL145序列在先天感染患儿临床株中的基因多态性，探讨HCMV基因多态性与先天感染引起的不同临床症状之间的关系。方法：对16株临床低传代分离株和15株未传代临床株的HCMV临床标本分别进行UL145全序列PCR扩增，对PCR扩增阳性的31例标本进行序列测定及分析，并且与9株已在GenBank递交的HCMVUL145序列进行比较分析。结果：序列分析结果表明31株HCMV临床株的UL145基因是高度保守的。所有临床株的HCMVUL145开放阅读框架均为393bp，编码蛋白含有130个氨基酸。所有临床株的核苷酸同源率为95．9％～100％，编码蛋白的同源率为97．7％～100％。临床症状不同的患儿其HCMVUL145基因及其编码蛋白具有相似的结构。所有先天感染患儿临床株的UL145编码蛋白具有蛋白激酶C（PKC）磷酸化功能位点和酪蛋白激酶（CK2）磷酸化功能位点。结论：HCMVUL145基因在临床株中是高度保守，未发现其与HCMV先天感染不同临床症状间存在明显的关系。HCMV UL145基因的高度保守性在先天感染中具有重要作用。     

贫困山区早孕期HCMV宫内感染与UL54基因突变的研究

目的:探讨贫困山区早孕期人巨细胞病毒(HCMV)宫内活动性感染与HCMVUL54基因突变的关系。方法:采用免疫组织化学(SABC)PCR-RFLP的方法检测人绒毛组织中HCMV早期抗原的存在及HCMVUL54基因密码子501是否发生突变。结果:贫困山区早孕期妇女HCMV宫内活动性感染率为18.91%;PCR-RFLP分析结果显示,在早孕期HCMV宫内感染者中UL54501密码子未发生突变。结论:贫困山区早孕期HCMV宫内感染与HCMVUL54基因密码子501突变无关,但不排除其他位点的突变或其他形式异常导致病毒致病性改变存在的可能性。     

人巨细胞病毒UL135基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL135基因编码序列在临床低传代分离株中的多态性，探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床疾病之间的关系。方法：对29株经荧光定量PCR方法检测HCMV．DNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行HCMVUL135全序列PCR扩增，并对PCR扩增阳性的25例标本进行序列测定及分析。结果：29株临床低传代分离株有25株PCR扩增阳性。25株分离株UL135开放读码框架（0RF）长度均与Toledo株相同，其核苷酸的变异率为0．1％-2．6％。与Toledo株相比，部分分离株具有氨基酸翻译后修饰位点的新增或缺失。25株临床分离株UL135蛋白质二级结构预测结果显示了第28位、313—317位、161—163位、171位氨基酸均有蛋白质结构二级的改变。结论：25株HCMV临床低传代分离株UL135基因及其编码产物的氨基酸序列比较保守，但仍存在一定程度的多态性，未发现UL135基因的变化与HCMV先天感染导致的不同疾病存在着相关联系。     

人巨细胞病毒UL137基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行全序列的测序，核实测序结果，拼接出UL137基因编码序列，进行相关分析。结果：经分析获得22株HCMV临床分离株UL137ORF核苷酸序列，核苷酸变异分布于整个编码区，但主要集中在5’端220—290bp处，均为核苷酸碱基替换，无插入及移码突变。在UL137预测编码蛋白氨基酸序列中，新增2个半胱氨酸位点，导致17株临床分离株在71-76位氨基酸出现了N相连豆蔻酰化位点（MYR）的新增，及第90～92位氨基酸硫化cAMP位点的相应缺失。结论：HCMVUL137基因在临床低传代分离株中高度保守，但存在一定的多态性。     

人巨细胞病毒UL138基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)UL138基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系.方法:对30株经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV-UL138全序列PCR扩增,对16株进行HCMV-UL138基因全序列测序及结果分析.结果:30株临床分离株中有20株UL138基因PCR扩增阳性.16株临床分离株HCMV-UL138开放阅读框架及编码蛋白的重要功能基团均高度保守.核苷酸序列进化树的分析结果表明:除20M外,先天性巨结肠株只存在于2a型,而小头畸形株仅存在于2b型.结论:HCMV UL138基因高度保守,但存在一定的多态性.     

人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮病情活动性的关联性研究

目的 探索人巨细胞病毒(HCMV)感染与系统性红斑狼疮(SLE)病情活动之间的关系.方法 采用病毒分离、聚合酶链式反应(PCR)检测HCMV UL54基因和间接免疫荧光试验(IFA)检测HCMV pp65抗原的方法,对49份SLE患者血白细胞标本进行HCMV分离鉴定,并结合临床资料分析HCMV感染与SLE病情活动的相关性.结果 49份SLE患者血白细胞标本中,HCMV病毒分离后出现典型细胞病变的有3份,经PCR和IFA联合检测鉴定阳性的有12份,阳性率为24.5%; Logistic回归分析显示,SLE活动期患者的HCMV感染率为38.5%,显著高于SLE非活动期患者8.7%的HCMV感染率(OR=8.7,95% CI:1.4～53.3,P=0.019).结论 HCMV感染与SLE病情活动呈现显著正相关.     

人巨细胞病毒增殖性感染UL111A基因转录本特征及变化

目的：探究人巨细胞病毒（HCMV）UL111A基因在增殖性感染不同时间点的转录本特征及变化。方法：在HCMV AD169株感染人包皮成纤维细胞（HFF）12 h,24 h,48 h,3 d,5 d,7 d,9 d等不同时间点,抽提RNA,反转录成cDNA,PCR检测UL111A转录本特征。扩增产物通过克隆、测序验证不同时间点UL111A转录本的特征变化。利用真核表达载体pcDNA3.1构建UL111A 3种转录本编码区序列载体pcDNA3.1-cmvIL-10,pcDNA3.1-LAcmvIL-10以及pcDNA3.1-unspliced,Western blot验证构建的载体在293T细胞中的有效表达。结果：感染HCMV AD169株的HFF可以检测到cmvIL-10,LAcmvIL-10以及未剪切3种形式转录本。未剪切形式转录本占比最多,cmvIL-10转录本占比最少。在感染的24 h和9 d 3种转录本都有检测到,而在其他时间点未能检测到cmvIL-10 转录本。此外,3 种转录本的编码区序列在293T细胞中均可有效表达。结论：HCMVUL111A基因在增殖性感染不同时间点存在3种形式的转录本。     

广州地区HCMV临床病毒株UL137基因的结构特征与多态性

【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株，经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D52。对3株临床分离株进行HCMVUL137基因全序列PCR扩增，PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL137-pMD18-T重组质粒；基因测序；将HCMVUL137基因序列呈报GenBank，并进行基因生物信息学分析。【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株。克隆测序后呈报GenBank并被收录，收录序列号分别为：DQ180388、DQ180376、DQ180360。通过序列分析，结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守，同源性在96．91％～100％之间．其变异均为碱基替换：编码蛋白均由96个氨基酸残基组成，同源性在90．63％～100％之间，超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间：编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS、MYS、cAMPs三类，其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守，cAMPs位点仅在5株病毒出现；编码蛋白等电点在11．50～12．00之间，呈强碱性。【结论】广州地区临床低传代分离株HCMVUL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守，但仍存在-定多态性。提示HCMVUL137ORF可能是-个具有重要功能的基因。     

汕头地区健康献血者人巨细胞病毒抗体及DNA检测结果的评价

目的：了解汕头地区健康献血者人巨细胞病毒（HCMV）感染情况,并探索一种比较可靠的检测方法。方法：采用酶联免疫吸附试验检测健康献血者血清（450份）中HCMV-IgM和．IsG抗体,并对12份疑似HCMV感染（HCMV-IgM、HCMV-IgC双阳性）、278份HCMV-IgM阴性而HCMV-IgG73性及10份HCMV-IgM、HCMV-IgG双阴性的血浆样本进行荧光定量PCR（FQ-PCR）检测。并对两种检测方法的结果进行比较分析。结果：汕头地区健康献血者HCMV-IgM、HCMV-IgG阳性率分别为2．7％和93．8％;FQ-PCR对HCMV-DNA的检出率高于HCMV-IgM阳性率（P〈0．05）。结论：汕头地区健康献血者HCMV阳性率与国内其他地区学者所报道相近,FQ-PCR定量检测血清HCMV-DNA的方法能够更灵敏地反映HCMV活动性感染,FQ-PCR对献血者HCMV感染的诊断有重要作用。     

冠心病与巨细胞病毒初期感染的相关性研究

目的探讨人类巨细胞病毒初期感染与冠心病发生发展的关系。方法用捕获ELISA法检测血清HCMV—IgM,酶法检测血脂4项,免疫比浊法检测C-反应蛋白（CRP）,并进行比较。结果冠心病组（61例）、健康对照组（44例）和其他疾病组（48例）的HCMV—IgM阳性率分别为8．20％、2．27％和4．17％,冠心病组与对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;冠心病组血脂4项和CRP均高于健康对照组,有统计学差异（P〈0．05）。结论尚不能认为冠心病与巨细胞病毒初期感染有关。     

Early diagnosis and monitoring of active HCMV infection in children with syste miclupus erythematosus

Objective To investigate the prevalence and features of active human cytomegalovirus (HCMV ) infection in children with systemic lupus erythematosus (SLE) and evaluate the diagnostic value of the HCMV using antigenemia assay, serum polymerase chain re action (PCR) and serology test. Methods Twenty- one SLE children undergoing immunosuppressive therapy were enrolled in t his study. Immunofluorescence assay, PCR and serology tests were used to deter mine HCMV pp65 and p72 antigens in leukocytes, HCMV DNA in sera, and HCMV specif ic IgM and IgG antibodies, respectively. As a control group, twenty- one immuno competent children with skeletal malformation were involved in this study. Stat istical analysis was performed using Chi- square test or Fisher’s exact test (Sy stat, USA), P values less than 0.05 were considered significant. Results Active HCMV infection was diagnosed in 28.6% (6/21) of SLE patients, with none in the control group; the difference between the two groups was significant (P =0.027). Two out of 6 SLE patients developed active HCMV infection before im munosuppressive therapy and the remaining 4 patients developed SLE after immunos uppressive therapy. Among the 21 SLE children, HCMV pp65 antigenemia was detect ed in 5 patients, p72 antigenemia in 3 patients, serum HCMV DNA in 9 patients, s erum HCMV- specific IgM in 2 patients, and IgG in 19 patients. The sensitivity and specificity for diagnosis of active HCMV infection were 83.3% and 100%, res pectively for pp65 antigenemia; 50% and 100% for p72 antigenemia; 100% and 80% f or serum PCR; 33.3% and 100% for HCMV IgM serology; 50% and 100% for HCMV IgG s erology. Conclusions Compared with the control group, active HCMV infection is much more frequent in SLE children, and can occur before treatment with immunosuppressive agents, b ut most often occur after immunosuppressive therapy. In comparison with the other techniques used in this study, the pp65 antigenemia assay seems to be a b etter method for the early diagnosis and monitoring of active HCMV infection in children with SLE.     

人巨细胞病毒UL32和UL44融合基因的表达及其抗原性分析

目的用聚合酶链式反应(PCR)扩增人巨细胞病毒UL32、UL44截短基因,构建pET-32a-UL32-UL44表达载体,转化宿菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,对目的蛋白进行纯化、标记HRP,用于检测IgM抗体。方法根据Gene-bank中HCMV的pp150、pp52蛋白序列,利用Protean计算机软件分析其亲疏水性和抗原性,选取适合的区段,根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物,PCR扩增目的基因序列,经测序证明无误之后,克隆pET-32a-UL32-UL44重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达,纯化目的蛋白,标记HRP,用ELISA捕获法对目的蛋白-HRP标记物的灵敏性和特异性等指标进行评价。结果成功构建pET-32a-UL32-UL44重组质粒,导入在BL21(DE3)菌株中,经诱导后目的蛋白表达于上清中,经纯化、标记HRP,标记物用于ELISA捕获法能够准确、特异地检测HCMV血清标本,80份血清检测结果显示其灵敏度可达92.5%,特异性达97.5%。结论 HCMV基因工程重组蛋白具有较好的免疫活性,为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了基础。     

纤维蛋白原检测在系统性红斑狼疮中的意义

目的：检测系统性红斑狼疮（SEE）患者血浆纤维蛋白原（FIB）水平,分析其与SLE疾病活动及脏器损害的关系。方法：测定68例SLE患者与36名正常对照血浆中的FIB浓度,分析其与SLE病情活动及其他临床指标的相关性。结果：SLE病例组和健康对照组相比,血浆FIB水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。不同疾病活动度的SLE患者FIB水平差异有统计学意义（P〈0．01）。血浆FIB水平与SLE患者病程中出现的肾脏、心血管等脏器损伤存在一定联系。FIB与SLE患者的疾病活动指数（SLEDAI）、24h尿蛋白定量、免疫球蛋白G（IgG）、红细胞沉降率（ESR）等指标成正相关。结论：FIB可能参与了SLE的疾病活动及脏器损伤,临床上可作为疾病活动及脏器损伤的观察指标。     

血清铁蛋白检测辅助诊断系统性红斑狼疮的应用价值探讨

目的：研究血清铁蛋白（FET）对系统性红斑狼疮（SLE）的诊断及监测意义.方法：收集本院2012年1月～2012年12月收治于风湿免疫科的146例确诊SLE的患者为观察组,随机收集本院同期其他疾病患者（感染性疾病、肿瘤、其他自身免疫性疾病）65例为对照组1,随机收集本院同期体检中心健康人105例为对照组2,分别检测各组血清铁蛋白、抗双链DNA抗体水平、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）,记录患者各项临床资料,并进行统计学分析.结果：SLE组患者血清FET水平显著高于对照组1及对照组2（均P＜0.01）.血清FET对SLE诊断价值的ROC曲线下面积为0.715 （95％置信区间0.634～0.795,以健康志愿者组及其他疾病组为参考人群）;单独测定FET在SLE患者中的阳性率（41.78％）不及检测dsDNA的阳性率高（83.56％）,联合dsDNA测定血清FET可提高SLE诊断的阳性率（92.47％）.SLE患者血清FET水平与CRP低度相关（r=0.351）,与ESR相关程度较弱（r=0.273）.结论：血清FET对SLE诊断有一定价值,通过与dsDNA、CRP、ESR等指标的联合检测对SLE诊断及病情监测起重要作用.     

HCMV感染在小儿特发性ITP中的作用及机制

目的：探讨小儿血小板减少性紫癜（ITP）与巨细胞病毒（HCMV）感染的相关性。方法：选取52例ITP患儿为研究对象,根据临床分度将其分为急性型（AITP）21例以及慢性型（CITP）31例,同时选取g0例健康体检儿童为对照组,采用二步免疫组化法测定各组骨髓中HCMV—IgM及采用ELISA免疫法测定各组血清中HCMV—IgM,并对各组临床特点进行分析。结果：AITP组及CITP组骨髓中HCMV阳性率显著血液中HCMV阳性率,差异有统计学意义（P〈0.05）;CITP骨髓及血液＋HC—MV阳性率均高于AITP及对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;AITP及cITP组中骨髓HCMV（＋）者平均年龄、IL-6、TNF—a水平均高于骨髓HCMV（-）者,而血小板计数少于HCMV（-）,差异有统计学意义（P〈0．05）;而CITP组中骨髓HCMV（＋）者IL-6、TNF—a水平高于AITP组HCMV（-）者,而血小板计数少于AITP组HCMV（-）者,差异有统计学意义（P〈0．05）;AITP及CITP组中血液HCMV（＋）者平均年龄、血小板计数、IL-6、TNF—a水平均与血液HCMV（-）者相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：骨髓HCMV感染可能是引起ITP发病的重要因素之一。骨髓HCMV感染可能是引起ITP患儿病情加重及慢性化趋向的重要因素,骨髓HCMV感染在ITP患儿发病机制中可能通过破坏患儿免疫系统从而影响血小板的生成,并不是抑制红细胞的生成。     

SLE患者机体免疫缺陷与CMV抗体水平的关系

目的 :检测SLE患者机体免疫缺陷与血清CMV抗体浓度的关系。方法 :用ELISA法检测了 5 0例SLE患者及 5 0例正常人血清中的抗人类巨细胞病毒 (HCMV)IgM类IgG抗体。结果 :SLE组抗CMV -IgM抗体水平显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而抗CMV -IgG抗体水平无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论 :SLE患者机体免疫缺陷状态可能是导致血清中抗CMV -IgM抗体水平升高的因素     

慢性阻塞性肺疾病患者人类巨细胞病毒感染状态及与细胞免疫功能的关系

目的 :探讨慢性阻塞性肺疾病 ( COPD)患者的人类巨细胞病毒 ( HCMV)感染状态 ,及其与细胞免疫功能的关系。方法 :对 60例 COPD患者及 60例对照组的血清应用酶联免疫吸附试验( ELISA)方法检测 HCMV- Ig M、HCMV- Ig G,用聚合酶链反应 ( PCR)方法检测血清中 HCMV-DNA,用流式细胞术检测外周血中 T淋巴细胞亚群的分布。结果 :COPD患者重度组的 HCMV抗体阳性率、血清 HCMV- DNA阳性率均高于对照组 ,细胞免疫功能低下 ;COPD患者中 HCMV-Ig M阳性者的细胞免疫功能低于 HCMV- Ig M阴性者。结论 :绝大多数重症 COPD患者免疫功能低下 ,并伴有 HCMV的感染 ,免疫功能低下与 HCMV的感染可互为因果