丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响

目的探讨丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响。方法将原代培养、鉴定的Sprague-Dawley大鼠星形胶质细胞随机分为对照组、模型组和实验组,各组细胞经高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)培养48 h,细胞贴壁并伸出突触后实验组及模型组更换DMEM无糖培养基进行氧糖剥夺,对照组仍使用DMEM高糖培养基培养,3组细胞放入培养箱中孵育6 h后,实验组更换为含100μmol·L~(-1)丁基苯酞的DMEM高糖培养基,模型组更换为DMEM高糖培养基进行氧糖剥夺/复氧糖,对照组更换新的DMEM高糖培养基,继续培养24 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力,免疫荧光及免疫印迹法检测星形胶质细胞中caspase-3表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)表达。结果 MTT法结果显示,对照组星形胶质细胞活力高于实验组和模型组(P<0.05),实验组星形胶质细胞活力显著高于模型组(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组星形胶质细胞内荧光信号最弱;模型组星形胶质细胞内荧光信号最强;实验组星形胶质细胞内荧光信号强度较模型组降低,但高于对照组(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,模型组星形胶质细胞在氧糖剥夺/复氧糖后caspase-3表达相对最高,实验组次之,对照组最低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。氧糖剥夺/复氧糖24 h后,实验组细胞培养液中LDH水平高于对照组(P<0.05),模型组细胞培养液中LDH水平显著高于实验组(P<0.05)。结论丁基苯酞可以改善氧糖剥夺/复氧糖引起的星形胶质细胞损伤。     

氧糖剥夺、复氧后损伤星形胶质细胞中MMP-9的表达变化与意义

目的通过观察金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在氧糖剥夺、复氧培养后损伤星形胶质细胞中基质的表达变化并抑制其活性,探讨其在氧糖剥夺、复氧后细胞损伤中的意义。方法将星形胶质细胞分为正常组、模型组和GM6001组。模型组细胞在无糖DMEM培养基,1%O2的培养条件下行3、5、7 h时长的氧糖剥夺后复氧至24 h。GM6001组细胞在5 h氧糖剥夺、复氧的过程中加入外源性基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001,10μmol/ml),复氧至24 h。用RT-PCR测定不同时长氧糖剥夺后星形胶质细胞MMP-9 mRNA表达变化,ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度变化;用光学显微镜观察各组的细胞形态变化,LDH漏出率、CCK-8法检测细胞的损伤情况及存活率。结果①RT-PCR及ELISA法检测示:与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞MMP-9 mRNA表达量和细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度均有所增加(P<0.05),随着氧糖剥夺时间的延长,均呈现不断上升趋势;②与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,细胞损伤加重,光镜下细胞出现明显肿胀,并有部分细胞呈凝固性坏死,LDH漏出率不断增高(P<0.01)、存活率则逐渐下降(P<0.05,P<0.01),且培养上清MMP-9蛋白浓度与细胞LDH漏出率的增高程度呈正相关(r=0.693,P<0.05);与模型组相比,5 h氧糖剥夺、复氧后,GM6001组细胞形态学损伤表现明显减轻,LDH漏出率水平也有明显下降(P<0.01),细胞存活率则显著上升(P<0.05)。结论 MMP-9过表达可能是氧糖剥夺、复氧后引起细胞损伤的重要因素之一。     

P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中的作用

目的探讨P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺,复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中发挥的作用。方法原代培养的星形胶质细胞分为正常组,模型组和P38抑制剂组。模型组:细胞接受5 h氧糖剥夺/复氧处理;P38抑制剂组:细胞在5 h氧糖剥夺后的复氧过程中加入P38抑制剂(SB203580,10μmol/L)处理。在5 h氧糖剥夺/复氧后的不同时间点,用RT-PCR及Westem blotting法测定P38、磷酸化P38及水通道蛋白4(AQP4)的表达变化,光镜观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶测定反应细胞损伤程度。结果与正常组相比,星形胶质细胞在5 h氧糖剥夺/复氧后,其磷酸化P38的水平明显上升,并在复氧lh时达到峰值(P<0.01),AQP4 mRNA和蛋白的表达也明显升高(P<0.01),同时细胞水肿在氧糖剥夺/复氧后2 h时达到高峰,LDH漏出率也明显升高(P<0.01)。与模型组相比,加入P38抑制剂可明显降低5 h氧糖剥夺/复氧后P38磷酸化的水平(P<0.01),以及复氧后各时间点AQP4增高的水平(P<0.01),并可明显缓解氧糖剥夺/复氧后细胞水肿及LDH上升的程度(P<0.01)。结论 P38信号通路的激活参与了星形胶质细胞5 h氧糖剥夺/复氧后AQP4上调及细胞水肿形成,抑制p38的激活可降低AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。     

低(无)糖、缺氧和缺氧/复氧对培养鼠脑胶质细胞活力及致损的影响

目的 :研究氧、糖剥夺和缺氧 /复氧单一或联合因素对培养鼠脑星形胶质细胞活力和引起损伤的影响及其时效反应。方法 :培养的鼠脑星形胶质细胞分为 3组 :无糖组 (D Hanks液 )、低糖组 (DMEM中含 2 .75mmol葡萄糖 )和正常糖组 (DMEM中含 5 .4 9mmol葡萄糖 ) ,各组分别进行不同时间的缺氧和 /或缺氧 /复氧。通以 5 %CO2 +95 %N2 混合气造成缺氧 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率作为细胞受损指标 ,噻唑蓝 (MTT)降解率评测细胞活力。结果 :①在正常氧培养 2 4h ,低糖和无糖培养的细胞LDH漏出率和MTT降解率并不出现明显变化 ;② 3组二项指标在缺氧培养的各时间点依次出现明显变化 ,无糖组为 8h(P <0 .0 5 ) ,低糖组和正常糖组为 12h(P <0 .0 5 ) ,2 4h(P <0 .0 1) ;③缺氧 /复氧引起 3组二项指标出现明显变化 ,其时间点分别为无糖组缺氧 4h +复氧 12h(P <0 .0 5 ) ;低糖组缺氧 8h +复氧 12h (P <0 .0 5 ) ;正常糖组缺氧 8h +复氧 2 4h (P <0 .0 5 ) ;④在同一缺氧和缺氧 /复氧时间点 ,指标值变化程度为无糖组 >低糖组 >正常糖组 ;且两项指标的变化具有时间依赖性 ,呈反变关系。结论 :①氧、糖剥夺和缺氧复氧能引起培养的鼠脑星形胶质细胞的损伤 ;②氧、糖剥夺和缺氧 /复氧联合作用时能增加对培养的鼠脑星形胶质细胞     

Significance of MMP-9 expression in astrocytes after oxygen-glucose deprivation/reoxygenation in vitro

目的 通过观察金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在氧糖剥夺、复氧培养后损伤星形胶质细胞中基质的表达变化并抑制其活性,探讨其在氧糖剥夺、复氧后细胞损伤中的意义.方法 将星形胶质细胞分为正常组、模型组和GM6001组.模型组细胞在无糖DMEM培养基,1％ O2的培养条件下行3、5、7h时长的氧糖剥夺后复氧至24h.GM6001组细胞在5h氧糖剥夺、复氧的过程中加入外源性基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001,10 μmol/ml),复氧至24h.用RT-PCR测定不同时长氧糖剥夺后星形胶质细胞MMP-9 mRNA表达变化,ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度变化;用光学显微镜观察各组的细胞形态变化,LDH漏出率、CCK-8法检测细胞的损伤情况及存活率.结果 ①RT-PCR及ELISA法检测示:与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞MMP-9 mRNA表达量和细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度均有所增加(P＜0.05),随着氧糖剥夺时间的延长,均呈现不断上升趋势;②与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,细胞损伤加重,光镜下细胞出现明显肿胀,并有部分细胞呈凝固性坏死,LDH漏出率不断增高(P＜0.01)、存活率则逐渐下降(P＜0.05,P＜0.01),且培养上清MMP-9蛋白浓度与细胞LDH漏出率的增高程度呈正相关(r=0.693,P＜0.05);与模型组相比,5h氧糖剥夺、复氧后,GM6001组细胞形态学损伤表现明显减轻,LDH漏出率水平也有明显下降(P＜0.01),细胞存活率则显著上升(P＜0.05).结论 MMP-9过表达可能是氧糖剥夺、复氧后引起细胞损伤的重要因素之一.     

氧糖剥夺对小鼠小胶质细胞NKG2D受体及其配体表达的影响

目的 探究自然杀伤细胞活化受体（NKG2D）在氧糖剥夺损伤小胶质细胞中的表达变化及炎症反应中的潜在作用。方法 建立小鼠神经元细胞HT22氧糖剥夺(OGD)模型,造模19小时后复氧复糖,分别收集正常条件培养基(Control)和OGD培养基(Model)刺激小鼠BV2小胶质细胞。CCK-8法检测HT22和BV2细胞活性;qPCR检测BV2细胞中NKG2D受体信号通路及炎症因子表达;ELISA法检测BV2细胞培养上清中炎症因子含量。结果 OGD可介导HT22神经元细胞存活率明显下降（P＜0.01）,但OGD上清对BV2细胞活性无明显影响（P＞0.05）。与Control组比较, NKG2D受体及其H60配体、接头蛋白DAP10的mRNA表达水平明显上升（P＜0.01）,但RAE-1与MULT1配体未见明显变化（P＞0.05）;同时,肿瘤坏死因子（TNF-α）在Model组BV2细胞中的mRNA水平及培养基中的蛋白含量均明显上升（P＜0.01）。结论 氧糖剥夺可诱导BV2细胞H60/NKG2D、下游效应器DAP10及炎症因子表达。提示NKG2D受体信号通路可能在脑缺血后小胶质细胞的炎症反应中发挥重要作用。     

依达拉奉对氧剥夺引起的大鼠肠隐窝上皮细胞损伤的保护效应研究

[目的]研究依达拉奉对氧剥夺导致的IEC -6细胞株损伤的保护效应.[方法]将预先培养好的细胞分为3组:正常组(N组),氧剥夺组(OGD,IR组)和依达拉奉治疗组(OGD+依达拉奉,E组).本研究中所用氧剥夺模型是将细胞株换无糖无血清的培养基后放入含5％ CO2和95％N2的密闭培养箱中2h,后重新复氧复糖.在复氧复糖的同时,将依达拉奉盐溶液( 10 mg/mL)加入细胞培养基中.在复氧复糖2h,收集细胞用DHE荧光探针进行氧自由基(ROS)测定;伤后12 h,富集细胞用于超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的测定;伤后24h收集细胞,用流式细胞仪测定细胞凋亡和Alamar Blue测定细胞活力.[结果]DHE荧光探针结果显示OGD导致的ROS,E组比IR组减少:OGD刺激后,IEC -6细胞内的MDA浓度上升为(1.52±0.21) mmol/mg,而E组的含量为(1.21±0.16) mmol/mg,P＜0.05.OGD后,IEC -6细胞内的SOD活力下降至(7.35±0.84) U/mg,而E组的SOD活力为(8.25±1.12) U/mg,P＜0.05.OGD后细胞活力下降为0.48±0.081,而E组的细胞活力为0.56±0.049,P＜0.01.同时,流式细胞仪的结果显示,依这拉奉抑制了OGD导致的细胞过度凋亡.[结论]依这拉奉可以减轻OGD造成的IEC -6细胞的损伤.     

七氟醚后处理对氧糖剥夺/复氧复糖诱导HT22细胞DNA损伤及SIRT1表达的影响

目的 探讨七氟醚后处理对HT22细胞氧糖剥夺/复氧复糖后DNA损伤及沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响.方法 随机将对数生长期的HT22细胞分为7组:空白对照组(CON),氧糖剥夺/复氧复糖4 h组(OGD/R 4 h),氧糖剥夺/复氧复糖4 h+1％七氟醚后处理组(OGD/R 4 h+1％SEVO),氧糖剥夺/复氧复糖4 h+2％七氟醚后处理组(OGD/R 4 h+2％SEVO),氧糖剥夺/复氧复糖6 h组(OGD/R 6 h),氧糖剥夺/复氧复糖6 h+1％七氟醚后处理组(OGD/R 6 h+1％SEVO),氧糖剥夺/复氧复糖6 h+2％七氟醚后处理组(OGD/R 6 h+2％SEVO);实验后序部分只取前四组研究.MTT法检测细胞存活率,PI/Hoechst荧光双染检测细胞坏死及凋亡,TUNEL染色检测神经元凋亡,免疫荧光染色测定Cleaved-casepase3表达,免疫荧光染色检测8-OHdG以测定DNA损伤程度,Western blot测定SIRT1、Bcl-2及BAX的蛋白表达.结果 前半部分实验结果 中,与CON组比较,OGD/R 4 h及OGD/R 6 h组细胞存活率均降低(均P<0.01),凋亡细胞及坏死细胞占比升高;与对应OGD/R 4 h组比较,1％和2％七氟醚后处理的细胞存活率升高(均P<0.01),凋亡及坏死细胞数量占比降低;与对应OGD/R 6 h组比较,1％和2％七氟醚后处理的细胞存活率升高(均P<0.01),凋亡及坏死细胞占比降低.实验后半部分,与CON组比较,OGD/R 4 h组中TUNEL染色阳性细胞数增多,Cleaved-casepase3表达增加(P<0.01),8-OHdG含量增多(P<0.01),BAX蛋白表达上调(P<0.01),SIRT1、Bcl-2蛋白表达下调(均P<0.01);与OGD/R 4 h组比较,1％和2％七氟醚后处理的细胞TUNEL染色阳性细胞数减少,Cleaved-casepase3表达降低(均P<0.01),8-OHdG含量降低(均P<0.01),BAX蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),而SIRT1、Bcl-2蛋白表达上调(均P<0.01;P<0.05,P<0.01).结论 七氟醚后处理改善氧糖剥夺/复氧复糖诱导的HT22海马神经元DNA氧化损伤及凋亡,并上调SIRT1蛋白表达.     

Orexin-A对缺氧状态下海马神经元的影响及其机制

目的通过建立大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)模型,探讨orexin-A(OXA)对缺氧状态海马神经元的作用及其潜在机制。方法 Wistar大鼠海马神经细胞分为对照组、氧糖剥夺组(OGD组)、氧糖剥夺加OXA组(OGD+OXA组,包括OGD+OXA 1 nmol/L组、OGD+OXA 3 nmol/L组、OGD+OXA 10 nmol/L组、OGD+OXA100 nmol/L组)、氧糖剥夺加U0126组(OGD+U0126组)和氧糖剥夺加OXA、U0126组(OGD+OXA+U0126组)。取原代海马神经元培养72 h后,氧糖剥夺以建立缺氧损伤模型,后分别加入不同终浓度的OXA(1、3、10、100 nmol/L),于48 h观察OXA对海马神经元凋亡率的影响;并利用U0126阻滞ERK1/2通路,通过Western blotting及细胞凋亡率检测,探究OXA对海马神经元凋亡率影响的分子机制。结果与OGD组相比,OGD+OXA 3 nmol/L组、OGD+OXA 10 nmol/L组和OGD+OXA 100 nmol/L组的细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);OGD+OXA10 nmol/L组和OGD+OXA 100 nmol/L组的细胞凋亡率高于OGD+OXA 3 nmol/L组(P<0.01),而二者之间无统计学差异(P>0.05)。U0126预处理后,OGD+U0126组海马神经元的凋亡率明显低于OGD组(P<0.01);OGD+U0126+OXA组的海马神经元凋亡率明显低于OGD+OXA 100 nmol/L组(P<0.01)。结论高浓度OXA对海马神经元有损害作用,并加重缺氧状态下的神经元损害,其作用机制与OXA过度激活ERK1/2信号通路有密切关系。     

HT22海马神经元细胞氧糖剥夺再灌注模型的建立

【目的】探讨HT22海马神经元细胞氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型的建立条件。【方法】将HT22海马神经元细胞分为正常对照组和模型组,以不同的密度接种至96孔板,正常对照组细胞始终在正常气体条件下培养,模型组先采用缺氧小室对细胞进行缺氧处理8 h,然后给予不同时间的复氧处理。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞活力,采用微板法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)的含量,并进行细胞形态学观察。【结果】与正常对照组比较,接种密度9000、5000、3000个/孔的HT22细胞在复氧6 h时均明显损伤,细胞存活率降低,上清液中LDH活力及MDA含量升高,SOD活力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】HT22细胞OGD/R模型的最佳造模条件是缺氧8 h复氧6 h。     

自噬参与氧糖剥夺对N2a细胞的损伤

自噬在脑缺血中的作用目前没有统一定论。本文主要是通过建立氧糖剥夺(OGD)模型来模拟脑缺血的过程从而探讨自噬在脑缺血中的作用。在小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)经过OGD处理后,检测处理前后自噬相关蛋白、细胞活力以及乳酸脱氢酶释放率的改变。结果发现在OGD处理后,N2a细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin 1及溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)蛋白表达量均增高,而细胞活力明显下降;与OGD组相比,使用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬后,N2a细胞乳酸脱氢酶释放率下降。本研究表明在脑缺血过程中自噬被激活,但自噬的激活可能对神经细胞是起损伤性作用的。     

米诺环素对PC12细胞缺氧缺糖损伤后神经突生长的影响

目的：探讨米诺环素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）缺氧缺糖（OGD）损伤后细胞存活率及神经突生长的影响。方法分别缺氧缺糖2、4、6h及8h建立PC12细胞OGD损伤模型,将细胞分为正常对照组,OGD组和不同浓度的（0．1、1．0μM和10．0μM）米诺环素治疗组,在缺氧缺糖／复氧24h后,用CCK‐8法检测细胞存活率,免疫荧光法标记MAP‐2并在荧光显微镜下观察神经突的生长,Westernblot法检测各组GAP‐43蛋白的表达水平。结果与OGD组比较,米诺环素能显著提OGD后PC12细胞的存活率［（46．1±2．9）％vs．（77．0±2．5）％,P＜0．01］,促进PC12细胞OGD损伤后神经突的生长,同时上调轴突再生蛋白GAP‐43的表达［（0．34±0．04）vs．（2．11±0．10）,P＜0．01］。结论米诺环素能减轻OGD损伤所致PC12细胞的死亡,并促进细胞神经突的生长。     

沉默ANGPTL2对氧—葡萄糖剥夺/复氧诱导的HT22细胞氧化应激及凋亡的影响

目的 探究沉默血管生成素样蛋白2(angiopoietin-like protein 2,ANGPTL2)对氧-葡萄糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)诱导的神经元细胞(hippocampal neuronal cell line, HT22)细胞氧化应激及凋亡的影响。方法 通过OGD/R处理建立小鼠海马HT22细胞模型。通过实时荧光定量聚合酶链反应、细胞计数试剂盒、末端标记法及试剂盒检测ANGPTL2 mRNA的含量、细胞活力、细胞凋亡、细胞乳酸盐脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平及细胞氧化应激。通过蛋白质印迹检测各种蛋白质含量。结果 与对照组比较,模型组ANGPTL2 mRNA表达水平、LDH、凋亡率、ROS、MDA、核苷酸寡聚化结构域样受体家族3(nucleotide oligomeric domain-like receptor family 3,NLRP3)及凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein contain...     

氧糖剥夺条件下p75神经营养素受体在人神经母细胞瘤细胞中的表达和作用

目的 探讨氧糖剥夺（OGD）条件下p75神经营养素受体（p75NTR）在人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）中的表达变化和作用。方法 SH-SY5Y细胞OGD模型的建立采用三气培养箱无糖无血清培养方法。模型成功建立后设立3组：无血清常规培养组（对照组）、OGD组和OGD+p75NTR竞争性阻断剂LM11A-31处理组（OGD+LM11A-31组）。在细胞培养12 h时用利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测3组细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）活力检测试剂盒测定LDH释放活力,流式细胞术检测凋亡细胞比例,蛋白质印迹法检测p75NTR的蛋白表达。结果 成功构建SH-SY5Y细胞OGD模型。细胞培养12 h时,对照组、OGD组和OGD+LM11A-31组细胞存活率分别为（94.80±4.06）%、（50.34±5.55）%、（64.68±4.59）%,LDH释放活力分别为（46.93±5.49）U/L、（353.09±30.67）U/L和（282.20±25.60）U/L,凋亡细胞比例分别为（1.82±0.45）%、（14.98±2.59）%和（7.36±1.98）%,p75NTR蛋白相对表达量分别为0.06±0.01、0.41±0.02和0.19±0.03,差异均有统计学意义（F=67.94、142.10、36.28、221.20,P均<0.05）。多重比较显示,OGD组细胞存活率低于对照组,LDH释放活力高于对照组,凋亡细胞比例高于对照组,p75NTR蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义（Bonferroni法,P''均<0.05）;而LM11A-31处理后OGD+LM11A-31组细胞存活率高于OGD组,LDH释放活力低于OGD组,凋亡细胞比例低于OGD组,p75NTR蛋白表达低于OGD组,差异均有统计学意义（Bonferroni法,P''均<0.05）。结论 OGD条件下p75NTR在人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中表达增加,可能促进了神经损伤和凋亡。     

桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。 方法 采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）联合低糖培养基建立体外OGD致PC12细胞损伤模型;分别给予不同浓度的桃红四物汤含药血清,以MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化;检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;观察Hoechst33258染色后的细胞形态学变化;Western blot法检测给药后细胞Caspase-3蛋白的表达。 结果 与空白血清对照组相比,经OGD损伤后,细胞活力显著降低,桃红四物汤含药血清可减轻PC12细胞形态损伤,显著提高SOD活力,降低MDA和LDH含量,降低Caspase-3蛋白表达;Hoechst 33258染色结果表明桃红四物汤含药血清能降低OGD诱导的细胞凋亡。 结论 桃红四物汤含药血清对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与提高SOD活力和降低MDA含量有关。     

体外诱导SH-SY5Y细胞凋亡的氧糖剥离再灌注模型的建立及评价

目的：通过体外模拟缺血-再灌注损伤（I/R）诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型的建立与评价,探讨成功诱导神经元凋亡发生的可靠时间窗,为进一步阐明神经元凋亡机制奠定基础。方法：选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验组,实验组给予不同的OGD/R时间,通过MTT法计算细胞存活率,选定再灌注24 h存活率接近50％的OGD10h/R组和对照组细胞,通过光镜、荧光显微镜及电镜观察细胞形态学改变,采用试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平、胞浆内丙二醛（MDA）含量及细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果：MTT法结果显示,细胞存活率随OGD时间延长显著降低,OGD10h/R24h组为对照组的（44.91±1.21）%,不同OGD/R时间组间细胞存活率比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。倒置显微镜及HE染色显示,OGD10h/R组细胞密度减低,形态多样性,核固缩;AO/EB荧光染色可见凋亡小体形成,电镜显示核内异染色质凝集、趋边等凋亡的改变。实验组培养液内LDH水平及胞浆内MDA含量随再灌注时间延长而增加,LDH水平于再灌注24 h达峰值,MDA含量于再灌注24 h接近平台期,胞浆内SOD活性随再灌注时间延长呈现先降低后回升的趋势,与相同时间对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测细胞周期显示,随再灌注时间延长,OGD10h/R组G0/G1期细胞比例逐渐增加,24 h达峰值（74.09±2.62）%,其后有所降低,G2/M期细胞比例再灌注0 h时最高达（26.85±1.35）%,此后逐渐降低,24 h前均显著高于同时间对照组细胞,S期细胞比例逐渐降低,24 h最低达（19.2±1.58）%,此后逐渐升高,与同时间对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论：体外模拟I/R模型的OGD10h/R组能够成功诱导SH-SY5
Y细胞凋亡的发生,可进一步应用于凋亡机制的研究。     

低浓度凝血酶预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响.方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000 kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下细胞的功能状态和损伤情况.以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率,[3H]-谷氨酸摄取法测定As对谷氨酸(Glu)摄取能力的变化.结果:OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,OGD诱发细胞凋亡,降低As对Glu的摄取,上述指标与正常对照组相比均具有统计学意义(P＜0.01);而经低浓度TB预处理后,OGD损伤造成的LDH漏出率较低,细胞凋亡发生率降低,同时MTT值提高,As对Glu的摄取也增高,与OGD组比较有统计学意义(P＜0.05),其中最佳TB效应剂量为0.10 kU/L.结论:低浓度TB预处理的As,可增强在OGD环境下的损伤耐受能力,具有细胞保护作用.     

氧糖剥夺离体神经元缺血模型的建立

目的：探讨建立一种方便,实用的神经细胞离体氧,糖剥夺体外“缺血”模型,方法：新生大鼠皮层－基底节神经元原代分散培养14天后,将培养液分别换为含葡萄糖和不含葡萄糖的Earle氏液,不含葡萄糖组置入一个经改造的保鲜盒内（体积2000ml),密闭并通入混合气体（含95％N2,5%CO2)4h,采用LDH和MTT法检测神经元的损害。结果：氧,糖剥夺（OGD）4h组随着复氧时间的延长,神经元的活性逐渐下降,培养液中LDH释放量逐渐增加,与对照组比较有显著性差异,结论：建立了方便,实用的体外神经元“缺血”模型,为进一步研究缺血性神经元损害机制及有关药物的保护作用提供了一手段。