Effects of Roundabout 5 on adhesion, invasion and potential motility of human tongue carcinoma Tb cells

Background  Roundabout 5 (R5) is a monoclonal antibody which can neutralize the binding of Roundabout 1 (Robo1) to Slit2. Oral squamous cell carcinoma angiogenesis was significantly inhibited when R5 blocked slit-robo signaling pathway. However, the effect of R5 on the invasion of tongue cancer cells has not been investigated clearly.

Methods  In this study, we treated human brain metastasis of tongue cancer cell lines (Tb cells) with R5 at different concentrations, and the control Tb cells were treated with 10 mg/ml immunoglobin G 2b (IgG2b). The effect of R5 on the proliferation, adhension, invasion and motility of Tb cells was evaluated by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay, cell attachment assay on fibronectin (FN), wound assay and chemotaxis assay, respectively. And gelatin-incorporated sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was used to investigate the activity of matrix metalloproteinase-2 (MMP2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP9).

Results  R5 had no effect on the proliferation of Tb cells. However, R5 could significantly inhibit the motility, attachment and chemotaxis of Tb cells to FN, and it could also significantly inhibit the activity of MMP2 and MMP9 in Tb cells.

Conclusion  R5 can inhibit the adhesion, invasion and motility of human tongue carcinoma Tb cells.

     

人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系的建立

目的建立顺铂诱导的人成骨肉瘤多药耐药细胞系(MG63/R)并观察其生物学特性。方法以顺铂为诱导剂,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导人成骨肉瘤MG63细胞,建立多药耐药系MG63/R。MTT法检测药物敏感性;光镜、透射电镜观察MG63、MG63/R细胞形态及超微结构变化;生长曲线、克隆形成试验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数、P-pg、bcl-2、P53蛋白表达。结果经顺铂186d的诱导,建立了MG63/R,其对顺铂的耐药指数为83.557±4.841,对阿霉素、长春新碱、氨甲基蝶呤、环磷酰氨亦产生不同程度的交叉耐药;光镜观察可见MG63/R细胞排列不规则,形态呈三角形、多角形及多核现象;透射电镜显示MG63/R细胞表面突起增加,粗面内质网丰富;细胞周期分析显示细胞增殖能力明显增加而细胞凋亡明显降低;MG63/R细胞P-pg、bcl-2阳性表达较MG63细胞明显增加,P53表达则明显降低。结论本研究建立了稳定的人成骨肉瘤多药耐药细胞系MG63/R,为进一步研究顺铂的多药耐药机制和耐药治疗提供了一种新的实验模型。     

Growth inhibition of interleukin-2 receptor gene-transduced peripheral blood lymphocytes on human ovarian cancer cells

目的　为研究IL 2R基因转染PBL对人卵巢癌细胞生长抑制的影响。方法　用脂质体Fugene作载体将IL 2和IL 2R基因分别转染入人卵巢癌细胞株 3AO和人外周血白细胞 (PBLs) ,转染 2 4小时后分别将转染和非转染的PBLs与转染和非转染的 3AO细胞混合培养 4 8小时 ,并用MTT法测定PBLs对 3AO细胞的杀伤作用。结果　转染前后 3AO细胞和PBLs细胞形态无明显变化。 3AO能转染IL 2基因并表达IL 2mRNA ,PBLs能转染IL 2R基因并表达IL 2RmRNA。IL 2基因修饰 3AO细胞可增强淋巴细胞对 3AO细胞的抑制作用 ,同时联合IL 2R基因转染PBLs和IL 2基因修饰 3AO细胞可显著增强其淋巴细胞对 3AO细胞的抑制作用。结论　IL 2R基因转染效应细胞可增加IL 2基因转染肿瘤细胞的抗肿瘤免疫效应 ,这一方法为卵巢癌IL 2基因治疗开辟了新的治疗途径     

二甲双胍对人子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的探讨二甲双胍在体外对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法二甲双胍干预人子宫内膜癌RL95-2和KLE细胞不同时间后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测IGF-1Rβ、Akt和p-Akt的表达。结果二甲双胍显著抑制子宫内膜癌RL95-2和KLE细胞的增殖。流式细胞术检测显示二甲双胍使G_0/G_1期细胞比例升高,S期细胞比例降低。Western印迹法检测显示二甲双胍能够降低IGF-1Rβ和p-Akt的表达。结论二甲双胍能抑制子宫内膜癌细胞生长,其作用机制可能与下调IGF-1Rβ表达和抑制Akt活性有关。     

塞来昔布对3种肿瘤细胞株放射增敏效应的研究

目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对3种不同肿瘤细胞株（肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE）的放射增敏作用。方法选择适当浓度的塞来昔布进行放射增敏实验,设置对照组（C）、药物组（D）、单纯照射组（R）和照射＋药物组（R＋D）,采用集落形成法分别检测塞来昔布对肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE的放射增敏效应,并绘制细胞存活曲线。结果塞来昔布对3种肿瘤细胞株均显示出放射增敏效应,R＋D组与R组相比较,反映放射敏感性指标的SF2、D0.01、D0、Dq出现不同程度的下调。30μmol/L塞来昔布作用A549细胞、HeLa细胞、CNE细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.26和1.34、1.25和1.33、1.24和1.32;当塞来昔布浓度增加到50μmol/L时,放射增敏比SERD0和SERDq分别增至1.74和1.84、1.36和1.47、1.33和1.61。结论塞来昔布在体外实验中可提高3种肿瘤细胞株的放射敏感性,呈浓度依赖性。塞来昔布有望作为放射增敏剂在临床广泛应用。     

急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的：构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60 R、NB4 R,并对其生物学性状进行鉴定。方法：以全反式维甲酸（ ATRA ）为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。 CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果：成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60 R、NB4 R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论：成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。     

RT-PCR检测R2L1细胞中Trk受体家族基因的表达

在Trk受体家族基因的非同源区中分别设计对TrkA，TrkB和TrkC受体基因特异的引物，采用RT－PCR法检测大鼠小脑神经细胞系R2和转染并表达了神经营养因子低亲和力受体p75NTR的R2细胞系R2L1细胞中Trk受体家族基因的表达，琼脂糖凝胶电泳分析RT－PCR产物表明，TrkA和TrkB受体基因在R1和R2L1细胞中均有表达，而无TrkC受体基因的表达。测序结果进一步证实了RT－PCR的结果，表明本方法能准确地检测Trk受体家庭基因的表达。     

瘦素及胰岛素对人类肝细胞癌细胞系细胞瘦素受体mRNA表达的作用

目的研究瘦素及胰岛素对瘦素受体(OB—R)的调节作用。方法以人类肝细胞癌细胞系(HepG2)为实验摸型,采用6孔板培养皿培养HepG2细胞,4个孔作为一个浓度组,通过DNA序列测定及半定量的逆转录-聚合酶链反应等方法,分别观察了0、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L浓度的人类瘦素及胰岛素对HepG2细胞内瘦素受体mRNA表达水平的影响。结果通过RT-PCR及DNA序列测定,我们证明了HepG2细胞含有瘦素长型受体(Ob-Rb)及短型受体(OB-Ra：OB—R219．3);通过半定量RT-PCR,我们检测了Ob-Rb和OB-R219．3的mRNA表达水平。当HepG2细胞与不同浓度的瘦素孵育24h后,10^-7-10^-6mol／L浓度的瘦素明显抑制了OB—Rb的mRNA表达,并在10^-6mol／L浓度时达到最大抑制为43％;同样10^-8-10^-6mol／L浓度的瘦素亦明显抑制了OB-R219．3的mRNA表达,并在10^-6mol／L浓度时达到最大抑制为49％。当HepG2细胞与不同浓度的胰岛素孵育24h后,OB-Rb及OB—R219．3的mRNA表达水平无改变。结论在HepG2细胞内瘦素对OB-Rb及OB—R219．3的mRNA表达有下调作用,而胰岛素对OB-Rb及OB-R219．3的mRNA表达无调节作用,这对与我们了解瘦素抵抗及瘦素的外周功能具有重要意义。     

不同癌细胞株放射敏感性与端粒长度的关系

目的:研究人类不同癌细胞株放射敏感性与端粒长度的关系,寻求放射敏感性预测的可行指标。方法:以不同层次的人类癌细胞株为实验对象,既包括鳞癌(Hep-2)、腺癌(ZR-75-30、MCF-7、MDA-MB-435S、T-47-D、F539-1590)、胶质瘤U251,又含有同一病理类型的不同亚株(5种不同的乳腺癌细胞株),还包括辐射诱导建立的放射抗拒细胞株(Hep-2R),用克隆形成实验拟合细胞存活曲线测定8株细胞的放射生物学参数,Southernblotting法测量各细胞株的端粒限制片断长度(TRF),分析放射敏感性与端粒限制片断长度的关系。结果:8株细胞的放射敏感性各不相同,Hep-2(人喉鳞癌细胞株)的SF2=0.4148,U251(人恶性胶质瘤细胞株)的SF2=0.7520,腺癌细胞株介于二者之间;端粒长度在放射抗拒细胞株Hep-2R中达11.12kb,数倍长于鳞癌亲本株或腺癌细胞株。端粒长度与放射敏感性参数SF2(r=0.786,P<0.05)、D0(r=0.905,P<0.01)均成正相关关系。结论:端粒长度与人癌细胞株的放射敏感性描述参数SF2、D0成正相关关系,故端粒长度与人癌细胞株的放射敏感性成负相关关系,它可以作为放射敏感性预测指标之一。     

Effects of R5 on adhesion, invasion and motility of human tongue carcinoma Tb cells

Background R5 is a monoclonal antibody which can neutralize the binding of Robo1 to Slit2. It was found that oral squamous cell carcinoma angiogenesis was significantly inhibited when R5 blocked slit-robo signaling pathway. However the effect of R5 on invasion of tongue cancer cells has not been investigated yet. Methods In this study, we treated human tongue carcinoma Tb cells with R5 at different concentrations, and the control Tb cells were treated with 10ug/ul IgG2b. The effect of R5 on proliferation, adhension, invasion and motility of Tb cells was checked MTT assay, cell attachment assay on fibronectin (FN), wound assay and chemotaxis assay, respectively. And gelatin-incorporated SDS-PAGE electrophoresis was used to investigate the activity of MMPS. Results R5 has no effect on proliferation of Tb cells, however R5 could significantly inhibit the motility, attachment and chemotaxis of Tb cells to FN and it could also significantly inhibit the activity of MMPS in Tb cells. Conclusion R5 at physiological concentration can inhibit the adhesion, invasion and metastasis of human tongue carcinoma Tb cells.