高磷对大鼠血管平滑肌细胞钙化及核心结合因子α1表达的影响

[目的]研究高磷对体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙沉积以及核心结合因子α1 (Cbfα1)的影响.[方法] 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,根据培养基中磷浓度分为:正常磷浓度(磷浓度1.4 mmol/L)和高磷浓度(磷浓度2.4 mmol/L)组,培养第3 d、6 d、9 d后,BCA法检测细胞内钙含量,放射免疫方法检测培养液骨钙素含量,ELISA检测细胞Cbfα1与DNA结合活性.[结果] 正常磷浓度组VSMCs钙含量在9 d内无明显变化.高磷浓度组第3、6、9天细胞钙含量比第0天明显增高(P<0.01).高磷浓度组细胞钙含量在第3、6、9天均明显高于相同时间点正常磷浓度组(P<0.05).培养3 d后,高磷浓度组培养上清液骨钙素水平明显高于正常磷浓度组,(14.62±2.93)pg/μg蛋白vs (2.83±0.64)pg/μg蛋白,P<0.01.Cbfα1活性在正常磷浓度组细胞9 d内无明显变化;但在高磷浓度组6、9天与第0天比明显增强(P<0.05).高磷浓度组在第6、9天细胞Cbfα1活性与相同时间点正常磷浓度组比明显增强(P<0.05).[结论] 高磷可直接刺激大鼠VSMC的钙沉积和骨钙素产生,其作用可能与高磷上调VSMC的Cbfα1表达有关.     

促红细胞生成素通过上调α-Klotho减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 观察促红细胞生成素（EPO）对钙化血管平滑肌细胞（VSMCs）中α-Klotho蛋白表达的影响，研究α-Klotho在EPO减轻血管钙化中的作用。方法 采用高磷刺激大鼠VSMCs钙化，实时聚合酶链反应检测钙化相关基因的表达变化，von Kossa染色和钙含量检测钙化情况，应用siRNA技术敲低VSMCs中α-Klotho的表达，Western blotting检测VSMCs中α-Klotho的蛋白表达。结果 与高磷刺激的钙化模型组相比，EPO下调了钙化VSMCs中骨钙素和Cbfα-1的mRNA水平（P <0.01），并减少了钙盐沉积和钙含量（P <0.01）。Western blotting结果发现，EPO可使钙化VSMCs中α-Klotho蛋白表达水平上调1.19倍（P <0.05）。敲低VSMCs中α-Klotho后，EPO抑制骨钙素和Cbfα-1 mRNA表达的作用下调。而且，α-Klotho敲低使EPO抑制钙盐沉积和钙含量的作用被阻断。结论 α-Klotho参与了EPO减轻VSMCs钙化的作用，该实验结果为防治血管钙化提示了可能的干预靶点。     

尿毒症患者桡动脉钙化与平滑肌肌动蛋白α及骨桥蛋白表达关系的研究

目的:观察30例尿毒症患者桡动脉钙化的组织学特点并分析可能的机制。方法:用硝酸银染色和茜素红染色了解血管钙化的情况,免疫组化研究平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)和骨桥蛋白(OP)的表达特点,并在体外高钙磷的培养条件下,观察大鼠血管平滑肌细胞上述指标的变化。结果:11例尿毒症患者出现桡动脉钙化,主要局限于血管中层,与血钙磷乘积水平升高密切相关。平滑肌层α-SMA表达明显减弱,轻/中度钙化组为71.11%±4.93%,重度钙化组为54.66%±5.15%,与无钙化组(89.54%±2.92%)相比有显著性差异(P<0.01);钙化的血管平滑肌细胞中骨桥蛋白的含量亦明显增加(轻/中度钙化组为22.19%±7.12%,重度钙化组为37.87%±6.17%),显著高于无钙化组(6.85%±6.19%,P<0.01)。当用高钙磷的营养液培养10天后,血管平滑肌细胞间出现钙盐沉积,OP蛋白的含量明显增加,伴α-SMA表达减少。结论:尿毒症患者的血管钙化以中层为主,高钙磷乘积的环境可诱导血管平滑肌细胞α-SMA的表达明显减少、OP含量增多,表现出类似成骨样细胞的生物学特点。     

镁对人血管平滑肌细胞钙化的作用

目的：研究镁对高钙高磷诱导的人血管平滑肌细胞（hVSMC）钙化的影响。方法：无菌条件下提取胎儿脐动脉平滑肌细胞,分为正常对照组（A组）、高钙高磷组（B组）、高钙高磷+硫酸镁组（C组）。B组、C组培养3 d后,部分（B1组、C1组）继续高钙高磷培养液培养,部分（B2组、C2组）换用普通培养液培养。于12h、24 h、72 h、第4、第7、第10天测定细胞层钙含量,并采用Western blot法测定核心结合因子1（cbfa1）、磷酸核糖焦磷酸合成酶2（Prps2）蛋白表达水平。结果：B组钙含量升高,C组较B组、C1组较B1组、C2组较B2组,钙含量均明显下降（P＜0.05）。Western blot结果显示,12 h、24 h、72 h B组Cbfa1表达升高,C组表达降低（P＜0.05）;第4、第7、第10天,C1组较B1组、C2组较B2组,Prps2表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：高钙高磷促进hVSMC钙化,镁抑制了hVSMC钙化进展,激活了Prps2蛋白表达,促进了钙化消退。     

酸性环境抑制高磷诱导大鼠VSMCs 钙化的机制研究

目的 探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响及其机制。 方法 体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs 按随机数字表法分为正常对照组、 高磷＋ pH 7.4 组、高磷＋ pH 7.1 组。刺激4 d 后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot 检测活化T 细胞 核因子c1（NFATc1）、Runt 相关转录因子2（Runx2）基因和蛋白的表达。刺激14 d 后,对各组细胞进行 钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶（ALP）活性测定。结果 与正常对照组比较,高磷＋ pH 7.4 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达升高（P <0.05）;与高磷＋ pH 7.4 组比较,高磷＋ pH 7.1 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达降低（P <0.05）。相关性分析发现,NFATc1 蛋白表达水平与ALP 活性、 Runx2 蛋白表达水平呈正相关（P <0.05）。结论 酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs 钙化,其机制可 能是通过降低NFATc1 表达,抑制VSMCs 表型转化来实现的。     

血管紧张素-(1-7)对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其机制研究

目的复制人脐静脉平滑肌细胞(HUSMCs)钙化模型,观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对HUSMCs钙沉积的影响,探索Ang-(1-7)延缓或抑制HUSMCs钙化的机制。方法采用β-甘油磷酸盐(β-GP)复制HUSMCs钙沉积模型,Ang-(1-7)干预后,对细胞进行Von Kossa染色及图像分析、检测碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞钙含量;检测细胞培养液中转化生长因子β1(TGFβ1)活性、骨钙素(OC)含量及细胞中核心结合因子1(Cbfα1)蛋白表达。结果 Ang-(1-7)可明显减轻钙化HUSMCs聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻(P<0.01),且10-5、10-7、10-9mol.L-1Ang-(1-7)与钙化组相比钙化细胞百分比、细胞钙含量和ALP活性均明显降低(P均<0.01),细胞TGFβ1分泌水平、Cbfα1表达、骨钙素含量均较钙化组降低(P均<0.01)。结论 Ang-(1-7)可减轻HUSMCs钙化程度,其作用机制与减弱TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1的表达有关。     

高磷诱导及膦甲酸钠干预血管平滑肌细胞钙化的研究

目的 观察不同浓度磷对体外培养的牛主动脉平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达的影响,同时观察膦甲酸钠对高磷诱导该细胞钙化的干预作用.方法 体外培养牛主动脉平滑肌细胞,观察不同磷浓度(Pi 1.5、2.0 mmol·L-1)、不同培养时间(3、6、9 d)血管平滑肌细胞的钙沉积,以及不同磷浓度(Pi 1.5、2.0、2.5 mmol·L-1)培养血管平滑肌细胞72 h骨钙素的表达.同时观察不同浓度膦甲酸钠对高磷(Pi 2.0 mmol·L-1)诱导的钙沉积和骨钙素增加的抑制作用.用甲O-酚酞络合酮方法测定钙含量;放射免疫法测定培养上清液中骨钙素的浓度;BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量与骨钙素浓度;RT-PCR测定骨钙素mRNA的表达.结果 在相当于正常血磷浓度(1.5 mmol·L-1)的培养基中,平滑肌细胞钙沉积量小;而在相当于高磷血症(2.0 mmol·L-1)的培养基中,钙沉积明显增加[培养6 d,(77.187±11.692) vs(25.768±1.750) μg·(mg蛋白)-1,P＜0.01],并呈时间和剂量依赖性.与Pi 1.5 mmol·L-1组相比,Pi 2.0 mmol·L-1组培养上清液中骨钙素的水平明显增高[(1.503×10-2±2.601×10-3) vs(2.981×10-3±8.382×10-4) ng·(μg蛋白)-1,P＜0.001];Pi 2.0 mmol·L-1组平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达也明显增加(OC/GAPDH,1.906±0.132 vs 0.748±0.0366,P＜0.001).膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积[培养6 d,Pi 2.0 mmol·L-1 PFA 1.0 mmol·L-1组vs Pi 2.0 mmol·L-1组,(37.729±5.899) vs(77.187±11.692)μg·(mg蛋白)-1,P＜0.001]和上清液中骨钙素的表达[(4.529×10-3±1.250×10-3) vs(1.503×10-2±2.601×10-3) ng·(μg蛋白)-1,P＜0.001]及平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达(OC/GAPDH,0.642±0.092 vs 1.885±0.165,P＜0.01).结论 高磷能直接促进血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加,说明高磷血症可能是促进血管钙化的独立危险因素;膦甲酸钠能有效地抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加,可以作为一种新的防治高磷诱导血管钙化的药物.     

Bax抑制因子1可抑制体外培养的大鼠血管平滑肌细胞的钙化

目的 探讨Bax抑制因子1（BI-1）对血管平滑肌细胞钙化的具体作用机制。方法 使用β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞建立钙化模型。将模型分为对照组（使用常规培养基）、BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用常规培养基）、钙化组（使用钙化培养基）、钙化+BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用钙化培养基）4组。运用茜素红S染色测定血管平滑肌细胞钙沉积,酶联免疫吸附法测定细胞碱性磷酸酶活性和钙含量,Western blot法测定Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平。结果（1）随着钙化诱导时间的延长,BI-1蛋白表达明显下降,结果具有明显差异性（P=0.001）;（2）使用质粒转染方法过表达BI-1蛋白后,细胞钙含量、碱性磷酸酶活性明显降低（P=0.0006）,Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达明显下降（P=0.0001）,血管钙化减轻;（3）钙化诱导后血管平滑肌细胞凋亡率增加,而过表达BI-1后细胞凋亡率明显减少（P=0.01）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平下降（P=0.0003）。结论 BI-1抑制细胞凋亡、钙磷沉积和细胞骨型分化起到减轻血管钙化作用。     

高糖刺激血管平滑肌细胞表达cbfα-1和OC的实验研究

目的 研究高糖在刺激大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)转分化过程中对相关骨基质蛋白如核心结合因子α-1(cbfα-1)和骨钙索(OC)表达的影响,并探讨高糖在诱导血管钙化发生过程中可能的作用机制.方法 原代培养VSMC,分为正常糖浓度组(5 mmol/L D-葡萄塘)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)和甘露醇组(5mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇),在不同时间点检测各组VSMC的钙沉积指标;茜素红染色了解各组VSMC钙化程度;实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测各组cbfα-1和OC的mRMA水平和蛋白表达变化;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性.免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平.结果 与正常糖浓度和甘露醇对照组相比较,高糖组VSMC钙沉积和钙化染色均明显增强,cbfα-1和OC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达下降(P<0.05),均呈时间依赖性.高糖刺激后VSMC的ALP的活性比对照组增加了近2倍.结论 高糖介导的平滑肌细胞钙化可能与高糖促进VSMC分泌骨基质蛋白cbfα-1和OC水平增加有关;高糖在促进VSMC钙化同时,使VSMC的α-SMA表达水平降低,促进其向成骨样细胞转分化.     

兔缺血再灌注损伤后肾皮质α-SMA的表达

目的：观察新西兰大白兔缺血再灌注后α-SMA在肾皮质不同时点的表达。探讨α-SMA在肾缺血再灌注损伤中的变化和可能的趋势。方法：选健康新西兰大白兔35只,随机分为对照组（A组）、急性失血性休克25rain组（B组）、缺血再灌注3／4h组（C组）、缺血再灌注1h组（D组）、缺血再灌注2h组（E组）、缺血再灌注3h组（F组）、缺血再灌注4h组（G组）,每组5只。应用免疫组化的方法观察各组肾皮质α-SMA的表达情况。结果：A组α-SMA适度表达,B组α-SMA表达降低,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,再灌注1h达到最低,再灌注3h表达增加。D组、E组、F组、G组和A组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：（1）α-SMA的表达量在再灌注早期呈降低趋势,随着再灌注时间的延长,表达量有升高的趋势。（2）各实验组α-SMA的表达量与A组比较有统计学差异（P〈0．05）,提示α-SMA与血管平滑肌细胞的舒缩状态有密切的关系,血管平滑肌细胞在再灌注各时点处于不同的收缩状态。     

高糖激活WNT信号通路促进血管平滑肌细胞钙化

目的探讨高糖导致血管钙化机制是否与WNT信号通路有关。方法采用体外血管钙化模型,高糖诱导血管平滑肌细胞
钙化,检测WNT信号分子和骨相关蛋白Cbfa1,Osx,OCN,BMP2的表达以及细胞钙化程度。观察WNT信号抑制剂Dkk1对高
糖诱导的血管平滑肌细胞钙化和Cbfa1,Osx,OCN,BMP2表达的影响。结果高糖能上调血管平滑肌细胞WNT信号通路分子
包括Wnt3a,Wnt7a,Fzd4,Wisp1 mRNA的表达（1.86±0.15, 1.68±0.13, 2.10±0.17, 2.30±0.20, P<0.05）,促进WNT信号通路关键
分子β-catenin的磷酸化（2.70±0.22, P<0.05）,激活WNT信号通路。使用WNT信号抑制剂Dkk1能减轻血管平滑肌细胞钙化,
下调骨相关蛋白Cbfa1,Osx,OCN,BMP2 mRNA的表达［（51±9）%,（58±11）%,（56±10）%,（62±10）%,P<0.01）］。结论WNT
信号通路参与了高糖诱导的血管平滑肌细胞钙化。
     

高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化及其电镜表现

目的观察高磷条件体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)是否发生钙含量的变化及其电镜下的微观表现。方法应用大鼠原代血管平滑肌细胞进行体外实验,将培养细胞分为对照组和高磷组。在培养的10d内观察细胞的形态学变化,并应用原子分光光度计检测细胞钙含量,应用电镜观察细胞的微观变化。结果对照组细胞VSMCs钙含量在10d内无明显增加,高磷组VSMCs钙含量在培养第8天后明显增加,与换液当天比较差异有统计学意义(P<0.01)。2组细胞电镜下第10天VSMCs细胞外基质中均可见大量胶原纤维,高磷组还可见高密度电子致密物呈颗粒状沿胶原纤维沉积。结论高磷条件可诱导体外培养的大鼠VSMCs细胞钙含量增加。电镜下高密度电子致密物呈颗粒状并沿胶原纤维沉积。     

高糖加高胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞，观察高浓度葡萄糖加高浓度胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响，并探讨其可能作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后，利用结晶紫染色法观察细胞的增殖情况；利用[^3H]thymidine标记法测定细胞DNA的合成；利用流式细胞仪分析细胞周期。结果与正常对照组相比，高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素组分别造成了心肌成纤维细胞数目、DNA合成及S＋G2＋M期细胞的百分比增加，（P〈0．01），而高糖加高胰岛素组的各项指标值显著高于其它各组，（P〈0．01）。结论 高糖加高胰岛素具有协同促进心肌成纤维细胞增殖的作用。     

高糖对大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮及其合酶活性的影响

目的：研究高糖对主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其合酶（ＮＯＳ）活性的影响。方法：应用ＮＯ及ＮＯＳ试剂盒测定大鼠主动脉血管平滑肌细胞ＮＯ的含量及ＮＯＳ的活性。结果：高糖能显著抑制培养的平滑肌细胞ＮＯ的产生，并能明显降低ＮＯＳ的活性，具有浓度和时间效应。结论：高糖对平滑肌细胞产生ＮＯ的抑制可能是通过抑制其ＮＯＳ的活性而起作用的。     

高糖高脂饮食对新西兰兔血清葡萄糖和脂质浓度的影响

目的明确高糖高脂饮食对新西兰兔血清葡萄糖和脂质浓度的影响,为复制特殊饮食致新西兰兔糖尿病性动脉粥样硬化模型奠定实验基础。方法60只雄性新西兰白兔随机分为基础饲料组、高脂饲料组、中剂量糖组、高脂低糖组、高脂中糖组和高脂高糖组。实验周期12周,定时抽血检测血清葡萄糖和总胆固醇酯、甘油三酯和高密度胆固醇酯的浓度,检测糖化血红蛋白浓度评价一段时间内血糖变化情况。结果各组血糖实验前后和不同组间未见明显升高;各组每10 g血红蛋白中的糖化血红蛋白吸光度值都在正常范围内(13.3~23.5),各组间无明显差异;高脂饲料组血清总胆固醇酯和甘油三酯升高明显,高密度脂蛋白胆固醇酯有所降低。结论高脂饮食易引起新西兰兔高脂血症,但通过灌胃给糖12周不易引起新西兰兔高糖血症。     

高能正电子成像

高能正电子成像技术是现代医学影像技术的重要组成部分,近几年来由于其固有的特点及潜在价值极受人们青睐。正电子成像利用回旋加速器生产的带正电子的放射性核素注入体内产生的湮没辐射γ光子构成影像。正电子是与普通电子相类似的一种粒子,带一个正电荷。正电子只能瞬态存在,很快与组织中的负电子相结合产生湮没辐射(annihilation),湮没辐射产生两个能量相等、方向相反的511KeVγ光子。因此,正电子成像实际上是511KeVγ光子成像。正电子放射性核素可构成人体各部位的任何影像,包括平面影像、动态影像、断层影像及全身影像。 医学诊断上所用的正电子放射性核素有~(18)F,~(11)C,~(15)O,~(13)N。这些放射性核素有如下特点:①它们是组成人生命的基本元素,它们本身及其标记化合物的代谢过程反应了人体生理、生化功能的变化;②正电子放射性核素为超短半衰期放射性核素,适合于快速动态研究;③湮没辐射产生的γ光子互成180°,提供了很好的空间定位,正电子成像仪一般不需要机械准直器而采用电子准直,大大提高了探测灵敏度,改善了空间分辨率。 实现正电子断层成像的方法有单光子断层法和符合探测法两种。机械结构包括探头、断层床、计算机和附属设备,探头和计算机是正电子成像仪的核心。正电子断层显像主要用于     

高房价、高地价与房产税的深层思考

当前我国经济社会中面临的突出问题,莫过于高房价给人们带来的困惑与不安。而且有不少人把高房价归咎于政府的高地价。殊不知,高房价的最直接原因,是市场上房产供求比例的严重失衡。与其说是高地价引发高房价,不如说是高房价拉动高地价。面对国务院多次加强对房产的宏观调控,不仅没有把过高的房价降下来,反而出现越调房价越高的尴尬局面。房产税重在完善财税体制和调节居民收入分配,它虽具有调节房产的需求功能,但对其可能带来的降价效应不应期望过高。加大保障房供有量和抑制投资与投机需求,才是抑制房价高涨的重要对策。     

高度近视与生存质量

对于高度近视患者，要提高视力是很难的，但可以提高患者生存质量，使患者身心得到愉悦。本文通过对高度近视发病率及危害的概述，以及生存质量在眼科的应用的综述，提出了生存质量在高度近视眼病中的研究方向及意义。     

高钾高钙对乌龟心室肌细胞动作电位的影响

用浮置式细胞内微电极法引导在位灌流乌龟心脏心室肌细胞动作电位,观察高钾、高钙的单独作用及相互作用。实验发现,高钾可使动作电位幅度(APA)降低,静息电位(Rp)减少,动作电位50％及90％时程(APD50,APD90)缩短;高钙能使Rp降低,超射增加,对APA无明显影响;高钙能拮抗高钾降低心率及APA的作用,但对高钾缩短APD有协同作用,对心率的影响提示对起搏细胞也有拮抗作用。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c-fos及PDGF受体基因表达的影响

动脉平滑肌细胞 (sm ooth muscle cell,SMC)的增殖在动脉粥样硬化 (atherosclerosis,AS)的形成过程中极其重要。利用体外培养的人主动脉 SMC,观察了天然高密度脂蛋白 (Native high density lipoprotein N-HDL)及氧化修饰 HDL(OX- HDL)对培养的人主动脉 SMC原癌基因 c- fos及 PDGF受体基因转录表达的影响。结果表明 :1 N- HDL 对 SMC c- fos,PDGF受体基因表达无影响 (P>0 .0 5 ) ;2 OX- HDL 对 SMC PDGF受体基因表达无影响 (P>0 .0 5 ) ;3OX- HDL使 SMC c- fos基因表达显著增强 (P<0 .0 1 ) .上述结果表明 ,OX- HDL的致 AS作用可能与刺激 SMC c- fos原癌基因表达增加有关