中国仓鼠V79细胞对长波紫外辐射的应激反应

用MTT分析和克隆形成法,证明长波紫外线(UVA)可刺激指数生长期V79细胞增殖。效应谱在330～370nm,效应峰值位于350nm处。在此波长下,最佳刺激剂量为5×10~4J/m~2。UVA还能诱发细胞抗药性和耐热性,并强化热休克细胞的抗药性。这些效应与照射剂量和照射与药物暴露之间时间间隔有依赖关系。     

中国仓鼠V79细胞系的oua^R和oua^S细胞蛋白质组分的双向电泳..

In the sense of gene expression, the primary and direct change in mutant cells should be involved in the protein component. Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis has been used to compare the protein components of ouabain resistant mutant cells (ouaR) and sensitive wild type cells (ouaS) of chinese hamster lung cell line V79. The procedure is based on O'Farrell's method and we have made some modifications. In order to make the study reliable, we took twenty polypeptide spots as a reference marker. These marker spots could always be reproduced in a series of parallel experiments with both mutant and wild cells. In addition, these markers covered different small areas, representing different isoelectric point (pI) and molecular weight (MW) on the electrophoretogram. With reference to these marker spots, some polypeptide spots showed variations in their position, size and density. It is notable that the changes appeared in the small area 4 (pI/MW:5.0/28-30kd) and the small area (pI/MW:6.3/39kd) is highly reproducible and significant, so that these changes might be specific to ouabain resistant mutant of V79 cells. Since the level of genetic polymorphism of mammalian cells on two-dimensional gel electrophoresis is quite low, these specific changes might reflect the differences in gene structure and expression. This primary study should enhance the usefulness of two-dimensional gel electrophoresis for mutagenesis research with cultured mammalian somatic cells.     

中国仓鼠V79细胞对长波紫外辐射的应激反应

用ＭＴＴ分析和克隆形成法，证明长波紫外线（ＵＶＡ）可刺激指数生长期Ｖ７９细胞增殖。效应谱在３３０－３７０ｎｍ，效应峰值位于３５０ｎｍ处。在此波长下，最侍刺激剂量为５×１０＾４Ｊ／ｍ＾２。ＵＶＡ还能诱发细胞抗药性和耐热性，并强化热休克细胞的抗药性。这些效应与照射剂量和照射与药物暴露之间时间间隔有依赖关系。     

乏氧和营养缺乏及低pH诱发中国仓鼠V79细胞抗药性

本实验结果表明，乏氧，营养缺乏和低ｐＨ都能使Ｖ７９细胞对亚德里亚霉素（ＡＤＲ）产生抗性，提示实体瘤内此类细胞可能是影响化疗效果的重要因素。乏氧细胞对活性氧的敏感性降低以及其ＡＤＲ抗性不为钙通道阻断剂所逆转，说明其抗药机理可级机理可能与质膜有关，面晃同于多药抗性（ＭＤＲ）。     

一氟二氯乙烷对中国仓鼠V79细胞的细胞毒性作用

目的通过体外实验,观察不同体积分数一氟二氯乙烷（F-141b）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79细胞）的毒性作用。方法用不同体积分数（10、20、30、40、50和60 ml/L）且经抽滤的一氟二氯乙烷对V79细胞进行染毒,分别培养不同时间（3、6、12、24和48 h）后,于显微镜下计数存活细胞数,计算存活率和IC50。同时设阴性对照组。结果在任一培养时间段,细胞存活率均随染毒剂量增加而降低,短时间组（3 h、6 h）和长时间组（24 h、48 h）组间比较差别具统计学意义（P〈0.05）;染毒剂量相同,细胞存活率随时间增加而降低,各染毒剂量组间差别显著（P〈0.05）,其中3 h组、12 h组和48 h组相关具有显著的统计学意义（P〈0.05）。存在明显的剂量―效应和时间―效应关系。24 h染毒IC50体积分数为32.37 ml/l。结论在本实验条件下,一氟二氯乙烷具有显著的细胞毒性作用,并存在剂量和时间效应。     

乏氧和营养缺乏及低pH诱发中国仓鼠V79细胞抗药性

本实验结果表明，乏氧、营养缺乏和低ｐＨ都能使Ｖ７９细胞对亚德里亚霉素（ＡＤＲ）产生抗性，提示实体瘤内此类细胞可能是影响化疗效果的重要因素。乏氧细胞对活性氧的敏感性降低以及其ＡＤＲ抗性不为钙通道阻断剂所逆转，说明其抗药机理可能与质膜有关，而不同于多药抗性（ＭＤＲ）。     

GSFs细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和银染显色及图像扫描与分析。结果：通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳，在17cm pH5～8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论：GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。     

果糖对γ射线照射V79细胞的辐射保护作用

目的 探讨果糖对γ射线照射的中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的保护作用及其可能的保护机制.方法 根据实验方法将V79细胞分为对照组、辐射组和果糖组,对照组不做特殊处理,辐射组使用辐射处理,果糖组则在辐射组基础上加用果糖处理.采用克隆形成率实验、实验细胞的活力测定(MT S)法和台盼蓝排除法3种方法对果糖的保护作用进行研究,测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,用二乙酸二氯荧光素(DCFH-DA)测定活性氧(ROS)水平.结果 与辐射组比较,果糖组V79细胞存活率提高,且与暴露于辐射前后的果糖添加时间无关.此外,与辐射组比较,果糖组SOD活性升高,ROS水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 果糖具有体外抗辐射活性,其通过提高细胞SOD活性和降低ROS水平来实现细胞保护作用.     

人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的优化人肝癌细胞株QGY-7701的蛋白质样品制备方法,建立其亚细胞蛋白质组双向电泳技术。方法分步提取人肝癌细胞株QGY-7701细胞质、细胞膜和细胞核蛋白,采用不同的方法除盐、浓缩样品,然后分别采用2种不同的水化上样缓冲液重悬样品,进行双向凝胶电泳。结果使用三氯乙酸/丙酮的除盐效果好,样品损失少;采用上样缓冲液(7mol/L尿素 2mol/L硫脲 4%CHAPS 40mmol/L Tris 65mmol/L DTT 2%两性电解质)有利于蛋白的溶解,获得更多的蛋白信息,检出的细胞质蛋白点数可达(995±53),细胞膜蛋白点数可达(1035±58),细胞核蛋白点数可达(893±45)。结论获得了清晰的人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳图谱。     

中国仓鼠细胞CTP合成酶cDNA的克隆及测序

用ＲＡＣＥ－ＰＣＲ方法合成了中国仓鼠细胞ＣＴＰ合成酶的ｃＤＮＡ，经克隆到载体并转化大肠杆菌。从大小不同的插入片段中筛选出一个１．３ｋｂ的片段进行测序。结果表明，此片段为ＣＴＰ合成酶的ＣＤＮＡ。     

氨利酮诱发V79细胞HGPRT位点突变研究

本文观察了国产心血管疾病新药氨利酮在Ｖ７９细胞ＨＧＰＲＴ位点正向突变试验系统中的诱变作用。结果表明：氨利酮在Ｓ９情况下，各浓度组突变体频率与对照组相比均未达到ＭＦ≥３ＳＭＦ的标准，也无剂量反应关系；但相同浓度在＋Ｓ９情况下，除高浓度组外，蓁三组ＭＦ随浓度增加而升高，且次高浓度组ＭＦ是对照组的３．８倍，故在本试验条件下氨利酮是需活化的诱变剂。