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相似文献
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1.
目的 探讨冷冻保护剂中不同蔗糖浓度对人成熟卵母细胞冻融的影响.方法 根据冷冻液中蔗糖浓度的不同,将收集到的人成熟卵母细胞分为0.1 mol/L组、0.2 mol/L组、0.3 mol/L组,分别采用程序化慢冻-快融法,比较三组人成熟卵母细胞复苏后的存活情况及其行单精子卵泡浆内注射(ICSI)后受精率、卵裂率和优质胚胎形成率.结果 0.1 mol/L组、0.2 mol/L组、0.3 mol/L组解冻后的存活率分别为23.1%,40.8%,59.4%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05);而受精率、卵裂率、优质胚胎形成率三组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 提高蔗糖浓度能明显提高人成熟卵母细胞解冻的存活率.  相似文献   

2.
目的 探讨蔗糖浓度对GV期和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体质量的影响.方法 运用纺锤丝观测仪(PolScope)、免疫荧光标记技术和激光共聚焦显微镜.对不同蔗糖浓度(0.1-0.6 mol/L)下GV期和MⅡ期冻融卵母细胞体外成熟后的纺锤体分别进行检测,以未冷冻处理的卵母细胞作为对照组.结果 与对照组比较,冻融组卵母细胞纺锤体的排列明显受到影响.蔗糖浓度为0.3 mol/L时,GV期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P<0.05);蔗糖浓度为0.5 moL/L时,MⅡ期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P<0.05);当蔗糖浓度继续升高时,冻融组GV期和MⅡ期卵母细胞纺锤体的正常率则显著下降(P<0.05).冻融组卵母细胞纺锤体的正常率,MⅡ期显著高于GV期(P<0.05).结论 一定浓度范围的蔗糖可提高冻融卵母细胞纺锤体正常率;MⅡ期冻融卵母细胞的渗透耐受性及其在渗透耐受范围内的冷冻效率均高于GV期卵母细胞.  相似文献   

3.
目的 探讨不同的植冰温度和冷冻保护剂中蔗糖浓度对小鼠MⅡ期卵子冷冻复苏后形态结构及发育潜能的影响.方法 共收集小鼠MⅡ期卵子372个,随机分为A、B、C三组冷冻.A组冷冻保护液含0.1 mol/L蔗糖,在-6℃植冰;B组冷冻保护液中蔗糖浓度同A组,在-7℃植冰;C组冷冻保护剂中蔗糖浓度为0.2 mol/L,在-7℃植冰.分别对冷冻复苏后的卵子进行质量评估、受精及胚胎培养,观察并比较其受精及卵裂情况.结果 MⅡ期卵子复苏后存活率以及优质卵率A组较B组好,但差异无统计学意义(P>0.05);A组卵子冻融后的受精卵卵裂率(82.35%)高于B组(38.46%),其差异有统计学意义(P<0.05);而受精率和优质胚胎率虽然A组高于B组,但无统计学差异(P>0.05).C组的卵子冻融后存活率(82.61%)、优质卵率(78.26%)、受精卵卵裂率(76.92%)均分别高于B组(68.24%,52.94%,38.46%),其差异有统计学意义(P<0.05);受精率和优质胚胎率C组与B组相比较无统计学差异(P>0.05). 结论 植冰温度升高不影响MⅡ期卵子的冻融效果,而且可能有助于保护卵子的发育潜能;在冷冻保护液中,0.2mol/L蔗糖浓度比0.1mol/L更适合于MⅡ期卵子的冷冻.  相似文献   

4.
目的 探讨蔗糖浓度对GV期和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体质量的影响.方法 运用纺锤丝观测仪(PolScope)、免疫荧光标记技术和激光共聚焦显微镜.对不同蔗糖浓度(0.1-0.6 mol/L)下GV期和MⅡ期冻融卵母细胞体外成熟后的纺锤体分别进行检测,以未冷冻处理的卵母细胞作为对照组.结果 与对照组比较,冻融组卵母细胞纺锤体的排列明显受到影响.蔗糖浓度为0.3 mol/L时,GV期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P<0.05);蔗糖浓度为0.5 moL/L时,MⅡ期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P<0.05);当蔗糖浓度继续升高时,冻融组GV期和MⅡ期卵母细胞纺锤体的正常率则显著下降(P<0.05).冻融组卵母细胞纺锤体的正常率,MⅡ期显著高于GV期(P<0.05).结论 一定浓度范围的蔗糖可提高冻融卵母细胞纺锤体正常率;MⅡ期冻融卵母细胞的渗透耐受性及其在渗透耐受范围内的冷冻效率均高于GV期卵母细胞.  相似文献   

5.
目的:探讨玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法对人未成熟卵母细胞的存活及胚胎发育潜能的影响。方法:体外受精-胚胎移植中获得的251个MⅠ期卵母细胞随机分3组,第1组94个先玻璃化冷冻保存,第2组63个先慢速程序冷冻保存,两组冻融后的未成熟卵母细胞再进行IVM,用ICSI技术对成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。第3组94个MⅠ期卵母细胞先进行IVM,再进行玻璃化冷冻保存,与第1组先玻璃化冷冻保存再IVM的顺序不同,冻融后同样用ICSI技术对获得的成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。结果:玻璃化冻融组复苏存活率、体外成熟率、受精率、及卵裂率均高于慢速程序冻融组(P均<0.05);先玻璃化冷冻再IVM与先IVM再玻璃化冷冻的复苏存活率、体外成熟率、可用卵比率、受精率及卵裂率无统计学意义(P均>0.05)。结论:玻璃化冻融人未成熟卵母细胞能获得更好的冷冻保存效果;玻璃化冷冻与IVM的顺序不影响未成熟卵母细胞的利用。  相似文献   

6.
目的:观察细胞松弛素B (Cytochalasin B,CB)预处理对小鼠卵母细胞玻璃化冻融后发育潜能的影响.方法:用浓度为0(对照)、5、10、20、40 μg/ml的CB分别预处理小鼠成熟卵母细胞后玻璃化冷冻,解冻后进行体外受精,观察卵母细胞的复苏率、受精率、6~8 cell胚胎形成率.结果:CB 20、40μg/...  相似文献   

7.
宋文妍  孙莹璞 《广东医学》2005,26(10):1312-1314
冻存人类未成熟卵母细胞体外成熟有广阔的应用前景。经过20多年的探索,研究主要集中在小鼠、牛等哺乳动物的未成熟卵母细胞,冷冻方法也不尽相同,解冻后卵母细胞的存活率及胚胎发育潜力低。虽然经不同冷冻方法保存的人未成熟卵母细胞出生的婴儿国外已有个别报道,但是获得妊娠的机率还非常有限。本文将从人类未成熟卵母细胞的冻存优势、冷冻方法及影响因素等方面综述如下。1 冻存未成熟卵母细胞的研究现状1977年,Whittingham首次冻存小鼠成熟卵母细胞获得成功,揭开了卵母细胞冷冻保存的序幕。1986年Chem采用慢速冷冻-快速复温法首次冻存人成熟卵母细胞成功并获得妊娠26周胎儿。随后对卵母细胞冻存进行大量研究,  相似文献   

8.
小鼠卵母细胞的OPS法玻璃化冷冻保存技术   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的以小鼠卵母细胞为模型,利用开放式拉长细管(open pulled straw,OPS)法研究在不同条件下冷冻、解冻对其发育能力的影响,为家畜、濒危动物乃至人类探索一种简易、高效的卵母细胞冷冻保存提供理论与技术参考。方法在室温(25℃±0.5℃)条件下,以乙二醇(EG)、DMSO为主体抗冻保护剂配制成的玻璃化溶液(EFS、EDFS),采用OPS法对卵母细胞进行玻璃化冷冻保存。实验一:操作台温度分别为25℃±0.5℃和37℃±0.5℃时,卵母细胞在10%EG 10%DMSO或10%EG溶液中预处理30 s,移入EDFS或EFS中平衡15 s~45 s进行冷冻保存;实验二:操作台为37℃±0.5℃条件下,采用三种方法(卵母细胞在A:0.5 mol/L和0.3 mol/L的蔗糖中分别处理2 min和5 min;B:0.3 mol/L和0.15 mol/L的蔗糖中分别处理5 min和2 min;C:0.5 mol/L的蔗糖处理5 min)对EDFS30和EDFS40冷冻保存的卵母细胞进行解冻;实验三:解冻后的卵母细胞在SrCl2溶液中进行孤雌激活。结果与结论实验一中卵母细胞解冻后的形态正常率分别高达92.1%(25℃±0.5℃)和92.5%(37℃±0.5℃),均与对照组(98.9%)无显著性差异(P>0.05);实验二中卵母细胞解冻以C法效果最佳(形态正常率分别为92.5%和67.5%);实验三中解冻后在mCZB中培养0.5 h的卵母细胞激活效果优于未培养组(卵裂率和囊胚发育率分别为80.0%vs.57.7%;18.2%vs.0),均有显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);而培养组与新鲜对照组卵母细胞激活后卵裂率和桑椹胚发育率与对照组(80.0%vs.77.8%;52.8%vs.61.9%)均无显著性差异(P>0.05)。  相似文献   

9.
目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的最佳冷冻载体及冷冻方法。方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟MⅡ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组。冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液。观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况。结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001)。冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001)。结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值。  相似文献   

10.
〕叨501慢速冷冻对人成熟卵与未成熟卵发育潜能的影晌尸李梅…//实用妇产科杂志一2003,19(3)一147一149 探讨慢速冷冻对人成熟卵子和未成熟卵子发育潜能的影响可为建立人类卵子库提供实验依据。故作者行宫腔配子移植和多囊卵巢综合征未成熟卵穿刺时收集了不同成熟期卵子105个,其中成熟卵69个,未成熟卵36个,经慢冻一速融后进行形态学及存活力观察和体外成熟、受精和胚胎培养等观察。发现:经慢冻后各个成熟期卵子形态均发生了改变,如胞浆颗粒变粗等;冷冻后的未成熟卵约有76 .67%体外成熟,与新鲜未成熟卵的体外成熟率(83%)相当;没有发现成熟与…  相似文献   

11.
Objective To investigate the viability and maturation of frozen-thawed human immature oocytes exposed to different temperature of vitrification and warming solutions. Methods The immature oocytes in germinal vesicle (GV) and matephase I (MI ) stages were collected from our ICSI patients and exposed to different temperature of vitrification and warming solutions before frozen in the freezing/thawing procedures. The different temperature groups were as follows: Group A, equilibration solution at 37℃, vitrification solution at room temperature, warming solution at 37℃; Group B, both vitrification and warming solution at room temperature; Group C, both vitrification and warming solutions at 37℃; Group D, the frozen-thawed oocytes and the fresh oocytes were cultured for in vitro maturation. The survival rate and maturation rate were compared among groups. The oocytes were examined using immunofluorescent stainingand confocal microscopy to check the spindle configuration and chromosome arrangement. Results The survival rates and MII rates of GV stage oocytes in groups A, B, C were 100%(15/15), 81.3%(13/16), 68.8%(11/16) and 33.3%(2/6), 83.3%(10/12),72.7%(8/11), respectively. The survival rate of group C was significantly lower than that of the control (P<0.05). The normal spindle and chromosome configuration were only observed in group B, with the rates of 20% (2/20) and 10% (1/10), respectively. The survival rates of MI stage in groups A, B, C were 71.4%(10/14), 100% (12/12) and 83.3%(10/12), no significantly difference from that of the contro1(100%, 14/14). The MII rates of MI stage in groups A, B and C were 0%(0/14), 66.7%(8/12) and 80% (8/10), respectively. The MⅡ rate in group A was significantly lower than that in other groups (P<0.01). Only one oocyte in group C was found with normal spindle and chromosome configurations. Conclusion The appropriate operation temperature of vitrification and warming solutions can improve the outcomes of the vitrified-thawed human immature oocytes.  相似文献   

12.
玻璃化冷冻技术已逐渐成为辅助生育技术中重要的应用技术之一,在保存未成熟卵细胞、成熟卵细胞、原核期胚胎、卵裂早期胚胎及囊胚方面均取得成功,并相继有临床妊娠分娩的报道。本文总结了玻璃化冷冻技术在保存人类不同发育阶段卵细胞和胚胎方面的应用。  相似文献   

13.
冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取   总被引:2,自引:0,他引:2  
郭毅  李慧 《中国现代医学杂志》2005,15(17):2561-2563
目的 探求冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取。方法 取手术切除的5例患者的卵巢皮质,放入1.5mol/L的二甲基亚砜+10%血清中,应用可控程序冻冰仪逐渐降温,移入液氮中冻存。3个月后,将融解的卵巢皮质移植入90只裸鼠皮下,注射hFSH12周,刺激卵泡生长。注射hCG36h后,用18号针头穿刺提取卵细胞。结果 卵巢直径为3~9mm,穿刺获19个卵细胞,放入TC-199培养基,加20%胎牛血清。25mmol/L丙酮酸,75mIU/mLFSH和LH培养,获15个分裂中期的次级卵母细胞。结论 人卵巢组织冻融后可异体移植生长,且其卵细胞可在体外发育成熟。  相似文献   

14.
人类卵子体外成熟及其胚胎冷冻复苏研究   总被引:1,自引:1,他引:1  
目的:探讨取卵周期准备、卵泡发育状态、培养液成分对未成熟卵的获取率、体外成熟率、受精率、胚胎质量、胚胎移植后成功率及其胚胎冷冻复苏移植的影响。方法:19例进行卵子体外成熟的不孕不育患者为研究对象。其中1例为自然周期,14例为促性腺激素(Gn)诱导排卵周期,4例常规控制性促排卵(COS)周期;分别以TCM 199或人输卵管液(HTF)为基础培养液,进行卵子体外成熟培养。结果:当取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,获卵率、受精率和胚胎质量下降;TCM 199组优质胚胎的形成率显著高于HTF组(P<0.01)。IVM胚胎经冷冻复苏、胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。结论:在IVM周期取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,将影响胚胎着床率和累积妊娠率。TCM 199优于HTF培养液,能提高未成熟卵体外成熟后受精卵所形成胚胎的发育能力。IVM胚胎经冷冻复苏-胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。  相似文献   

15.
目的 观察核抑制剂(Roscovitine)对人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)安全性的影响.方法 获取促排周期的GV期未成熟卵随机分为两组,实验组(经二步法):未成熟卵母细胞先用含有200 vmol/LRoseovitine的培养液培养6 h,然后转入IVM成熟培养液培养24~36 h;对照组:直接用IVM成熟培养液培养24~36h.观察两组卵母细胞成熟情况并应用激光扫描共聚焦显微镜观察培养成熟后MⅡ期卵母细胞纺锤体和染色体的形态.结果 实验组共获未成熟卵母细胞61个,经体外成熟培养后50个卵成熟,其中39个卵可观察到纺锤体与染色体,纺锤体的形态异常者为15个,染色体异常者11个;对照组共获未成熟卵母细胞60个,经体外成熟培养后43个卵成熟,其中32个卵可观察到染色体与纺锤体,纺锤体形态异常者14个,染色体异常者11个.结论 Roscovitine能可逆性抑制体外培养的人卵母细胞的核成熟,但未对纺锤体及染色体形态产生不良影响.  相似文献   

16.
在PBS 20?S 0.5mol/L蔗糖中加2.0和3.0mol/L甘油组的胚胎发育率分别为51.4%和44.4%,冷冻效果明显好于其它浓度甘油;在PBS 20?S十2.0mol/L甘油中,加0.5mol/L蔗糖组的胚胎发育率为47.7%,冷冻效果好于其它浓度蔗糖;慢速降温冷冻组的胚胎发育率为48.8%,效果明显好于快速冷冻法;在各期胚胎冷冻后的发育率中,2细胞胚最低,桑椹胚的存活率明显高于4细胞胚和早期囊胚;冷冻保存后体外受精胚的发育率显著低于体内受精胚:112枚经冷冻保存的体外受精胚移植给受体鼠,2/9妊娠。  相似文献   

17.
人胎儿卵巢组织异种移植后卵母细胞的发育及成熟能力   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨人胎儿卵巢组织冷冻复苏、体外培养和异种移植后卵母细胞的发育和成熟情况。方法取5例胎龄20周引产的胎儿卵巢,采用丙二醇慢速冷冻保存,复苏后在组织培养条件下进行体外培养,6d后移植到免疫缺陷小鼠的肾被膜下,应用卵泡刺激激素作用23周后取出卵巢组织,机械法取出窦卵泡内的卵母细胞,结合体外成熟培养,观察卵子成熟情况,并通过移植前后组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化观察卵泡发育情况。结果冷冻复苏组织和新鲜卵巢组织中各期卵泡的构成比之间差异无显著性(P>0.05);培养组织与新鲜组织和冻融组织相比,增殖期卵泡的比例显著增加(P<0.05);移植组织与新鲜组织、冻融组织和培养组织相比,增殖期卵泡比例亦显著增加(P<0.05)。各组织中原始卵泡均未见PCNA阳性表达,其表达最早出现于初级卵泡,新鲜组织和冻融组织中偶可见PCNA阳性表达,而培养组织和移植组织中可见明显的PCNA阳性表达。从移植卵巢的窦卵泡中获得未成熟卵子42个,经体外成熟培养有21.43%的卵子可发育到MII期。结论人胎儿卵巢组织能耐受冻融、组织培养和移植过程,其卵泡能够重新生长发育,恢复内分泌功能,且不影响卵母细胞的发育及成熟能力。  相似文献   

18.
目的 :对非洲爪蟾卵母细胞表达的ATP和GABA激活电流进行比较。方法 :包括mRNA和cDNA的提取、卵母细胞的微量注射及双电极电压钳技术。结果 :①在表达P2X2 或P2X4 的卵母细胞上 ,外加ATP可分别诱导一被Zn2 + 增强的内向电流。②在表达鸡脑mRNA的卵母细胞上 ,可记录到GABA激活电流 ,且此电流可被bicucul line(一种GABAA 受体选择拮抗剂 )所阻断。③在表达了人视网膜 ρ1亚基cRNA的卵母细胞上 ,外加GABA可引起一不被bicuculline阻断的内向电流 ,后者可被I4AA(一种GABAC 受体特异性拮抗剂 )阻断。④在具有滤泡膜的卵母细胞上可记录到 3种形式的ATP激活电流和一外向的慢的GABA激活电流。⑤在除去滤泡膜的卵母细胞上均未记录到ATP和GABA激活电流。结论 :卵母细胞上存在内源性的嘌呤受体、GABAB 和GABAC 受体 ;且此内源性受体存在于滤泡膜上 ;P2X2 、P2X4 嘌呤受体及GABAA 和GABAC 受体均可在卵母细胞上表达 ,表达的受体所介导的激活电流与内源性受体介导的激活电流有明显区别  相似文献   

19.
 【目的】 探讨人类成熟卵丘细胞在未成熟卵母细胞体外成熟培养中的作用,并建立一种简易的实施技术&#65377;【方法】 在控制性促排卵周期有未成熟卵母细胞时,将同周期成熟卵丘复合体切出部分卵丘细胞,用1 mL注射器抽打分散细胞,贴壁培养&#65377;113个治疗周期中,298枚生发泡期卵母细胞经3种不同培养液(A&#65380;B&#65380;C)体外成熟培养(同一病人的生发泡期卵被随机分到某同一组中):第1组28个周期中73枚(A液):基础培养液+卵泡液;第2组40个周期中115枚(B液):A液 + 分散贴壁的卵丘细胞;第3组45个周期中110枚(C液):A液 + 分散贴壁的卵丘细胞 + 促卵泡生成激素 + 表皮生长因子&#65377;观察其成熟率&#65380;受精率及可用胚胎获得率等&#65377;【结果】 24 h成熟率:组间比较有显著性差异(A: 45.2%, B: 61.7%, C: 78.2%, P < 0.05); 25 ~ 48 h无显著意义&#65377;成熟卵的正常受精率在59% ~ 67%之间,组间比较无显著差异;与第1组(54.5%,11.0%)相比,第2组(83.3%,25.2%)&#65380;第3组(90.7%,37.3%)的卵裂率和挽救率均有显著性差异(P < 0.05),可用胚胎获得率组间比较依次呈现上升趋势(66.7%,82.9%,83.7%)&#65377; 【结论】 来自控制性促排卵周期的成熟卵丘细胞经简易吹打分散后贴壁培养,可能能协同卵泡液中或外加的生长因子,促进未成熟卵母细胞的体外成熟,而本研究技术简易有效,可用于挽救促排卵周期的未成熟卵&#65377;  相似文献   

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