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1.
骨髓间充质干细胞诱导分化表达角蛋白的信号机制   总被引:3,自引:0,他引:3  
Bai XD  Fu XB  Zhang Q  Sun TZ 《中华医学杂志》2006,86(18):1269-1273
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)分化为表皮样细胞过程中,相关P38、ERK、Rho等信号机制.方法(1)采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离扩增大鼠骨髓MSC,免疫细胞化学及流式细胞仪进行表面标志的检测.(2)定向诱导中磷酸化P38和ERK表达:分为正常对照组、单纯诱导组、Rho阻断组;培养1、3、5、7 d后,流式细胞检测磷酸化P38和ERK.(3)SB203580和PD98059对MSC诱导为表皮样细胞的影响:分为对照组、单纯诱导组、p38阻断组(在诱导液基础上加入SB203580),ERK阻断组(在诱导液基础上加入PD98059),诱导7 d后分别采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测各组细胞细胞角蛋白CK5/8、CK19的阳性表达率.(4)Rho阻断剂HA1077对CK5/8、CK19的影响:设正常对照组、单纯诱导组、RHO阻断组.取培养7 d的细胞,流式细胞检测CK5/8、CK19表达.结果(1)大鼠骨髓MSC在体外扩增后,免疫细胞化学及流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44表达阳性,CD34、CD45表达阴性.(2)磷酸化P38正常对照水平为0.02%.在诱导组1d(0.01%)、3 d(0.01%)变化不大,诱导5 d为0.04%,明显升高,7 d时(0.01%)复接近诱导前水平;磷酸化ERK对照水平为4.23%,诱导后3 d(0.39%)、5 d(0.40%)均呈下降趋势,7 d时(5.10%)恢复至诱导前水平.RHO阻断组:磷酸化P38水平在1、3、5和7 d,分别为1.11%、71.19%、0.25%、6.86%,均升高;ERK磷酸化在1、3、5和7 d,分别为6.17%、4.13%、3.97%和0.41%,其中7 d低于对照水平.(3)SB203580和PD98059对MSC诱导为表皮样细胞的影响:流式细胞显示诱导7 d后CK5/8、CK19阳性率分别为3.01%、6.47%;p38阻断组CK5/8、CK19阳性表达率分别为1.43%、5.41%,低于诱导组.ERK阻断组CK5/8、CK19阳性表达率分别为5.54%、7.56%.(4)HA1077对CK5/8、CK19的影响:单纯诱导组CK5/8阳性率为1.81%,CK19为10.19%;加入HA1077后,CK5/8为21.65%,CK19为39.41%,升高显著.结论P38途径在促进MSC分化为表皮样细胞过程中可能起积极作用,上游信号Rho阻断后可能增加P38途径途径激活,一定程度上促进MSC分化为表皮样细胞.  相似文献   

2.
目的:探讨自制流式细胞仪专用溶血素对血液红细胞的溶解效果和对淋巴细胞、单核细胞和粒细胞表面标志的影响。方法:应用流式细胞术对40份K3 EDTA抗凝外周血分别用自制流式细胞仪专用溶血素与FACS溶血素处理后,检测其对血液红细胞的溶解效果及对淋巴细胞、单核细胞和粒细胞表面特异性抗原CD14+、CD45+表达率的影响。结果:自制流式细胞仪专用溶血素和FACS溶血素,均能使红细胞彻底溶解,且不破坏白细胞,在流式细胞仪获取的前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)散点图中,可见清晰的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞群,其CD14+表达率分别为(1.01±0.24)%和(1.00±0.23)%、(92.80±1.98)%和(92.81±1.94)%、(91.16±3.68)%和(91.22±3.76)%;CD45+表达率分别为(98.94±0.71)%和(98.90±0.72)%、(95.15±2.73)%和(95.11±2.76)%、(99.39±0.48)%和(99.41±0.47)%,使用两种溶血素检测得到的白细胞表面标志具有很好的一致性,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:自制流式细胞仪专用溶血素具有很好的红细胞溶解效果,但不破坏白细胞,且对淋巴细胞、单核细胞和粒细胞群表面抗原的表达无明显影响作用。  相似文献   

3.
目的研究新生儿CD4+T细胞在细菌感染时的作用及作为临床应用感染性证据的可能性.方法应用流式细胞仪和单克隆抗体,分别测定19例正常足月新生儿和17例细菌感染足月新生儿治疗前后其CD4+T细胞表面的白介素-2受体α链(CD25)、β链(CD122)、γ链(CD132)和CD154的表达情况.结果 CD25、CD122、CD132和CD154在正常新生儿CD4+T细胞上的表达较低,分别为(3.84±3.61)%、(0.74±0.53)%、(12.70±8.54)%和(1.08±1.04)%,其在细菌感染组新生儿CD4+T细胞上的表达分别为(9.89±9.66)%、(5.79±11.14)%、(21.78±11.34)%和(6.69±7.87)%,较正常新生儿组明显升高(P<0.05),且治疗前后均无显著变化(P>0.05).结论正常新生儿CD4+T细胞的CD25、CD122、CD132和CD154表达较低,在细菌感染时表达上调,可作为新生儿细菌感染诊断的参考指标.  相似文献   

4.
目的 探讨大鼠脂肪干细胞(ADSC)的培养及诱导分化为成肌细胞的方法 .方法 取SD大鼠脂肪组织,酶消化法分离、培养ADSC,免疫荧光和流式细胞仪检测相关表面抗原CD90、CD105和CD34的表达.取培养至第2代处于对数生长期细胞,分别用含5-氮杂胞苷(5-aza)的诱导培养液(诱导组)和基础培养液(对照组)进行培养.诱导时间为7、14、21、28和35 d,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化,免疫荧光和流式细胞仪检测成肌细胞特异性抗原desmin和myosin的表达.结果 成功从大鼠脂肪组织分离、培养出ADSC,相关表面抗原表达检测证实其干细胞特性.诱导组细胞诱导28 d后呈现成肌细胞特有的"漩涡"样生长形态,单个细胞表现出多核化;免疫荧光和流式细胞仪检测显示,desmin和myosin的表达率在诱导28 d时达最高,分别为52.57%和50.04%,而诱导前和对照组细胞均呈阴性表达.结论 成功从大鼠脂肪组织分离、培养ADSC,含5-aza的诱导培养液可将其诱导分化为成肌细胞,诱导 28 d成肌细胞特异性抗原表达率最高.  相似文献   

5.
目的 探讨大鼠脂肪干细胞(ADSC)的培养及诱导分化为成肌细胞的方法 .方法 取SD大鼠脂肪组织,酶消化法分离、培养ADSC,免疫荧光和流式细胞仪检测相关表面抗原CD90、CD105和CD34的表达.取培养至第2代处于对数生长期细胞,分别用含5-氮杂胞苷(5-aza)的诱导培养液(诱导组)和基础培养液(对照组)进行培养.诱导时间为7、14、21、28和35 d,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化,免疫荧光和流式细胞仪检测成肌细胞特异性抗原desmin和myosin的表达.结果 成功从大鼠脂肪组织分离、培养出ADSC,相关表面抗原表达检测证实其干细胞特性.诱导组细胞诱导28 d后呈现成肌细胞特有的"漩涡"样生长形态,单个细胞表现出多核化;免疫荧光和流式细胞仪检测显示,desmin和myosin的表达率在诱导28 d时达最高,分别为52.57%和50.04%,而诱导前和对照组细胞均呈阴性表达.结论 成功从大鼠脂肪组织分离、培养ADSC,含5-aza的诱导培养液可将其诱导分化为成肌细胞,诱导 28 d成肌细胞特异性抗原表达率最高.  相似文献   

6.
目的 探讨放射治疗对肺癌患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的影响。 方法 选择丽水市中心医院接受放射治疗的肺癌患者90例进行研究,收集患者放射剂量、放射靶体积等临床资料,流式细胞仪测定外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。 结果 放射治疗后,CD3+含量[(61.48±1.86)%]和放射治疗前[(61.12±1.83)%]比较差异无统计学意义(P>0.05),CD4+、CD4+/CD8+含量[(26.85±1.28)%、0.71±0.06]均低于治疗前[(36.24±1.25)%、1.22±0.08](P<0.05),CD8+含量[(37.92±1.66)%]高于治疗前[(29.79±1.12)%](P<0.05);放射治疗后,CD3+异常比例(32.2%)和放射治疗前(34.4%)比较差异无统计学意义(P>0.05),CD4+、CD4+/CD8+异常比例(85.6%、67.8%)均高于治疗前[(53.3%、31.1%)](P<0.05);放射治疗剂量 ≥ 60 Gy患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+[(63.43±1.85)%、(27.23±1.28)%、(37.53±1.17)%、0.72±0.07]与放射剂量<60 Gy[(61.12±1.77)%、(26.77±1.31)%、(38.08±1.36)%、0.69±0.05]比较差异无统计学意义(P>0.05);放射治疗靶体积>440 cm3患者CD3+含量(61.88±2.23)%和靶体积 ≤ 440 cm3者(59.99±2.17)%比较差异无统计学意义(P>0.05),CD4+、CD4+/CD8+[(24.37±1.68)%、0.68±0.06]均低于靶体积 ≤ 440 cm3者[(29.86±1.59)%、0.89±0.05](P<0.05),CD8+含量[(41.46±2.59)%]高于靶体积 ≤ 440 cm3者[(34.27±2.13)%](P<0.05)。 结论 肺癌患者放射治疗前存在免疫功能低下,放射治疗后免疫功能进一步下降,肺癌患者的免疫功能和放射靶体积有关,靶体积越大免疫功能越差。   相似文献   

7.
目的:用无血清培养基方法从人食管癌细胞株KYSE-150?TE-1中分离富含肿瘤干细胞的细胞球并鉴定其生物学特性?方法:运用无血清培养基培养KYSE-150?TE-1细胞,观察细胞球的生成及在有血清培养基中的分化情况,利用MTT法以及Transwell小室法研究食管癌细胞球的增殖情况和侵袭能力,流式细胞仪检测分子标志CD44?CD271的表达?结果:KYSE-150?TE-1细胞在无血清培养基培养条件下可以获得可稳定传代的细胞球,细胞球细胞的增殖能力和侵袭能力均高于其亲本细胞;无血清培养基培养下KYSE-150细胞球中CD44+?CD271+?CD44+CD271+细胞分别为(64.92 ± 11.04)%?(28.27 ± 6.79)%?(24.07 ± 5.39)%,均显著高于亲本细胞[(37.04 ± 6.30)%?(3.69 ± 0.49)%?(1.64 ± 0.11)%,P均< 0.05]?TE-1细胞球中CD44+?CD271+?CD44+CD271+细胞占(6.41 ± 0.87)%?(2.58 ± 0.17)%?(0.27 ± 0.53)%,均显著高于亲本细胞[(1.87 ± 0.18)%?(0.44 ± 0.10)%?(0.09 ± 0.02)%,P均< 0.05]?结论:应用无血清培养基可以从KYSE-150?TE-1细胞系中分离出具有干细胞特性的食管癌细胞球,CD44?CD271分子可能是食管癌干细胞的标志?  相似文献   

8.
目的评估ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法检测外周血及其采集物中CD34+细胞绝对计数的优缺点。方法采用流式细胞仪ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法,对23份动员外周血及50份采集物行CD34+细胞绝对计数,并对2种方法所得的结果进行Spearman相关分析和配对t检验。结果Spearman相关分析结果:ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法所得的CD34+细胞绝对数、CD34+细胞百分比高度相关(r均>0.9,P均<0.001)。配对t检验分析结果:ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法检测动员外周血的CD34+细胞绝对数分别为(42.7±7.5)μL-1和(52.1±7.2)μL-1(P<0.01),CD34+细胞百分比分别为(0.26±0.07)%和(0.13±0.05)%(P<0.01);检测采集物中CD34+细胞绝对数分别为(3 515.2±684.7)μL-1和(3 923.8±711.1)μL-1(P<0.01),CD34+细胞百分比分别为(0.79±0.18)%和(0.83±0.17)%(P=0.056)。ProCOUNT方法所得的结果均低于单平台ISHAGE方法所得的结果。结论ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法检测CD34+细胞绝对计数和百分比所得结果具有高度相关性,但前者所得结果要低于后者。  相似文献   

9.
目的:探讨Lewis肺癌模型小鼠脾脏组织中CD4+CD25+调节性T细胞和TGF-β1的表达水平与肺癌发生的关系。方法:采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞的比例,ELISA法检测TGF-β1的表达水平。结果:荷瘤小鼠CD4+CD25+调节性T细胞表达水平为(21.91±12.34)%,高于对照组的(14.39±4.51)%(P<0.05),荷瘤小鼠TGF-β1表达水平(3.39±1.62)μg/L,高于对照组的(2.47±0.35)μg/L(P<0.05)。结论:荷瘤小鼠CD4+CD25+调节性T细胞比例和TGF-β1表达水平增高,提示二者可能参与Lewis肺癌的发生。  相似文献   

10.
目的:建立一种调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)体外高效扩增技术。方法:流式细胞仪分选健康人外周血CD4+CD25+CD127low T细胞,CD3/CD28磁珠刺激联合高浓度白介素?2(interleukin 2,IL?2)培养14 d。通过细胞计数评估Tregs体外扩增能力,采用流式细胞仪鉴定扩增Tregs的表型,采用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)实验检测Tregs的抑制功能。结果:CD4+CD25+CD127low T细胞培养14 d后增殖(755.5 ± 213.5)倍。流式细胞鉴定扩增后的细胞:CD4分子表达为(98.3 ± 1.04)%,CD19分子表达为(0.039 ± 0.021)%,CD8分子表达为(0.443 ± 0.239)%,CD25分子表达为(97.6 ± 1.35)%。FOXP3分子表达为(87.7 ± 5.5)%,Helios分子表达为(73.3 ± 2.9)%。MLR实验显示:Tregs以不同比例与外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)共培养,当Tregs∶PBMC为1∶1时,PBMC增殖抑制率最高,为(84.39 ± 1.98)%。结论:成功建立一种体外高效扩增Tregs技术。扩增后细胞保留原有的细胞表型,并具备免疫抑制功能,为临床运用Tregs治疗自身免疫性疾病、抑制移植排斥反应提供了广阔的应用前景。  相似文献   

11.
目的 研究壳聚糖挂膜修饰聚丙烯网片的技术参数及其与兔脂肪源性间充质细胞(ADSCs)的黏附性.方法 分别称取1、1.25和1.5g壳聚糖加2%的乙酸溶液、5%的戊二醛和50%的正庚烷溶解后,得到质量分数分别为2.0%、2.5%和3.0%的壳聚精铸膜液.将聚丙烯网片在壳聚糖铸膜液中反复浸泡、晾干后得到壳聚糖挂膜修饰的聚丙烯网片.将兔ADSCs接种于壳聚糖挂膜的聚丙烯网片上,培养24 h后观察细胞与材料的黏附性.结果 三种浓度的壳聚糖铸膜液挂膜修饰的聚丙烯网片柔软性均较挂膜前下降,壳聚糖铸膜液浓度越高,聚丙烯网片柔软性越低,而且3.0%铸膜液修饰的聚丙烯网片出现涂敷效果不均匀的现象.兔ADSCs在壳聚糖挂膜修饰的聚丙烯网片材料上生长良好.兔ADSCs与未挂膜的聚丙烯网片共培养24h后,表面未见细胞生长.结论 2.5%壳聚糖铸膜液为挂膜修饰聚丙烯网片的理想浓度.壳聚糖挂膜修饰的聚丙烯网片与兔ADSCs有良好的黏附性.  相似文献   

12.
目的:观察不同浓度同种异体富血小板血浆(PRP)提取液对脂肪干细胞(ADSCs)体外增殖的影响,为将同种异体PRP提取液应用于创面修复提供实验依据。方法:取SD大鼠腹股沟脂肪组织进行原代及传代培养;通过将获得的细胞向脂肪、骨和神经方向诱导分化,鉴定其干细胞特性;三次离心法制备同种异体PRP提取液,加入DMEM/F12配制成6.67%、3.35%和1.67%的培养液;将第3代ADSCs分为4组:实验组(A、B和C组)分别以含体积分数为6.67%、3.35%和1.67%PRP提取液的培养液培养,对照组(D组)ADSCs用仅含10%胎牛血清、DMEM/F12的基础培养液培养;在培养24和48 h后采用MTT法观察ADSCs生长状态。结果:原代培养成功获得贴壁生长细胞,呈成纤维细胞样,并成功向脂肪细胞、骨细胞和神经细胞方向诱导分化,即具有多向分化潜能,证明所培养的细胞为ADSCs;酶标仪测定,A、B、C、D组在培养24 h后吸光度(A)值分别为0.434 3±0.084 3、0.351 6±0.076 6、0.258 1±0.060 0和0.259 2±0.073 6,在培养48 h后A值分别为 1.016 8±0.443 6、0.741 7±0.109 7、0.367 8±0.034 2和0.395 7±0.106 2; A组和B组的A值均高于C组和D组(均P<0.05);A 组的A值高于B组(P<0.05);C组A值与D组比较差异无统计学意义(P>0.05)。A和B组细胞增殖率明显升高,而C组细胞增殖率呈负增长。结论:适当浓度的同种异体PRP提取液可显著促进ADSCs体外增殖,有望应用于创面修复。  相似文献   

13.
目的:分离培养脂肪干细胞(ADSCs)以探讨其分泌因子对HaCaT细胞的生物学作用.方法:从人腹部脂肪组织中分离并培养ADSCs3d后,ELISA法测定ADSCs分泌血管内皮生长因子(VEGF),肝细胞生长因子(HGF)含量;收集ADSCs培养液(ADSC-CM)作用于HaCaT细胞株.采用MTT法测定HaCaT细胞的增殖;AnexinV/PI双染色法测定HaCaT细胞的凋亡情况;体外细胞划痕法测定其迁移能力.结果:培养获得ADSCs细胞3d后,培养液中VEGF、HGF含量分别为(287±47),(577±85)ng/L.MTT实验30%ADSC-CM组、50%ADSC-CM组的A490nm值分别高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01).实验组HaCaT细胞凋亡率明显低于对照组(P〈0.05).与对照组相比较,实验组HaCaT细胞迁移距离36,48h时间点显著增大(P〈0.05或P〈0.01).结论:ADSCs能分泌细胞因子且对HaCaT细胞具有促增殖、迁移和抑制凋亡作用.  相似文献   

14.
Some studies indicate that adipose derived stem cells(ADSCs)can differentiate into adipogenic,chondrogenic,myogenic,and osteogenic cells in vitro.However,whether ADSCs can be induced to differentiate into neural cells in vitro has not been clearly demonstrated.In this study,the ADSCs isolated from the murine adipose tissue were cultured and transfected with the EGFP gene,and then the cells were induced for neural differentiation.The morphology of those ADSCs began to change within two days which developed i...  相似文献   

15.
This study aimed to induce the differentiation of isolated and purified adipose-derived stromal cells(ADSCs) into myoblasts,which may provide a new strategy for tissue engineering in patients with stress urinary incontinence(SUI).ADSCs,isolated and cultured ex vivo,were identified by flow cytometry and induced to differentiate into myoblasts in the presence of an induction solution consisting of DMEM supplemented with 5-azacytidine(5-aza),5% FBS,and 5% horse serum.Cellular morphology was observed under an i...  相似文献   

16.
目的 研究体外培养成年大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)并诱导分化为施万细胞样细胞的潜能.方法 分离、培养成年SD大鼠ADSCs,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原CD44,CD49d和CDl06.传6~8代的ADSCs接种在多聚赖氨酸铺板的培养板内.用含5 ng/nd血小板源性生长因子,10 ng/ml牛碱性成纤维细胞生长因子,14 μmol/L Forskolin,200ng/ml Heregnlin及10%FBS的DMEM/F12培养基诱导分化12 d,免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物GFAP,S-100和P75.结果 分离纯化的ADSCs呈CD44和CD49d阳性,而CD106表达为阴性;诱导后的细胞呈梭形,并表达施万细胞特异性标志蛋白-GFAP,S-100和P75.结论 从大鼠脂肪组织能获得具有增殖和分化潜能的干细胞,这些细胞在特定条件下可定向诱导分化为施万细胞样细胞.  相似文献   

17.
脂肪干细胞HLA分子表达与体外抑制淋巴细胞增殖的实验研究   总被引:14,自引:0,他引:14  
Cui L  Yin S  Yang P  Liu B  Zhang Y  Liu W  Cao YL 《中华医学杂志》2005,85(27):1890-1894
目的研究脂肪干细胞(adiposederivedstemcells,ADSCs)表面免疫分子的表达以及体外调节淋巴细胞反应的功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源。方法从临床脂肪抽吸术丢弃脂肪组织中分离获取脂肪干细胞(共3例),体外培养至第2代,流式细胞仪检测免疫分子HLAI、HLAII的表达。1×105个/孔ADSC细胞刺激异体淋巴细胞,观察细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2μg/ml)刺激淋巴细胞后,分别以(1×102、1×103、1×104、1×105)细胞/孔数量的异体脂肪干细胞加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖情况;另一组在刺激同时加入白介素2(IL2,0.5ng/ml),检测脂肪干细胞抑制作用的逆转。分别以1×102~5细胞/孔数量的“第三者”脂肪干细胞或经IFNγ作用后脂肪干细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果脂肪干细胞表达HLAI类分子,但未检测到HLAII类分子阳性表达。人IFNγ刺激48h后,HLAI表达未见明显增高,HLAII类分子表达明显增高。异体或经IFNγ作用的脂肪干细胞均未能刺激淋巴细胞体外增殖。脂肪干细胞可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖,IL2可逆转脂肪干细胞的抑制作用。脂肪干细胞可明显抑制双相混合淋巴细胞反应,抑制作用呈脂肪干细胞细胞数量依赖性;经IFNγ作用后抑制作用未见明显减弱。结论ADSC可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程或细胞治疗中同种异体细胞来源。  相似文献   

18.
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)迁移能力的影响,为勃起功能障碍的治疗建立实验基础。方法 采用酶消化法分离提取SD大鼠皮下脂肪干细胞,以含有10%的胎牛血清的DMEM培养基培养。通过流式细胞仪检测ADSCs表面标志物(CD34、CD44、CD45)的表达情况。采用终浓度为20ng/ml IGF-1预处理ADSCs,观察IGF-1对ADSCs迁移能力以及CXCR4蛋白的表达情况。结果 流式细胞术显示ADSCs的表型分子CD44呈阳性,CD34、CD45呈阴性。IGF-1可上调CXCR4的表达,并且促进 ADSCs向SDF-1迁移。结论 本实验成功分离培养ADSCs,IGF-1能够提高ADSCs表面CXCR4蛋白的表达,从而促进ADSCs迁移,并为下一步将IGF-1预处理的ADSCs应用于大鼠体内勃起功能障碍的治疗提供基础。  相似文献   

19.
Adipose tissue-derived stromal cells express neuronal phenotypes   总被引:22,自引:0,他引:22  
Background Adipose tissue-derived stromal cell (ADSCs) can be greatly expanded in vitro, and induced to differentiate into multiple mesenchymal cell types, including osteogenic, chondrogenic, myogenic, and adipogenic cells. This study was designed to investigate the possibility of ADSCs differentiating into neurons. Methods Adipose tissue from rats was digested with collagenase, and adherent stromal cells were cultured. A medium containing a low concentration of fetal bovine serum was adopted to induce the cells to differentiate. ADSCs were identified by immunocytochemistry, and semi-quantitative RT-PCR was applied to detect mRNA expression of neurofilament 1 (NF1), nestin, and neuron-specific enolase (NSE). Results Nestin-positive cells were found occasionally among ADSCs. ADSCs were found to express NSE mRNA and nestin mRNA, but not NF1 mRNA. ADSCs could differentiate into neuron-like cells in a medium composed of a low concentration of fetal bovine serum, and these differentiated cells displayed complicated neuron-like morphologies. Conclusions The data support the hypothesis that adipose tissue contains stem cells capable of differentiating into neurons. These stem cells can overcome their mesenchymal commitment, and may represent an alternative autologous stem cell source for CNS cell transplantation.  相似文献   

20.
 目的  探讨兔脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为种子细胞复合新型聚羟基乙酸(polylactic-co-glycolic acid,PLGA)/壳聚糖(chitosan,CS)支架材料的生物相容性,为进一步构建组织工程化脂肪组织提供实验依据。方法  取雄性新西兰大白兔腹股沟脂肪组织,Ⅰ型胶原酶消化分离出ADSCs进行培养,贴壁细胞至3~5代,评价其多向分化能力。将干细胞收集重悬后,以l×107/mL的密度接种于多孔PLGA/CS支架,形成细胞 支架材料复合物。培养7天后,扫描电子显微镜观察细胞在支架材料上的黏附生长和基质分泌情况,评价细胞与支架材料的生物相容性;Dil荧光标记检测细胞在支架材料上的分布;Hochest 33258检测细胞在支架上的生长情况。接种1和7天后,分别对细胞 材料复合物行Annexin V/PI双染色法检测材料对细胞的毒性作用。用成脂诱导条件培养基诱导分化ADSCs及ADSCs支架材料复合物,7天后,尼罗红荧光染色液检测ADSCs在不同环境下的成脂分化能力。结果  原代培养的ADSCs呈成纤维细胞样外观,在相应诱导条件下能够分化为脂肪细胞和骨细胞。细胞接种于PLGA/CS支架材料上第8天分裂增殖达到高峰,扫描电子显微镜下提示ADSCs在支架表面贴附生长良好,并向孔隙内壁充分延伸,细胞周围形成丰富的基质成分。活死双染结合共聚焦显微镜显示材料对细胞活性无影响,尼罗红染色可见成脂诱导后的ADSCs细胞质内有红色脂滴颗粒形成。结论  多孔PLGA/CS支架与兔ADSCs具有良好的生物相容性,可作为构建组织工程脂肪组织的支架材料。  相似文献   

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